ICS65.020.30 CCSB43DB61 陕西省地方标准 DB61/T1521.3—2021 奶山羊养殖技术规范 第3部分：双基因良种选育 TechnicalSpecificationsforDairyGoatFarming— Part3:Double-genebreeding 2021-12-17发布 2022-01-17实施 陕西省市场监督管理局发布 DB61/T1521.3—2021 I目  次 前  言.............................................................................................................................................................II 1范围.................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.............................................................................................................................................1 3术语和定义.....................................................................................................................................................1 4选育方法.........................................................................................................................................................1 5选择程序.........................................................................................................................................................2 附录A（资料性）扩充特异引物...................................................................................................................3 DB61/T1521.3—2021 II前  言 DB61/T1521《奶山羊养殖技术规范》分为如下部分： ——第1部分：关中奶山羊良种鉴定； ——第2部分：引进奶山羊良种鉴定； ——第3部分：双基因良种选育； ——第4部分：种公羊饲养管理； ——第5部分：后备羊培育； ——第6部分：泌乳奶山羊健康养殖； ——第7部分：人工授精； ——第8部分：胚胎移植； ——第9部分：苜蓿半干青贮； ——第10部分：疫病防控； ——第11部分：机器挤奶。 本部分为DB61/T1521的第3部分。 本文件根据GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规则 起草。 本部分由西北农林科技大学提出。 本部分由陕西省农业农村厅归口。 本部分起草单位：西北农林科技大学、杨凌职业技术学院、陕西省动物研究所、陕西省畜牧技术推 广总站、陕西关中奶山羊产业研究院、陕西省奶山羊养殖工程技术研究中心、陕西省羊产业技术创新与 产业发展战略联盟、陇县畜产局。 本部分主要起草人：安小鹏、侯金星、曹芳君、杨少华、李广、宋宇轩、田秀娥、付明哲、张磊。 本部分由西北农林科技大学负责解释。 本部分首次发布。 联系信息如下： 单位：西北农林科技大学 电话：029-87092102 地址：陕西杨凌示范区西农路22号 邮编：712100 DB61/T1521.3—2021 1奶山羊养殖技术规范第3部分：双基因良种选育 1范围 本部分规定了高产良种奶山羊选育方法、选育程序内容要求。 本部分适用于以催乳素受体和促黄体素beta亚基基因选育关中奶山羊、莎能奶山羊等良种奶山羊。 2规范性引用文件 本部分无规范性引用文件。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 3.1 基因gene 位于细胞染色体上具有遗传效应的DNA片段，是调控生物性状的基本遗传单位。 3.2 催乳素prolactin 为动物垂体分泌的一种蛋白质激素，由199个氨基酸残基组成。 3.3 受体receptor 可与细胞外专一信号分子（配体）结合引起细胞反应的蛋白质，分为细胞表面受体和细胞内受体。 3.4 催乳素受体prolactinreceptor 催乳素受体位于山羊的16号染色体上，分为长受体(LF)、中受体(IF)及短受体(SF1a及SF1b)。 不同催乳素受体由同一基因编码，经转录后选择性剪接而生成。PRLR是调控山羊产奶性能和产羔性能 的重要候选基因。 4选育方法 4.1筛选高产个体 筛选头胎产羔数达到2只以上的奶山羊，以及产奶第3个月日均产奶量达到4kg以上的高产个体作 为功能基因检测的对象。 DB61/T1521.3—2021 24.2检测高产个体基因型 采用基因测序的方法对高产个体中的催乳素受体基因（PRLR）和促黄体素beta亚基（LHβ）基因 进行基因分型。 5选择程序 5.1血液采集 从山羊的颈静脉采取1mL的血样或从耳部采取0.5g的耳组织。 5.2DNA提取 利用DNA提取试剂盒从血液或耳组织中提取基因组DNA。 5.3扩增目的片段 根据催乳素受体基因（PRLR）和促黄体素beta亚基（LHβ）基因的DNA序列分别设计扩增PRLR 基因外显子9和LHβ基因5′非翻译区的特异引物（附录A）。 5.4检测目的片段 利用2%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增的目的片段。 5.5DNA测序 利用DNA测序技术检测基因的分型和统计不同个体的基因型。 5.6基因型选配 从5.5中检测的个体中筛选具有催乳素受体基因（PRLR）的GG基因型以及促黄体素beta亚基 （LHβ）基因的CC基因型的优秀个体进行杂交或者选同交配。 5.7基因型的横交固定 在不同基因型杂交后代中筛选同时具有GG和CC基因型的个体进行横交固定。 5.8纯合基因型个体组群 在横交固定的个体中检测和筛选基因型聚合纯化在一起的个体组群。 5.9稳定基因型 采用基因型选同交配的方法稳定基因型，从而形成产羔率和产奶量高的奶山羊核心群。 5.10选育高产奶山羊新品种（系） 对含有以上2个基因型的个体进行遗传稳定性和生产性能稳定性的检测，结合常规育种方法，选育 出高产奶山羊新品系或新品种。A DB61/T1521.3—2021 3附录A （资料性） 扩充特异引物 A.1双基因型聚合育种技术用的分子生物学技术 聚合酶链式反应（PCR），DNA测序，基因克隆，琼脂糖凝胶电泳。 A.2双基因型聚合育种技术用统计方法 多因素方差分析和线性回归模型。 A.3双基因型聚合育种技术所需仪器设备 PCR扩增仪（可设定温度梯度）； 电子天平（精度为0.0001g）； 常温高速离心机（最大转速为15300rpm）； 低温冷冻离心机（能设定为4℃）； 移液器（通用标准吸头有6个规格:10ul、20ul、100ul、200ul、1000ul、5000ul）； 高压灭菌锅（工作蒸气压力0.5MPa）； 凝胶成像仪（提供白光和紫外光以及蓝光光源进行拍摄凝胶）； 水浴锅（可设定恒定温度）； 垂直电泳槽（用于蛋白样品的电泳）； 稳压稳流电泳仪（用于DNA样品的电泳）； 超低温冰箱（能设定-80℃）； 脱色摇床（能设定恒定速率摇动）； 恒温培养箱（设置为37℃）； 超净工作台； 纯水仪。 A.4特异引物 PCR扩增引物见表A.1 表A.1PCR扩增引物 基因位点 引物序列 退火温度（oC） 片段大小（bp） PRLR基因外显子9F:5′-CTTACCACAACATTGCTGAC-3′ 57 465 R:5′-CCTTGGCTGGATTCTATGG-3′ LHβ基因5′非翻译区F:5′-ACCAGATCTTGGCCCTTG-3′ 57 291 R:5′-CAAAGCCTGAGTCCAAC-3′