ICS 65.150 B 52 吉 DB 22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 1882—2013 鱼类寄生虫性疫病诊断技术规程 Technique Regulation for Diagnosis of Parasite Epidemics of Fish 2013 - 09 - 25 发布 吉林省质量技术监督局 2013 - 12 - 01 实施 发 布 DB22/T 1882—2013 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由吉林省水利厅提出并归口。 本标准起草单位：吉林省水产技术推广总站。 本标准主要起草人：李兆君、刘丽晖、李海波、刁海生、刘革、孙占胜、楚国生、杨质楠、刘和、 薛加忠、矫珑、闫宏、武薇。 I DB22/T 1882—2013 鱼类寄生虫性疫病诊断技术规程 1 范围 本标准规定了小瓜虫病、粘孢子虫病、三代虫病、指环虫病疾病诊断的技术要求。 本标准适用于鱼类寄生虫性疫病的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SC/T 7014-2006水生动物检疫实验技术规范 3 基本要求 3.1 仪器和材料 3.1.1 仪器 普通光学显微镜、放大镜、解剖镜。 3.1.2 材料 载玻片、盖玻片、镊子、手术刀、手术剪、解剖针、吸水纸、培养皿、滴管、解剖盘等。 3.2 试剂 蒸馏水、4%～5%和10%的福尔马林、70%酒精、硝酸银、甘油胶胨、肖氏液、聚乙烯醇。 3.3 采样量 应符合SC/T 7014-2006的规定。 3.4 样品及运输 用于实验室检查的病鱼最好是活体，运输时应在采集的病鱼中加注原池水进行活体运输。每个容器 只装运同一种病鱼送至实验室。运输过程中应采取充氧、降温等措施。 3.5 病原体记数 按不同感染部位采集组织，进行观察。记录显微镜检查时的倍数和该倍数下的虫体数量。孢囊用数 字说明，虫体数为同一玻片中3个视野的平均数。 4 小瓜虫病 1 DB22/T 1882—2013 4.1 病原种类特征 参见附录A。 4.2 疾病诊断 4.2.1 目检 检查鱼体，病鱼体色发黑，消瘦，游动异常，体表或鳃上可见1 mm左右的小白点，病情严重时，鱼 体表伴大量粘液，用镊子刮下白点或粘液，放在白磁盘上，加上一滴生理盐水，静置1 min～2 min，在 光亮的地方仔细观察，如果见到一个个白色小圆球在慢慢地游动，且大多数集中在水滴的边缘，根据上 述的症状可以初步确诊。 4.2.2 镜检 4.2.2.1 体表 用解剖刀刮取体表两侧粘液，置于载玻片上，滴一滴蒸馏水，用镊子将组织粘液分散，盖上盖玻片， 用拇指轻轻压片，在显微镜下检查。 4.2.2.2 鳍 ——目检正常的鱼，剪下各鳍，置于载玻片上，滴一滴蒸馏水，解剖镜下检查。 ——目检鱼体各鳍如有溃烂或白点，用镊子刮取溃烂或白点部位，置于载玻片上，加一滴蒸馏水， 用盖玻片盖上轻压，显微镜检查。 4.2.2.3 鳃 ——用剪刀将左右两边的鳃完整地取出，放在培养皿里（要分开放置），并附上左右标记。剪取一 小块鳃组织（应从每一边鳃的第一片鳃片接近两端的位置剪取），放在载玻片上，滴入一滴生 理盐水，盖上盖玻片轻压，在显微镜下检查。 ——如鳃上肉眼可见白点或孢囊，则用镊子刮取白点或孢囊，或取整片鳃丝压片，显微镜下检查。 4.3 结果判定 结合镜下观察，40倍显微镜下平均每视野内小瓜虫计数达到10个及10个以上时，判定为小瓜虫病； 小瓜虫个体计数不足10个时，判定为小瓜虫感染。 5 粘孢子虫病 5.1 病原种类特征 粘孢子虫虽然种类很多，但其孢子的共同特征见附录A。 5.2 疾病诊断 5.2.1 目检 粘孢子虫的多数种类，寄生于鱼的体表、鳃、肠道及体腔，都表现出肉眼可见的症状，即白点状或 白色的瘤状孢囊，孢囊形状和大小不规则，颜色灰白而不透明。用镊子取下一个孢囊放在载玻片上，滴 一滴蒸馏水，用盖玻片盖上轻压，如孢囊破裂并流出乳白色液体，可初步诊断为粘孢子虫病。 2 DB22/T 1882—2013 5.3 镜检 在400倍显微镜下，压破的孢囊液体中清晰可见孢子，可诊断为粘孢子虫病。一个孢囊中有成千上 万个孢子虫。 5.3.1 体表 检查体表，用解剖刀刮取鳞片下的瘤状物，置于载玻片上，加一滴蒸馏水，盖上盖玻片轻压，显微 镜观察。 5.3.2 鳍 检查方法参见4.3.2，镜检倍数为400倍。 5.3.3 鳃 检查方法参见4.3.3，镜检倍数为400倍。 5.3.4 体内 打开鱼体腹腔，仔细观察显露出的部位有无可疑病变。如发现白点，或较大孢囊，有可能是粘孢子 虫寄生。取载玻片一张，滴一滴生理盐水，用镊子刮取白点部位或孢囊置于载玻片上，盖上盖玻片，并 轻压玻片，见孢囊破裂后，显微镜检查。 5.3.5 肠道 ——将肠道外壁上所有脂肪去除干净，把肠前后伸直摆在解剖盘上。将肠分为前、中、后三段，各 取一段，用剪刀从与肠平行的方向剪开一个小小切口，用镊子从切口上取一小滴内容物放在载 玻片上，滴一滴生理盐水，盖上盖玻片，进行镜检，每部分同时检查两片标本。 ——剪开肠道后，如见白点或孢囊附着，直接用解剖刀刮取白点或孢囊于在玻片上，压片后，显微 镜观察。 5.4 病原体记数及结果判定 5.4.1 病原体记数 5.4.1.1 计数符号用“+”表示：“+”表示有；“++”表示多；“+++”表示很多。 5.4.1.2 高倍显微镜 400 倍一个视野下，有 1 个～20 个虫体时记“+”，21 个～50 个虫体时记“++”， 50 个以上的虫体时记“+++”。 5.4.2 结果判定 检出粘孢子虫则判定为粘孢子虫病。 6 三代虫病 6.1 病原种类特征 见附录A。 6.2 目检 3 DB22/T 1882—2013 当虫体大量寄生时，病鱼体表可见一层灰白色的粘液，鱼体失去光泽，游动极不正常。 6.3 镜检 应符合SC/T 7014-2006的规定 6.4 结果判定 目检症状结合镜下观察，40倍显微镜下平均每视野内三代虫计数达到5个及5个以上时，判定为三代 虫病，三代虫计数不足5个时，判定为三代虫感染。 7 指环虫病 7.1 病原种类特征 参见附录A。 7.2 疾病诊断 同6.2。 7.3 结果判定 目检症状结合镜下观察，40倍显微镜下平均每视野内指环虫计数达到5个及5个以上时，判定为指环 虫病，指环虫计数不足5个时，判定为指环虫感染。 4 DB22/T 1882—2013 附 录 A （资料性附录） 病原种类特征 A.1 多子小瓜虫 A.1.1 成虫期 虫体一般呈卵形或球形，大小(350~800)µm×(300~500) µm，胞口在接近前端的腹面上。全身密布 短而均匀的纤毛，胞口位于体前端腹面，围口纤毛由5～8 行纤毛组成，作反时钟方向转动，一直到胞 咽；大核香肠状或马蹄状，小核紧帖大核上，细胞质有很多小的伸缩泡和一些食物粒。 A.1.2 幼虫期 身体一般呈椭圆形，随着发育时间的延长身体逐渐变长，变成扁鞋底状，在前端有一乳头状突起， 叫钻孔器，前端较圆，除身体后端有1根特长的尾毛外，周身长着长短一致的纤毛。体前端有1 个大的 伸缩泡。大小为（33～54）µm×（19～32）µm。在腹面稍前的位置，有1个近似“6”字形的小胞口。 在身体前半部有一个大的伸缩泡。 A.2 粘孢子虫 粘孢子虫虽然种类很多，但其孢子的共同特征是： 1．每一孢子有2 块～7 块几丁质壳片（多数种类为2 片），两壳连接处叫缝线，缝线由于粗厚或 突起呈脊状结构，称缝脊；有缝脊的一面称缝面，没有缝脊的一面称壳面。缝脊大多数种类是直的，少 数种类弯曲成“S”形； 2．有些种类的壳上有条纹、褶皱或尾状突起； 3．第一孢子有1 个～7 个球形、梨形、瓶形的极囊（多数种类有2 个极囊），通常位于孢子前端， 有的种类位于孢子两端。极囊之间有的种类还有“V”形或“U”形突起，称为囊间突。极囊里有极丝， 作螺旋状盘曲，受到刺激后，能通过极囊孔射出，极丝呈丝状或带状。 4．极囊以外充满胞质，内有2 个胚核，有的种类在胞质里还有1 个嗜碘泡。 A.3 三代虫 三代虫属（Gyrodactylus spp.）的种类。属三代虫目（Gyrodactylidea）、三代虫科（Gyrodactylidae）。 虫体略呈纺锤形，长度一般为0.3 mm～0.8 mm，背腹扁平，身体前端有一对头器，后端的腹面有一个 圆盘状的后固着器。后固着器由1 对锚钩及其背腹连结棒和8 对边缘小钩组成，用以固着在宿主鱼的寄 生部位。锚钩、连结棒、边缘小钩都是几丁质构造，其结构和形态是分类的依据。三代虫为雌雄同体， 胎生。在后固着器之前按前后顺序排列着一个卵巢和一个精巢。卵巢之前是子宫，内有一个椭圆形的胚 胎。胚胎内往往还有第二代和第三代胚胎，所以称为三代虫。 A.4 指环虫 指环虫（Dactylogyrus spp.），属指环虫目（Dactylogyridea）、指环虫科（Dactylogyridae）。指 环虫属种类众多，致病种类主要有：页形指环虫（D. lamellatus），寄生于草鱼鳃、皮肤和鳍。虫体 5 DB22/T 1882—2013 扁平，大小为（0.192 mm～0.529 mm）×（0.072 mm～0.136 mm）。具4 个眼点，2 对头器。肠支在体 末端相连成环。后固着器上有1 对中央大钩，中央大钩具1 对三角形的附加片（或称副片）。联结片长 片状，辅助片T 形。边缘小钩不大对，发育良好。精巢1 个，在虫体中部稍后，贮精囊附近有摄护腺； 交接器结构较复杂，由交接管和支持器两部分组成；卵巢1 个，位于精巢之前；生殖孔在腹面，近肠管 分支处；阴道口在侧面，附近有角质的支持构造；阴道接膨大的受精囊，再由此有一管接输卵管；梅氏 腺在子宫基部的周围；卵黄腺发达，在虫体的两侧和肠管的周围。 6