ICS 65.040 C 53 备案号：37945-2013 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 1826—2013 饲料中非诺特罗的测定 气相色谱-质谱法 Determination of Fenoterol in feed - GCMS 2013 - 05 - 15 发布 吉林省质量技术监督局 2013 - 09 - 01 实施 发 布 DB22/T 1826—2013 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口 。 本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。 本标准主要起草人：李宁、邴炜、华蕾、刘斌、石金娥等。 I DB22/T 1826—2013 饲料中非诺特罗的测定 气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了预混料、配合料和浓缩料中非诺特罗含量的气相色谱-质谱测定方法。 本标准适用于预混料、配合料和浓缩料中非诺特罗的测定。 本方法中非诺特罗的检出限为2.0 μg/kg，定量限为10.0 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 样品用乙酸钠缓冲溶液提取后, 依次经液-液萃取、阳离子交换柱净化，再经双(三甲基硅烷基)三 氟乙酰胺-三甲基氯硅烷(BSTFA-TMCS)衍生，气相色谱-质谱检测，内标法定量。 4 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。 甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1）：色谱纯。 乙酸乙酯（C2H5OH，CAS：141-78-6）：色谱纯。 异丙醇（C4H9OH，CAS：67-63-0）：色谱纯。 盐酸（HCL，CAS：7647-01-0）：优级纯。 氨水（NH3OH，CAS：1336-21-6）。 无水氯化钠（NaCL，CAS：7647-14-5）。 乙酸钠（C2H5Na，CAS：127-09-3）：优级纯。 4.8 冰乙酸（CH3COOH，CAS：64-19-7）：优级纯。 4.9 甲苯（C6H5CH3，CAS：108-88-3）：优级纯。 4.10 氦气，纯度 99.999 %以上。 4.11 衍生试剂：双（三甲基硅烷基）氟乙酰胺（BSTFA）-三甲基氯硅烷（TMCS）=99：1，-20 ℃以下 冷冻保存。 4.12 2 mol/L 盐酸溶液：取盐酸（4.4）18 mL，用水定容至 100 mL，摇匀。 4.13 30 mmol/L 盐酸：用水稀释适量盐酸（4.4）并定容。 4.14 0.2 mol/L 乙酸钠缓冲溶液：按实际使用量称取适量乙酸钠（4.7）溶于水中后定容。 4.15 乙酸乙酯-异丙醇溶液：乙酸乙酯（4.2）：异丙醇（4.3）=5：1。 4.16 5 %氨化甲醇：准确量取 5 mL 氨水（4.5），用甲醇（4.1）定容至 100 mL。 1 DB22/T 1826—2013 4.17 非诺特罗标准储备液：准确称取 50 mg 非诺特罗标准物质于 50 mL 棕色容量瓶，用甲醇（4.1） 溶解并定容，该溶液浓度为 1 g/L。置于 4 ℃冰箱中保存，有效期 6 个月。 4.18 非诺特罗标准使用液：将标准储备液用甲醇（4.1）配制成 0.5 mg/L 的非诺特罗标准使用液，现 用现配。 4.19 克伦特罗内标标准储备液：准确称取 50 mg 克伦特罗标准物质于 50 mL 棕色容量瓶，用甲醇（4.1） 溶解并定容，该溶液浓度为 1 g/L。置于 4 ℃冰箱中保存，有效期 6 个月。 4.20 克伦特罗内标标准使用液：将标准储备液用甲醇（4.1）配制成 2.0 mg/L 的标准使用液，现用现 配。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 单四极杆气相色谱-质谱联用仪，配 EI 源。 具塞聚四氟乙烯离心管：50 mL。 涡旋混合器。 恒温箱，控温精度±2 ℃。 离心机。 电子天平，感量 0.0001 g。 氮吹仪。 5.8 超声波清洗仪。 5.9 250 mL 鸡心瓶。 5.10 SCX 小柱：Sep Pak 小柱，500 mg，3 mL。 6 采样 选取有代表性饲料样品至少500 g，四分法缩减到100 g，粉碎，全部通过0.42 mm试验筛，混匀， 装入密闭容器中，避光保存，备用。 7 分析步骤 7.1 提取 称取5 g（精确至0.01g）混匀样品于50 mL具塞聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸钠缓冲溶液（4.14） 20 mL，用2 mol/L盐酸（4.4）调节pH值至5.2，添加50 μL 2.0 mg/L克伦特罗内标，涡旋3 min，超声 30 min，于离心机5000 r/min离心5 min。上清液移入另一50 mL具塞聚四氟乙烯离心管中，在残留样中 分2次加入10 mL乙酸钠缓冲溶液（4.14），重复以上提取过程，合并上清液于同一50 mL具塞聚四氟乙 烯离心管中，加入5 g氯化钠（4.6）和15 mL乙酸乙酯（4.2）溶液，涡旋5 min，5000 r/min离心10 min， 分层后将上层有机溶剂层移入250 mL鸡心瓶中，在下层水相中分2次加入10 mL乙酸乙酯-异丙醇（4.15）， 涡旋振荡3 min，5000 r/min离心5 min，分层后将上层有机溶剂合并于上述250 mL鸡心瓶中，45 ℃旋 转蒸干，用3 mL乙酸钠缓冲溶液（4.14）溶解残渣，备用。 7.2 净化 SCX阳离子交换柱依次用甲醇（4.1）、超纯水、30 mmol/L的盐酸（4.13）各3 mL活化。将乙酸钠 提取液（7.1）移入固相萃取柱中，用1 mL乙酸钠缓冲溶液（4.14）淋冼鸡心瓶，洗液过柱，弃去流出 2 DB22/T 1826—2013 液，依次用6 mL超纯水、6 mL甲醇（4.1）淋洗小柱，弃去流出液，最后用6 mL氨化甲醇（4.16）洗脱 小柱，收集洗脱液于10 mL衍生管中。 7.3 衍生 在50 ℃下用氮吹仪吹干洗脱液（7.2），迅速加入100 μL BSTFA-TMCS（4.11）衍生试剂，盖紧螺 盖，涡旋1 min，于70 ℃±2 ℃恒温箱中衍生40 min，取出后冷却至室温，50 ℃下用氮吹仪吹干，以 甲苯（4.9）定容至0.5 mL，进行气相色谱-质谱测定。同时用非诺特罗标准使用液做系列同步衍生。 7.4 测定 7.4.1 仪器条件 色谱柱：用于气相色谱-质谱仪的5%聚硅氧烷毛细柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）或性能相当者； 载气：氦气（4.10）； 流速：1.0 mL/min，恒流模式； 进样口温度：230 ℃； 进样量：2 μL，不分流； 升温程序：80 ℃（保持1min），以30 ℃/min升至200 ℃（保持5 min），再以15 ℃/min升至280 ℃ （保持5 min）； 离子源（EI）温度：230 ℃； 离子源（EI）电子轰击能量：70 eV； 接口温度：280 ℃； 溶剂延迟：10 min； 四极杆温度：170 ℃； 质量扫描范围：50～400 u； 选择离子监测方式（SIM）； 监测离子（m/z）：克伦特罗86*、212、258；非诺特罗73*、236、356；其中带*离子为定量离子。 7.4.2 气相色谱-质谱测定 7.4.2.1 定性测定 在相同试验条件下，试样中待测物与同时检测的标准物质的保留时间之差在±2s之内，并且所选择 的离子相对丰度比符合表1要求，可判定为试样中存在该药物残留。 表1 试样离子丰度比与标准物质离子丰度比的允许偏差范围 占基峰相对丰度（％） 最大允许偏差（％） ＞50 ±10 ＞20～50 ±15 ＞10～20 ±20 ≤10 ±50 7.4.2.2 定量测定 以峰面积按内标法进行单点或多点校准定量，标准工作液和试样液中非诺特罗响应值均应在仪器检 测线性范围内。标准物质总离子流图参见附录A；标准物质质谱图参见附录B。 3 DB22/T 1826—2013 8 结果计算 试样中非诺特罗的含量按式（1）计算： X = A ´ V ´ 1000 .................................... (1) m ´ 1000 式中： X ——试样中非诺特罗的含量，单位毫克每千克（mg/kg）； A ——经计算得试液中非诺特罗的含量，单位毫克每升（mg/L）； V ——样品最终定容体积，单位毫升（mL）； m ——样品取样质量，单位克（g）； 1000 ——单位换算系数。 计算结果保留小数点后两位有效数字。 9 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%。 4 DB22/T 1826—2013 AA 附 录 A （资料性附录） 样品中非诺特罗标准物质总离子流图 1——克伦特罗 2——非诺特罗 图A.1 样品中非诺特罗标准物质总离子流图 5 DB22/T 1826—2013 BB 附 录 B （资料性附录） 样品中非诺特罗衍生物的质谱图 图B.1 样品中非诺特罗衍生物的质谱图 _________________________________ 6