ICS 65.120 B 46 备案号：35986-2013 吉 林 DB22 省 地 方 标 准 DB 22/T 1695—2012 饲料添加剂 L-赖氨酸盐酸盐测定 Determination of L-Lysine monohydrochloride for feed grade 2012 - 12 - 21 发布 吉林省质量技术监督局 2013 - 01 - 01 实施 发 布 DB22/T 1695—2012 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、吉林大学。 本标准主要起草人：李媛媛、关树文、张庆波、安伟、赵立群、任明月、王伟、王宇、柴竹林、杨 波、王莹、吕航、张文、韩晓红、姚忱。 I DB22/T 1695—2012 饲料添加剂 L-赖氨酸盐酸盐测定 1 范围 本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定饲料添加剂L-赖氨酸盐酸盐的方法。 本标准适用于饲料添加剂L-赖氨酸盐酸盐的含量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用盐酸溶液溶解、稀释后，用氨基酸自动分析仪测定赖氨酸的量，计算赖氨酸盐酸盐的含量。 4 试剂与材料 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；除另有说明外，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 盐酸。 4.2 赖氨酸标准溶液[c(C6H14N2O2)=2.5 µmol/L]。 4.3 盐酸溶液[c(HCl)=0.1mol/L]：吸取 8.3 mL 盐酸(4.2)置于 1000 mL 容量瓶中，用水稀释后，定 容至刻度。 4.4 盐酸稀溶液[c(HCl)=0.02mol/L]：吸取 1.67 mL 盐酸(4.2)置于 1000 mL 容量瓶中，用水稀释后， 定容至刻度。 4.5 赖氨酸标准工作溶液[c(C6H14N2O2)=2 nmol/L]：取 1 mL 赖氨酸标准溶液(4.2)用盐酸溶液(4.3) 定容至 25 mL 后；取 1 mL 用盐酸溶液(4.3)定容至 50 mL。 4.6 0.45 µm 微孔滤膜，水相。 5 5.1 5.2 5.3 5.4 6 仪器 氨基酸自动分析仪。 超声波仪。 分析天平：感量 0.1 mg。 粉碎机。 试样制备 1 DB22/T 1695—2012 取具代表性的饲料样品，用四分法缩减分取25 g左右，粉碎并过0.45mm孔径筛，充分混匀后装入磨 口瓶中备用。 7 分析步骤 7.1 样品处理 称取50 mg的试样(精确至0.1 mg)于50 mL比色管中，加30 mL盐酸溶液(4.3)，超声提取30 min，转 移至50 mL容量瓶中，用盐酸稀溶液(4.4)定容后，再用盐酸稀溶液(4.4)进行10倍稀释上机测定。 7.2 测定 7.2.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下： a) 色谱柱：离子交换柱（4.6 mm×60 mm）； b) 反应器温度：135 ℃； c) 分离柱柱温：57 ℃； d) 缓冲液流速：0.400 mL/min； e) 反应液流速：0.350 mL/min。 7.2.2 色谱测定 按仪器说明书，调整好仪器操作参数，洗脱用缓冲液的 pH 和适当的分析程序参见附录 A，分别注 入赖氨酸标准工作溶液和制备好的试样，赖氨酸标准工作溶液色谱谱参见附录 B 中图 B.1 用氨基酸自 动分析仪以外标法分析测定试样中赖氨酸的量，计算赖氨酸盐酸盐的含量。 7.3 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 测定结果可由仪器工作站自动计算，也可按下式（1）计算： X= C ´ F ´V ´ M ´ 100 ................................. (1) m ´ 10 9 式中： X —样品中L-赖氨酸盐酸盐的含量，单位为克每百克（g/100g）； C —试样测定液中赖氨酸的量，单位为微摩尔每毫升（pmol/mL）； F —试样稀释倍数； V —试样的定容体积，单位为毫升（mL）； M —L-赖氨酸盐酸盐的摩尔质量，182.65，单位为克每摩尔（g/mol）； m —样品的质量，单位为克（g）； 9 10 ——将克换算成纳克的系数。 结果保留至一位小数。 9 精密度 2 DB22/T 1695—2012 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值10 %。 在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值10 %。 3 DB22/T 1695—2012 A A 附 录 A （资料性附录） 推荐性洗脱程序方案 表A.1 洗脱程序试剂用量 缓冲液流量 洗脱时间 min B1 B2 B3 B4 B5 B6 R1 R2 R3 0.0 100 0 0 0 0 0 50 50 0 2.5 100 0 0 0 0 2.6 0 100 0 0 0 0 5.0 0 100 0 0 0 0 5.1 0 0 100 0 0 0 13.8 0 0 100 0 0 0 13.9 0 0 0 100 0 0 29.0 0 0 0 100 0 0 29.1 0 0 0 0 0 100 32.0 0 50 50 0 32.1 0 0 0 100 33.0 0 0 0 0 0 100 34.0 0 100 0 0 0 0 34.1 100 100 0 0 0 0 37.0 0 0 100 37.1 50 50 0 50 50 0 53.0 4 % 100 0 0 0 0 0 DB22/T 1695—2012 B B 附 录 B （资料性附录） L-赖氨酸盐酸盐的测定色谱图 赖氨酸标准品色谱图见图B.1。 VIS 2 23.180 Lys 40 31.413 mV 40 Name 20 0 20 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 Minutes 图 B.1 氨基酸分析仪检测赖氨酸标准溶液的色谱图（100pmol/L） _________________________________ 5 mV VIS 1 Retention Time Name