ICS 65.120 B 46 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 1995—2014 饲料级氯化胆碱含量的测定 凯氏定氮法 Determination of the content of the feed grade choline chloride—Kjeldahl method 2014 – 02 – 28 发布 吉林省质量技术监督局 2014 – 04 – 30 实施 发 布 DB22/T 1995—2014 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：吉林产品质量监督检验院、吉林农业大学、吉林省农业机械研究院。 本标准主要起草人：潘明杰、王宇、金哲勇、华蕾、张涛、李滢倩、张爽、任明月、柴竹林、刘静 秋、王岩、康文欣、杨波、王洪昌、陈嵩嵩。 DB22/T 1995—2014 饲料级氯化胆碱含量的测定 凯氏定氮法 1 范围 本标准规定了凯氏定氮法测定饲料级氯化胆碱含量的测定方法。 本标准适用于以三甲胺盐酸盐水溶液与环氧乙烷反应生成的氯化胆碱水剂和以氯化胆碱水剂为原 料加入玉米芯粉、脱脂米糠、稻壳粉、麸皮、二氧化硅适于饲料用的赋形剂制成的氯化胆碱粉剂。 分子式：C6H14NClO 结构式： 相对分子质量：139.63（按2001年国际相对分子质量） 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 6682 分析实验室用水的规格和试验方法 3 原理 在催化加热条件下用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。碱化蒸馏使氨逸出，用硼酸溶液吸 收后，强酸标准滴定溶液滴定，测出总氮含量。减去氨态氮含量，乘以换算系数，计算出氯化胆碱含量。 4 试剂和材料 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的三级水。 硫酸（H2SO4 密度为 1.84 g/L）。 盐酸（HCl）。 95%乙醇（C2H5OH）。 硫酸铜（CuSO4·5H2O）。 硫酸钾（K2SO4）。 4.6 4.7 4.8 4.9 氢氧化钠（NaOH）。 硼酸（H3BO3）。 甲基红指示剂（C15H15N3O2）。 溴甲酚绿指示剂（C21H14Br4O5S）。 DB22/T 1995—2014 4.10 硫酸铵[(NH4) 2SO4]：优级纯，用前在（105±2）℃干燥至恒重。 4.11 盐酸溶液（1+1）： 量取 100 mL 盐酸（4.2），缓缓地注入 100 mL 水中，边加边搅拌。 4.12 硼酸溶液（20 g/L）：称取 20 g 硼酸（4.7），加水溶解后并稀释至 1000 mL。 4.13 氢氧化钠溶液（400 g/L）：称取 40 g 氢氧化钠（4.6）加水溶解后，放冷，并稀释至 100 mL。 4.14 甲基红乙醇溶液（1 g/L）：称取 0.1 g 甲基红（4.8），溶于 95%乙醇，用 95%乙醇稀释至 100 mL。 4.15 溴甲酚绿乙醇溶液（1 g/L）：称取 0.1 g 溴甲酚绿（4.9），溶于 95%乙醇，用 95%乙醇稀释至 100 mL。 4.16 硼酸溶液（全自动程序用）：称取 10 g 硼酸（4.7），加水溶解后并稀释至 1000 mL，加入溴甲 酚绿乙醇溶液（4.15）10 mL，甲基红乙醇溶液（4.14）7 mL，混匀后置于阴凉处，保存期为 1 个月。 4.17 硫酸[c(1/2 H2 SO4)=0.1000 mol/L]或者盐酸标准滴定溶液（0.1000 mol/L）：按照 GB/T 601 制备。 4.18 混合指示剂：10 mL 甲基红乙醇溶液（4.14）与 50 mL 溴甲酚绿乙醇溶液（4.15）临用时混合。 4.19 混合催化剂：0.4 g 硫酸铜（4.4），6 g 硫酸钾（4.5），磨碎混匀。 5 仪器设备 5.1 全自动凯氏定氮仪。 5.2 定氮蒸馏装置：如图 1 所示。 5.3 电子分析天平：感量为 0.1 mg。 5.4 凯氏消化炉。 6 试料制备 氯化胆碱粉剂 选取具有代表性的样品 200 g，粉碎后全部通过 40 目筛，充分混匀后装于密封容器 中，防止试样成分的变化。 氯化胆碱水剂 混匀后直接测定。 7 分析步骤 2 DB22/T 1995—2014 7.1 凯氏定氮法 7.1.1 试样的处理 氯化胆碱粉剂 称取在（105±2）℃下干燥 2 h 的试料约 1 g（精确至 0.2 mg），置于 250 mL 具塞三 角瓶中，加水 70 mL，摇匀，在 70 ℃水浴加热 15 min，塞紧瓶塞，在电动振荡器上振荡 10 min，将溶 液转移至 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用干燥的滤纸和漏斗过滤，弃去初滤液，准确吸 取两份 25.0 mL 滤液于凯氏烧瓶中。一份加入 6.4 g 混合催化剂（4.19），与试样混合均匀，再加入 10 mL 硫酸（4.1）和 2 粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加 强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少 1 h。 氯化胆碱水剂 称取两份约 0.25 g（精确至 0.2mg）试料，于凯氏烧瓶中，一份加入 6.4 g 混合催化 剂（4.19），与试样混合均匀，再加入 10 mL 硫酸（4.1）和 2 粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热， 开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加 热，至少 1 h。另一份用于氨态氮的测定，加入盐酸溶液（4.11）10 mL 震荡 10 min。 7.1.2 氨的蒸馏 将试料消化液冷却，加入 60～100 mL 蒸馏水，摇匀，冷却。用于氨态氮测定的可直接加入 60～100 mL 蒸馏水，摇匀。将蒸馏装置的末端浸入装有 25 mL 硼酸溶液（4.12）和 2 滴混合指示剂（4.18）的 锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶中加入 60 mL 氢氧化钠溶液（4.13），轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混 匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为 100 mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏 1～2 min， 并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 7.1.3 滴定 将蒸馏后的吸收液立即用硫酸或者盐酸标准滴定溶液（4.17）滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终 点，记录消耗标准滴定溶液的体积(V 2)。同时做试剂空白，记录消耗标准滴定溶液的体积(V1)。根据公 式（1）计算总氮（N）和氨态氮（N1）。 7.2 自动凯氏定氮仪法 7.2.1 试样的消煮 氯化胆碱粉剂 称取在（105±2）℃下干燥 2 h 的试料约 1 g（精确至 0.2 mg），置于 250 mL 具塞三 角瓶中，加水 70 mL，摇匀，在 70 ℃水浴加热 15 min，塞紧瓶塞，在电动振荡器上振荡 10 min，将溶 液转移至 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用干燥的滤纸和漏斗过滤，弃去初滤液，准确吸 取两份 25.0 mL 滤液于消化管中。一份加入 6.4 g 混合催化剂（4.19），与试样混合均匀，再加入 10 mL 硫酸（4.1），置于 420 ℃的消化炉上消化 1 h。另一份用于氨态氮的测定，加入盐酸溶液（4.11）10 mL 震荡 10 min。 氯化胆碱水剂 称取两份约0.25 g（精确至0.2 mg），于消化管中，一份加入6.4 g混合催化剂（4.19）， 与试样混合均匀，再加入10 mL硫酸（4.1），置于420 ℃的消化炉上消化1 h。另一份用于氨态氮的测定， 加入盐酸溶液（4.11）10 mL震荡10 min。 7.2.2 氨的蒸馏 采用全自动定氮仪，按仪器本身程序进行测定。仪器参考条件为硼酸吸收液（4.16）30 mL，蒸馏 水 80 mL，氢氧化钠溶液（4.13）60 mL，蒸馏时间 5 min。按照仪器自动计算总氮（N）和氨态氮（N1） 。 DB22/T 1995—2014 7.3 蒸馏步骤的验证检验 精确称取0.2 g硫酸铵（4.10），代替试样，按7.1.2或7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为 (21.19±0.2)%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定每个步骤是否正确。 8 结果计算 以质量百分数（%）表示的氮含量 X 按式（1）计算： N= (V2 - V1 ) ´ C ´ 0.0140 ´ 100 ………………………… （1） m 式中： N ——试料中的氮含量，单位为克每百克（%） 。 V2 ——滴定试样时所需标准酸溶液体积，单位为毫升（mL）； V1 ——滴定空白时所需标准酸溶液体积，单位为毫升（mL） ； C ——硫酸或者盐酸标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； m ——试样质量，单位为克（g） ； 0.0140——1.0 毫升硫酸[c(1/2H2SO4)=1.000 mol/L]或者盐酸[c(HCl)=1.000 mol/L]标准滴定溶液 相当的氮的质量，单位为克（g） ； 以质量百分数（%）表示的氯化胆碱含量 Y 按式（2）计算： Y =（N -N1）´ 9.97 ………………………… （2） 式中： Y ——试料中氯化胆碱的含量，单位为克每百克（%） 。 N ——试料中总氮的含量，%； N1——试料中氨态氮的含量，% 9.97——氮换算成氯化胆碱的系数。 取重复性条件下两次结果的算术平均值作为测定结果，结果保留三位有效数字。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的2％。 4