ICS 11.220 B 41 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 1892—2013 规模鸭场鸭坦布苏病毒病防控技术规程 Technology specification on prevention and treatment of duck tembusu disease in large scale duck farm 2013 - 05 - 10 发布 安徽省质量技术监督局 2013 - 06 - 10 实施 发 布 DB34/T 1892—2013 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 鸭坦布苏病毒病（duck tembusu virus disease）是由鸭坦布苏病毒（duck tembusu virus）引起 的一种鸭的急性传染病，除鸭外，鹅和鸡也可感染。主要引起种鸭、蛋鸭产蛋大幅下降，肉鸭、育成鸭 发生神经症状为特征的疾病，该病传播迅速，蔓延范围广，给我国养鸭业造成了巨大经济损失。 为预防、控制和消灭鸭坦布苏病毒病，依据《中华人民共和国动物防疫法》和其它相关法律法规， 制定本标准。 本标准主要根据《中华人民共和国动物防疫法》和有关兽医防疫标准而制定。 本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出并起草。 本标准由安徽省农业标准化委员会归口。 本标准由安徽省质量技术监督局批准。 本标准主要起草人：赵瑞宏、张丹俊、潘孝成、戴银、胡晓苗、侯宏艳、周学利、刘慧芳、沈学怀、 朱传民、夏生林、伋兆法、汲方嵘。 I DB34/T 1892—2013 规模鸭场鸭坦布苏病毒病防控技术规程 1 范围 本标准规定了鸭坦布苏病毒病的诊断、疫情处理、预防和控制措施。 本标准适用于规模鸭场鸭坦布苏病毒病的预防和控制。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范 农业部2010年第7号令 动物防疫条件审查办法 《中华人民共和国动物防疫法》 《中华人民共和国兽药典》 《消毒技术规范》 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 鸭坦布苏病毒 黄病毒科黄病毒属恩塔亚病毒群的一个成员。主要引起产蛋鸭卵巢出血和产蛋下降。 4 诊断 依据流行病学、临床症状和病理变化等作出初步诊断，确诊需要进行病毒分离或分子生物学试验。 4.1 流行特点 主要危害蛋鸭、种鸭。受感染鸭群里的鸭只几乎均可发病，死亡率为 5％～30％不等。 4.2 临床症状 以产蛋鸭突发采食量和产蛋量急剧下降为特点，即：鸭群发病后 1～2 周内，采食量下降 30％以 上，产蛋率由 80％以上下降至 10％～30％甚至 10％以下，严重者停产，产蛋率平均下降为 50％～60 ％。随后，产蛋率可逐渐回升，从发病至产蛋率恢复到高峰，约需 30～50 天。病鸭发热，精神欠佳， 草绿色下痢，站立不稳，双腿瘫痪、向后或侧面伸展。 1 DB34/T 1892—2013 4.3 病理变化 4.3.1 剖检病变 病变主要见于卵巢，表现为卵巢发育不良，卵泡变性、变形，卵泡膜充血、出血，子宫及输卵管粘 膜未见异常，部分病例可见卵黄性腹膜炎。 4.3.2 组织学病变 卵泡变性出血、卵泡闭锁和破裂，脑组织损伤，表现为脑膜水肿、血管充血，皮质层神经胶质细胞 增生、嗜酸性粒细胞浸润和软化坏死，部分发病鸭还可能出现肝脏变性或坏死，胆汁淤滞、胆管扩张， 血管周围浸润炎性细胞；心肌纤维坏死或钙化，炎症细胞浸润；脾脏淋巴细胞坏死、数量减少，伴有异 嗜性粒细胞浸润，且血管扩张充血，肺出血，并有嗜异性粒细胞浸润。 4.4 实验室诊断 4.4.1 病原分离鉴定 4.4.1.1 鸭胚选择 选SPF鸭群（或健康无病鸭群）的新鲜受精蛋。鸭胚对坦布苏病毒应无免疫力，因其抗体可由母鸭 经卵黄传给胚胎。一般选白壳蛋，以便照蛋时易于观察。 4.4.1.2 病料的处理和接种 采集发病鸭或死后数小时内鸭的卵巢、心血、肝脏或脑组织，将所采集的病变组织器官在研钵中剪 切成小块，研磨至乳状再加少量灭菌 PBS 稀释，分装入冻存管，反复冻融 3 次，用 0.22 um 一次性 滤器过滤除菌（在研磨、离心取上液等过程中要注意无菌操作）。 4.4.1.3 鸭胚接种 将接种物注射进鸭胚尿囊腔，每个胚注射 0.2～0.5 ml，用熔化的石蜡封闭小孔，置孵育箱中继续 孵育。每天照蛋 1～2 次，24 小时内死亡鸭胚舍去。 4.4.1.4 尿囊液收集 收获接种后 36～72 h 死亡的鸭胚尿囊液，冷冻保存。 4.4.1.5 产蛋鸭接种 取产蛋鸭 20 只，分为两组，每组 10 只，中和组经肌肉注射接种鸭胚尿囊液毒+鸭坦布苏病毒抗 血清，对照组接种鸭胚尿囊液毒，接种剂量均为 1 ml/只。观察攻毒组和对照组鸭在接种后的采食、产 蛋等变化。在接种后 6 d 从攻毒组和对照组分别取 3 只鸭扑杀，剖检并观察病变。 4.4.1.6 结果观察和判定 接种后对照组产蛋鸭采食量和产蛋量急剧下降，中和组正常，剖检可见对照组卵巢发育不良，卵泡 变性、变形，卵泡膜充血、出血，中和组正常，即可诊断为鸭坦布苏病毒病。 4.4.2 分子生物学诊断 4.4.2.1 病毒核酸的提取 2 DB34/T 1892—2013 取 100 μl 死亡胚尿囊液，加入 Trizol Reagent 提取病毒总 RNA。 4.4.2.2 RT-PCR 检测 引物：上游引物：5’-GGATGCGTCGTACGTGCT-3’，下游引物：5’-CGTCGTTCCCAGATTCCA-3’。 以病毒 RNA 为模板进行 RT-PCR，RT 反应条件为：72℃5 min，42℃30 min，98℃3 min。PCR 反 应条件：94℃预变性 5 min；94℃变性40 s，56℃退火 40 s，72℃延伸 1 min，35 个循环；72℃延伸 10 min。 4.4.2.3 结果分析和判定 取 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后，取出凝胶板置于凝胶成像系统中打开紫外灯观察。 当阳性对照出现 348 bp 扩增带，阴性对照未出现目的带时，实验结果成立。被检样品出现 348 bp 扩 增带时，该样品判定为阳性。 4.5 结果判定 4.5.1 符合 4.1、4.2 和 4.3 的，临床诊断为疑似鸭坦布苏病毒病。 4.5.2 符合结果判定 4.5.1，且符合 4.4.1 或 4.4.2 时，可确诊为鸭坦布苏病毒病。 5 疫情处理 根据流行病学特点、临床症状、剖检病变，结合病原分离鉴定或分子生物学检测做出的诊断结果可 作为疫情处理的依据。 当疫病呈爆发性流行时，依照《中华人民共和国动物防疫法》进行处理。 6 预防与控制 6.1 预防措施 6.1.1 引种检疫 国内异地引入种鸭及其精液、种蛋时，应取得原产地动物防疫监督机构的检疫合格证明。到达引入 地后，种鸭必须隔离饲养 7 天以上，并由引入地动物防疫监督机构进行检测，合格后方可混群饲养。 6.1.2 饲养管理 饲养场实行全进全出饲养方式，减少各种应激因素，如鸭舍温度、湿度的突然变化、光照的骤变、 噪音、惊吓，日常中鸭饲料营养成分或配方的较大改变等。 6.1.3 养殖环境 改善养殖环境，保持鸭舍通风、干燥、温暖，饲饮用具、饲料槽、饮水器要保持清洁干净。 6.1.4 营养供给 为保证鸭每日的营养供给，应根据鸭的不同生长阶段配制饲料，同时要特别注意日粮中必需氨基酸 和维生素的含量应能满足鸭机体生长需要。所喂饲料必须无霉变、无杂质，以防诱发疾病。 6.1.5 消毒制度 3 DB34/T 1892—2013 各饲养场要控制人员出入，严格执行清洁和消毒程序，圈舍、饲饮用具、饲料槽、饮水器等要定期 清洗消毒。 6.1.6 基础防疫工作 按照科学的程序做好鸭瘟、鸭病毒性肝炎、鸭传染性浆膜炎等疫病的免疫接种。 6.1.7 药物预防 在免疫空白期，应用提高机体免疫力和修复免疫器官的中药制剂（如黄芪多糖等），有助于控制发 病和减少死亡 6.2 控制措施 6.2.1 隔离、消毒措施 发生本病后，要隔离病鸭，对鸭舍、环境、用具等严格消毒处理，消毒药的使用遵照《中华人民共 和国兽药典》的规定。 6.2.2 药物治疗措施 该病目前无特效治疗药物，在发生该病时可投喂一些抗病毒中草药（如板蓝根、黄连、金银花及连 翘等），为了防止继发感染大肠杆菌病，应在治疗过程中辅助添加广谱抗生素（如：氟派酸、阿莫西林、 庆大霉素等） 6.2.3 病死禽无害化处理措施 对病死禽只进行无害化处理，按照 GB 16548 进行无害化处理；对粪便及其它可能被污染的物品， 按 NY/T 1168 进行无害化处理；对环境和设施进行消毒，按《消毒技术规范》进行。 _________________________________ 4