ICS 11.220 B 41 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 1893—2013 规模猪场副猪嗜血杆菌病防控技术规程 Technology specification on prevention and control of haemophilus parasuis disease for large scale pig farm 2013 - 05 - 10 发布 安徽省质量技术监督局 2013 - 06 - 10 实施 发 布 DB34/T 1893—2013 前 言 本标准按 GB/T 1.1-2009 给出的规则编写。 副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）在特定条件下侵入机体引起猪 全身性感染的一种传染病，以纤维素性多发性浆膜炎（如胸膜炎、心包炎、腹膜炎）、关节炎和脑膜炎 为特征，高热、高死亡率，该病又称革拉瑟氏病（Glässer’s disease）。2008年《中华人民共和国农 业部公告》第1125号将其列为二类动物疫病。 为预防、控制和扑灭副猪嗜血杆菌病，依据《中华人民共和国动物防疫法》和其它相关法律法规， 制定本规范。 本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。 本标准由安徽省农业标准化委员会归口。 本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽农业大学动物科技学院、芜湖动物疫病 预防控制中心、安徽省和县畜牧兽医局。 本标准起草人：周学利、张丹俊、魏建忠、潘孝成、赵瑞宏、胡晓苗、戴银、侯红艳、刘慧芳、沈 学怀、朱传民、夏生林、伋兆法。 I DB34/T 1893—2013 规模猪场副猪嗜血杆菌病防控技术规程 1 范围 本标准规定了副猪嗜血杆菌病的诊断、预防和控制技术要求。 本标准适用于规模猪场副猪嗜血杆菌病的诊断与防控。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 16548-2006 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 1168-2006 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY 5030 无公害食品 畜禽饲养兽药使用准则 《动物防疫条件审查办法》（农业部2010年7号令） 《中华人民共和国动物防疫法》 《中华人民共和国兽药典》 《中华人民共和国农业部公告》第1125号 3 诊断 3.1 流行特点 副猪嗜血杆菌病多发于早春和深秋时节，各种应激或免疫抑制性疾病均能诱发该病，多呈地方性流 行。病猪、临床康复猪和隐性感染猪是主要传染源。 病菌通过呼吸道、消化道或伤口传播，主要感染 2 周龄至 4 月龄的猪只，发病率一般在 10％以 上。断奶前后和保育期的仔猪，发病率可达 50％～80％；母猪发病可流产或死亡。 3.2 临床症状 3.2.1 急性型 病猪体温升高达 40℃～41℃，精神沉郁，不愿活动，食欲减退；呼吸困难，咳嗽，尖叫；关节肿 胀，跛行，共济失调；可视粘膜发绀，消瘦，被毛零乱，2 d ～3 d 死亡，少数病猪猝死。病猪存活后 可能留下后遗症，如神经症状、母猪流产或公猪慢性跛行等。 3.2.2 慢性型 身体消瘦，被毛粗乱，呼吸困难，咳嗽，生长迟滞，关节肿大等。 3.3 病理变化 以浆液性——纤维素性多发性浆膜炎（如胸膜炎、心包炎、腹膜炎）、关节炎和脑膜炎为特征。 1 DB34/T 1893—2013 少数急性病例不具有多发性浆膜炎症状，呈现皮肤发绀、皮下水肿、肺水肿和急性败血症变化。 3.4 实验室诊断 3.4.1 直接镜检 采集疑似病猪的胸腹腔积液、心包积液、关节液、脑脊液、淋巴结和肺等病料，作涂片或触片，染 色镜检。副猪嗜血杆菌是革兰氏阴性细小多形态杆菌，无鞭毛，不形成芽孢，组织中的菌株通常具有荚 膜并趋向于球杆状。 3.4.2 细菌分离与培养 无菌操作将病料接种于含有 NAD 的巧克力琼脂平板、TM/SN 培养基或胰蛋白大豆琼脂培养基 （Tryptic Soy Agar，TSA），37℃培养 24～48 h。副猪嗜血杆菌的菌落为圆形、光滑湿润和透明，直 径 0.5～2 mm。 3.4.3 生化鉴定 将可疑菌的单菌落，划线接种于鲜血琼脂平板，再用金黄色葡萄球菌点种或划线，37℃培养 24 h～ 48 h。取具有“卫星生长现象”且不溶血的菌落，纯培养后接种于微量生化鉴定管，37℃培养 48 h。副 猪嗜血杆菌脲酶试验、氧化酶试验和吲哚试验均为阴性，接触酶试验和硝酸盐还原试验均为阳性，发酵 葡萄糖、蔗糖、果糖、核糖、麦芽糖和半乳糖等碳水化合物。 3.4.4 PCR 检测 模板制备：纯化被检菌株，用接种环刮取 2 个菌落洗脱于含 100 µl 无菌水的离心管中，涡旋后 于沸水中水浴 10 min，再置 -20℃ 冻结。冻融后 10,000 r/min离心 5 min，取上清液作模板。 ——上游引物：5’-GGC TTC GTC ACC CTC TGT –3’ ——下游引物：5’-GTG ATG AGG AAG GGT GGT GT –3’ ——反应体系（30µl）：10 倍 PCR Buffer 5µl，25mmol/L MgCl2 1.5µl，dNTPs 1.0µl，1.5umol/L 上 游引物 1.5µl，1.5umol/L 下游引物 1.5µl, ExTaqE 0.5µl，灭菌双蒸水 9µl，模板 10µl。 ——反应条件：94℃变性 4 min；94℃ 50 s，59℃ 50 s，72℃ 1 min，共 35 个循环；72℃延伸 10 min，PCR 产物 4℃保存。 ——结果判定：PCR 产物经 1％的琼脂糖凝胶电泳，出现 822 bp 大小的单一条带，判定为阳性。 3.4.5 血清型鉴定 按常规的琼脂扩散试验（GD）或间接血凝试验（IHA）分型方法进行。 3.5 结果判定 3.5.1 符合 3.1、3.2、3.3 和 3.4.1、3.4.2 的，判定为疑似副猪嗜血杆菌病。 3.5.2 符合 3.1、3.2、3.3，且从病猪上呼吸道以外的不同部位分离到副猪嗜血杆菌时，确诊被检猪 群感染有副猪嗜血杆菌。 4 预防 4.1 饲养管理 2 DB34/T 1893—2013 养猪场必须符合《动物防疫条件审查办法》（农业部2010年7号令）的要求，并须取得动物防疫合 格证。自繁自养，全进全出。控制人员、车辆和物资的出入，严格执行清洁和消毒制度。严把引种关。 改善猪群生存条件，增强猪只体质。对受到应激的猪群及时饲喂抗生素（抗生素的使用按 NY 5030 的要求进行）。 4.2 免疫 受本病威胁严重的猪场，可接种与 3.4.5 鉴定的血清型相对应的经国务院批准的多价油乳剂灭活 疫苗。初产母猪产前 8～9 周首免，间隔 3 周后加强免疫一次；经产母猪产前 4～5 周免疫一次；仔 猪在 14 日龄首免，间隔 3 周后加强免疫一次；种公猪每半年免疫一次。以上免疫均为颈部肌肉注射 疫苗 2 ml/头。 5 控制 5.1 疫情报告 按照《中华人民共和国动物防疫法》的有关规定处理。 5.2 疫情处理 根据诊断结果，疫情处理按照《中华人民共和国动物防疫法》、《中华人民共和国兽药典》、GB 16548-2006 、NY/T 1168-2006 和 NY 5030 中二类动物疫病与药物使用的有关规定进行。 _________________________________ 3