ICS 65.020.30 B 44 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB22/T 2591—2016 普通级实验用猫病原微生物监测 Conventional experimental cat: pathogenic microoroganism surveillance 2016 - 12 - 22 发布 吉林省质量技术监督局 2017 - 04 - 01 实施 发 布 DB22/T 2591—2016 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由吉林省科学技术厅提出并归口。 本标准起草单位：吉林大学。 本标准主要起草人：任文陟、袁宝、陈健、张锐、刘殿峰、张嘉保、高巍、胡进平、俞先峰、权福 实、丁瑜、张金玉。 I DB22/T 2591—2016 普通级实验用猫病原微生物监测 1 范围 本标准主要规定了普通级实验用猫的病原微生物监测的术语和定义、检测项目、检测程序、检测方 法、检验规则。 本标准适用于普通级实验用猫病原微生物的监测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 14926.1 实验动物沙门菌检测方法 GB/T 14926.4 实验动物皮肤病原真菌检测方法 GB/T 14926.42 实验动物 细菌学检测 标本采集 GB/T 14926.46 实验动物钩端螺旋体检测方法 GB/T 14926.50 实验动物酶联免疫吸附试验 GB/T 14926.56 实验动物狂犬病检测方法 NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实验用猫 experimental cat 用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验用猫。 3.2 普通级实验用猫 conventional (CV) cat 不携带所规定的重要人兽共患病病原和烈性传染病病原的实验用猫。 4 检测项目 检测项目见表1。 表1 普通级实验用猫检测项目 动物等级 普通级 检测项目 检测要求 猫泛白细胞减少症病毒 ▲ 猫鼻气管炎病毒 ▲ 猫杯状病毒 ▲ 猫狂犬病毒 ▲ 不得检出 1 DB22/T 2591—2016 表 1（续） 动物等级 普通级 检测项目 检测要求 沙门氏菌 ● 皮肤病原真菌 ○ 钩端螺旋体 ○ 注：▲ 指在进行实验用猫质量评价时应检测的项目，可以免疫。 ● 指在进行实验用猫质量评价时应检测的项目。 ○ 指引进实验用猫时或怀疑本病流行等必要时要求检测的项目。 5 检测程序 检测程序见图1。 编号 采样* 耳后、背部毛发或皮屑 采血 鼻拭子、肛拭子（或新鲜粪便） 真菌检查 血清抗体检查 细菌检查 检测 结果判定 检测结论 注：*：结合临床症状和实验室检查结果，需要进一步确证时，可取特定样本进行检测。 图1 6 检测方法 检测方法见表2。 2 检测程序 不得检出 DB22/T 2591—2016 表2 普通级实验用猫病原微生物检测方法 微生物 方法 猫泛白细胞减少症病毒 抗体按 GB/T 14926.50 检测 病原采用 PCR 法检测，见附录 A 猫鼻气管炎病毒 抗体按 GB/T 14926.50 检测 病原采用 PCR 法检测，见附录 B 猫杯状病毒 抗体按 GB/T 14926.50 检测 病原采用 RT-PCR 法检测，见附录 C 猫狂犬病毒 抗体按GB/T 14926.56 检测 病原采用巢式RT-PCR法，见附录D 7 沙门氏菌 按GB/T 14926.1检测 皮肤病原真菌 按GB/T 14926.4检测 猫钩端螺旋体 按GB/T 14926.46检测 检验规则 7.1 监测频率 每 6 个月至少检测一次。 7.2 抽样 7.2.1 方法 采取随机抽样。应在每一生产繁殖单元的不同方位（如四角和中央）选取动物。 7.2.2 数量 抽样数量见表3。 表3 7.2.3 抽样数量 群体大小（只） 抽样数量 ＜100 不少于5 只 100～500 不少于10 只 ＞500 不少于15 只 试样采集 按GB/T 14926.42 和 NY/T 541 进行。 7.3 结果判定 在检测的动物中，如有某项指标不符合标准指标要求，则判该群体不符合标准。 3 DB22/T 2591—2016 AA 附 录 A （规范性附录） 猫泛白细胞减少症病毒 PCR 检测方法 A.1 病毒DNA的提取与保存 按照DNA快速提取试剂盒操作方法进行DNA提取。冻存于-70 ℃冰箱备用。 A.2 PCR反应引物 上游引物序列（5′-3′）: CTGCTACTCAGCCACCAACT。 下游引物序列（5′-3′）: TGGTGGTAAGCCCAATGCTC。 A.3 PCR反应条件 PCR反应试剂盒，退火温度为 60 ℃。 A.4 PCR产物 A.4.1 产物大小 401 bp。 A.4.2 产物参考序列 CTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATAATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCC ATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAGACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAAT GGGATAGAACATTAATACCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATGTATATCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTT TATACTATTGAAAATTCTGTACCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACCATG TAGACTAACACATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCA。 4 DB22/T 2591—2016 BB 附 录 B （规范性附录） 猫鼻气管炎病毒 PCR 检测方法 B.1 病毒DNA的提取与保存 按照DNA快速提取试剂盒操作方法进行DNA提取。冻存于-70 ℃冰箱备用。 B.2 PCR反应引物 上游引物序列（5′-3′）: GCGGATTACACCACCACTCT。 下游引物序列（5′-3′）: AAAGGCTAAGGGCGTGTACC。 B.3 PCR反应条件 PCR反应试剂盒，退火温度为 60 ℃。 B.4 PCR产物 B.4.1 产物大小 401 bp。 B.4.2 产物参考序列 GCGGATTACACCACCACTCTCGATTGGATTGTATTCGGCGAGCTTGGTAATATTAGCAGCCAGAACAGAAATGTTACTCGTAAGC ATCTGCGGGGGTAAACTAGTAACTCCCAAAATTCTCAGACCGCGCTGCGCGATAAATGCCAATATGGGTATTAGAGTGAGCTTCTCCCC CCCTGGTGGTAGAATCTTGGTTATTAAACCCACAGAATCTGTTAATTGTTTCAAACCCTCACGACGTTGAATGTCTTTACTAGTTGTAT CCATATTTTTTGAAAAACGACACGTTTTCAGCTCAATTAGAAAACATATACCACCCCCTTCTCCCTCAAATTGTATAGTACATACACAA TCAGGTCGGCGACGACCCAAGTTAACCTCACATGCTAGGTACACGCCCTTAGCCTTT。 5 DB22/T 2591—2016 CC 附 录 C （规范性附录） 猫杯状病毒 RT-PCR 检测方法 C.1 病毒RNA的提取与保存 按照病毒RNA快速提取试剂盒操作方法进行RNA提取。冻存于-70 ℃冰箱备用。 C.2 PCR反应引物 上游引物序列（5′-3′）: AACCTGCGCTAACGTGCTT。 下游引物序列（5′-3′）: CAGTGACAATACACCCAGAA。 C.3 反转录 使用反转录试剂盒对所提取的总RNA进行反转录，制备cDNA。 C.4 PCR反应条件 PCR反应试剂盒，退火温度为 55 ℃。 C.5 PCR产物 C.5.1 产物大小 922 bp。 C.5.2 产物参考序列 AACCTGCGCTAACGTGCTTAAATACTATGATTGGGATCCCCACATCAGATTGGTTATCAACCCCAATAAATTTCTTCCTATTGGT TTCTGTGATAATCCTCTAATGTGTTGCTACCCAGAATTGCTCCCAGAATTCGGAACTGTGTGGGATTGTGATCAATCCCCACTGCAAAT CTACCTGGAGTCAATCCTTGGTGATGATGAATGGGCTTCAACTTACGATGCCATTGACCCTGTTGTTCCACCAATGCACTGGGACGATG CAGGCAAGATCTTCCAACCTCACCCTGGAGTTCTGATGCATTTTCTAATAAATGAAGTTGCAAAGGGCTGGGATCCAAGTTTGCCATCC TTCCGTTTGGAAGCAGATGACGGATCCATAACCACACCTGAACAGGGTACTGCGGTTGGTGGCGTCATTGCCCAACCCAGCGCTCAAAT GTCGGCAGCTGCAGACATGGCATCTGGTAAGAGTGTTGACTCTGAGTGGGAGGAATTCTTTTCCTTCCATACTAGTGTCAACTGGAGCA CAACTGAAACACAAGGAAAGATTCTGTTCAAACAGTCACTGGGACCCCTTCTCAACCCTTACCTTGAACACTTATCTAAACTCTATGTT GCTTGGTCAGGCTCTATAGATGTTAGGTTTTCTATCTCTGGTTCTGGTGTCTTTGGGGGAAAACTAGCCGCAATAGTTGTCCCACCTGG TGTCGATCCTGTCCAAAGCACTTCCATGCTACAATACCCTCATGTGTTGTTTGATGCTCGACAGGTTGAACCAGTGATCTTTTCTCTCC CTGATCTGAGGAATTCACTATATCACCTCATATCTGATACTGATA