ICS 65.120 B 46 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2462—2016 饲料添加剂 蛋氨酸的测定 Determination of methionine in feed additive 2016 - 05 - 31 发布 吉林省质量技术监督局 2016 - 07 - 01 实施 发 布 DB22/T 2462—2016 前 言 本标准按照 GB/T 1.1和GB/T 20001.4给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出。 本标准由吉林省畜牧业管理局归口。 本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。 本标准主要起草人：王洋、杨梅、庞博、李桂杰、杨阳、张九天。 I DB22/T 2462—2016 饲料添加剂 蛋氨酸的测定 1 范围 本标准规定了饲料添加剂蛋氨酸测定的原理、试剂与材料、仪器与设备、分析步骤、结果计算和表 述、精密度。 本标准适用于饲料添加剂蛋氨酸含量高于10 g/100 g的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 采用凯氏法测定试样中的含氮量，饲料中蛋氨酸在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生 成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，用硫酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系 数，即为蛋氨酸的含量。采用间接碘量法测定试样中含硫量，试样中先加入定量、过量碘滴定液，在酸 性条件下，含硫基团与过量的碘作用，剩余碘用硫代硫酸钠滴定，由硫代硫酸钠溶液所消耗的量，间接 求出硫含量。 4 试剂与材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T 6682规定的一级水。 4.1 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 4.2 磷酸氢二钾（K2HPO4）。 4.3 碘化钾（KI）。 4.4 碘（I2）。 4.5 硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）。 4.6 硫酸钾（K2SO4）。 4.7 硫酸铜（CuSO4·5H2O）。 4.8 浓硫酸（H2SO4）。 4.9 硼酸（H3BO3）。 4.10 甲基红（C15H15N3O2）。 4.11 溴甲酚绿（C21H14Br4O5S）。 4.12 盐酸（HCl）。 4.13 重铬酸钾（K2Cr2O7）。 1 DB22/T 2462—2016 4.14 碘化汞（HgI2）。 4.15 可溶性淀粉。 4.16 氢氧化钠（NaOH）。 4.17 无水乙醇（C2H5OH）。 4.18 6 mol/L 盐酸溶液：500 mL 盐酸（4.12）蒸馏水溶解定容至 1000 mL，即得浓度为 6 mol/L 盐酸 溶液。 4.19 碘溶液：称取 10 g 碘化钾（4.3）于烧杯中，加少量水，加入 6.4 g 碘（4.4），与碘化钾一起 研磨，直至完全溶解，定量转移到 1000 mL 棕色容量瓶中，稀释到刻度，摇匀，即得 0.05 mol/L 碘溶 液，置于暗处备用。 4.20 淀粉指示剂：称取 0.5 g 可溶性淀粉（4.15），用少量水搅匀后，加入 100 mL 沸水中，搅匀冷 却后，加入 0.1 g 碘化汞作防腐剂，制得浓度为 0.5%的淀粉溶液。 4.21 混合催化剂制备：将 1000 g 硫酸钾(4.6)和 50 g 硫酸铜(4.7)充分混合,并仔细研磨。 4.22 氢氧化钠（30%）：称取 30 g 氢氧化钠, 用蒸馏水溶解定容至 100 mL，摇匀备用。 4.23 硼酸溶液（20 g/L）：称取 20 g 硼酸，用蒸馏水溶解定容至 1000 mL，摇匀备用。 4.24 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.10 g 甲基红（4.10）与 0.50 g 溴甲酚绿（4.11）溶解于无水 乙醇，定容至 100 mL，摇匀备用。 4.25 0.1 mol/L 重铬酸钾标准溶液、0.1 mol/L 硫代硫酸钠标准溶液、0.1 mol/L 硫酸标准溶液均按 GB/T 601 制备。 5 仪器与设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 6 天平：感量 0.01 g； 分析天平：感量 0.1 mg； 干燥箱； 凯氏定氮蒸馏装置； 电炉； 马弗炉。 分析步骤 6.1 试样制备 将试样经多次缩分后取出100 g，用研磨器或研钵研磨至全部通过0.05 mm孔径筛，充分混匀，贮于 洁净、干燥、磨口瓶中备用。 6.2 试样处理与测定 6.2.1 碘量法 称取0.1 g样品（称准至0.0001 g）于 250 mL碘量瓶中，加入50 mL水、1 g磷酸二氢钾（4.1）、2 g磷酸氢二钾（4.2）和1 g碘化钾（4.3），轻轻摇匀使其完全溶解。再准确加入25.0 mL 0.05 mol／L 碘溶液（4.19），塞好瓶塞，摇匀，放置暗处30 min ，用少量水洗瓶内壁，立即用0.1 mol／L的硫代 硫酸钠标准溶液（4.25）滴定剩余碘液，接近终点时加入l mL淀粉指示剂（4.20），滴至蓝色刚好消失 为终点。 2 DB22/T 2462—2016 6.2.2 凯氏定氮法 称取0.5 g样品（称准至0.0001 g）于 100 mL凯氏烧瓶中，加入3.5 g混合催化剂(4.21)和10 mL 浓硫酸（4.8），在电炉上慢慢消化至透明，取下冷却，定量转入100 mL容量瓶，冷却后定容。 移取该 试液10.0 mL，移入蒸馏烧瓶，加入氢氧化钠10 mL（4.22），用凯氏定氮蒸馏装置进行蒸馏，蒸出液用 20 mL 2%硼酸溶液（4.23）吸收，加入2滴甲基红-溴甲酚绿混合指示剂（4.24），用0.1 mol／L硫酸标 准溶液（4.25）滴至暗红色为终点。 6.3 空白试验 各方法同时作试剂空白试验，不加试样，按6.2.1和6.2.2操作步骤进行。 7 结果计算和表述 采用碘量法测定饲料添加剂中蛋氨酸含量的计算公式如下： X = c × (V0 - V ) × 74.06 × 10 -3 × 100 ............................ (1) W 式中： X —— 试样中蛋氨酸的含量，单位为克每百克（g/100 g）； c —— 硫代硫酸钠标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； V0 —— 空白测定消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，单位为毫升（mL）； V —— 样品测定消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，单位为毫升（mL）； W —— 样品的质量，单位为克（g） 74.06 ——1/2 C5H11NO2S的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol） 采用凯氏定氮法测定饲料添加剂中蛋氨酸含量的计算公式如下： X= c × (V - V0 ) × 149.21 × 10 -3 × 10 W × 100 ......................... (2) 式中： X —— 试样中蛋氨酸的含量，单位为克每百克（g/100 g）； c —— 盐酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； V0 —— 空白测定消耗的盐酸标准溶液的体积，单位为毫升（mL）； V —— 样品测定消耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升（mL）； W —— 样品的质量，单位为克（g）； 3 DB22/T 2462—2016 149.21 —— 1/2 C5H11NO2S的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）； 10 —— 稀释倍数。 结果取两次测定结果的平均值，保留三位有效数字，并为公式（1）、（2）计算出蛋氨酸含量低者 为最终测定结果。 8 精密度 8.1 8.2 在重复性测定的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的 0.8% 。 在再现性测定的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的 1% 。 _________________________________ 4