ICS 67.050 X 04 备案号：56326-2017 吉 林 DB22 省 地 方 标 准 DB 22/T 2625—2017 长白山林蛙油的测定 薄层色谱法 Determination of Ranae Oviductus from Changbai mountain—— Thin layer chromatography method 2017 - 06 - 12 发布 吉林省质量技术监督局 2017 - 08 - 12 实施 发 布 DB22/T 2625—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。 本标准由吉林省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：吉林大学、吉林省林蛙产业商会。 本标准主要起草人：王永生、伊常青、徐阳、孔德娟、陈冰、王艳伟、杨怀雷。 I DB22/T 2625—2017 长白山林蛙油的测定 薄层色谱法 1 范围 本标准规定了用薄层色谱对林蛙油进行测定的方法。 本标准适用于吉林长白山林蛙油的测定。 2 原理 胆甾-5-烯-3β, 7β-二醇对照品在105℃条件下与10%硫酸乙醇反应显蓝色。 3 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 4 试剂或材料 除特别说明外所有试剂均为分析纯。 二氯甲烷。 石油醚（沸程 60 ℃～90 ℃）。 乙酸乙酯。 浓硫酸（98%）。 无水乙醇。 胆甾-5-烯-3β, 7β-二醇对照品。 硅胶 G 薄层板。 定量毛细管（5μL，2μL）。 滤纸。 仪器设备 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 4.9 4.10 5 天平（感量 0.0001 g）。 60 目筛。 容量瓶。 具塞锥形瓶（50 mL）。 粉碎机（功率：550 W，频率：50 Hz～60 Hz，转速：no 28000 r/min）。 层析缸。 超声波清洗器。 旋转蒸发仪。 循环水式真空泵。 喷雾瓶。 样品 1 DB22/T 2625—2017 林蛙油。 6 试验步骤 6.1 取干燥林蛙油适量，粉碎（4.5）后过 60 目筛（4.2）。 6.2 取上述粉末 2.0 g（4.1），置于 50 mL 具塞锥形瓶（4.4）中，加二氯甲烷（3.1）20 mL，在水 温 30 ℃以下超声提取 20 min（4.7），滤过（3.9），同法提取 2 次，合并滤液，减压浓缩（4.8，4.9）， 残渣加二氯甲烷（3.1）1 mL 使溶解，作为供试品溶液。 6.3 取胆甾-5-烯-3β, 7β-二醇对照品（3.6）0.5 mg（4.1）置于 5 mL 容量瓶中（4.3），加二氯甲 烷（3.1）定容至刻度，摇匀，制成每 1 mL 含 0.1 mg 的溶液，作为对照品溶液。 6.4 量取乙酸乙酯（3.3）和石油醚（60 ℃～90 ℃）（3.2）各 20 mL 置于具塞锥形瓶（4.4）中，振 摇使其充分混匀，作为展开剂。 6.5 取上述展开剂适量加入到层析缸中（4.6），展开剂液面距缸底 5 mm～8 mm，保持层析缸密闭， 预饱和 30 min。 6.6 吸取浓硫酸 5 mL（3.4）加入到 45 mL 无水乙醇（3.5）中即得 10%硫酸乙醇溶液，作为显色剂。 6.7 在距薄层板（3.7）一端 10 mm 处轻划一条基线，距基线 80 mm 处轻划一条上沿线。 6.8 取 5 μL，2 μL 定量毛细管（3.8），吸取供试品溶液 5 μL，对照品溶液 2 μL，分别点于同一 硅胶 G 薄层板上（3.7）。点样时，直径以 2 mm 为宜，同一薄层板可点多个样品，各点间隔不小于 10 mm， 待点样斑点干燥后放入预饱和的层析缸（4.6）中进行展开，待展开剂上升至薄层板上沿线时，取出， 晾干。 喷以 10%硫酸乙醇溶液（4.10），在 105 ℃加热（约 20 min）至斑点显色清晰。 7 试验结果 薄层层析图谱中，与对照品斑点相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点。资料见附录A。 8 试验报告 试验报告应包括下列内容： a) 本标准的名称和编号； b) 样品的详细信息； c) 试验条件； d) 试验结果； e) 在试验过程中观察到的任何异常现象； f) 试验日期。 2 DB22/T 2625—2017 AA 附 录 A （资料性附录） 长白山林蛙油薄层色谱图 长白山林蛙油薄层色谱图见图A.1。 注：1：胆甾-5-烯-3β, 7β-二醇对照品；2～7：林蛙油供试品 图A.1 长白山林蛙油薄层色谱图 _________________________________ 3