ICS 65.120 B 46 福 DB35 建 省 地 方 标 准 DB35/T 1737—2018 饲料中低聚果糖的测定 高效液相色谱法 Determination of Fructooligosaccharides in Feeds High Performance Liquid Chromatography Method 2018 - 02 - 05 发布 福建省质量技术监督局 2018 - 05 - 05 实施 发 布 DB35/T 1737—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 原理 .............................................................................. 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 1 5 仪器与设备 ........................................................................ 2 6 分析步骤 .......................................................................... 2 7 结果计算 .......................................................................... 2 8 重复性 ............................................................................ 3 附录 A（资料性附录） 低聚果糖标准品色谱图 ............................................ 4 I DB35/T 1737—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由福建省产品质量检验研究院提出。 本标准由福建省质量技术监督局归口。 本标准起草单位：福建省产品质量检验研究院、福建省食品药品质量检验研究院、泉州市产品质量 检验所、麦仑（漳州）生物科技有限公司、厦门惠盈动物科技有限公司。 本标准主要起草人：戴明、潘城、孟鹏、王秀云、陈永煊、王征、欧阳立群、余清、何孟杭、卓黎阳、 贾洪强、林章秀。 II DB35/T 1737—2018 饲料中低聚果糖的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中低聚果糖含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于饲料中添加以蔗糖为原料制备而成的低聚果糖含量的测定，检出限为0.015 g/100 g， 定量限0.050 g/100 g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中低聚果糖经50%乙腈溶液提取，分散固相萃取净化，用高效液相色谱仪测定，采用外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 乙二胺基-N-丙基（PSA）。 4.5 石墨化碳黑（GCB）。 4.6 50%乙腈溶液：量取 500 mL 的乙腈（4.2）于 1000 mL 的量器中，用纯水稀释定容至刻度线。 4.7 标准物质：低聚果糖(Fructooligosaccharides)有证标准品：蔗果三糖（1-kestose，C18H32O16， CAS：470-69-9 ，纯度≥99.0%），蔗果四糖（Nystose，C24H42O21，CAS：13133-07-8，纯度≥99.0%）， 蔗果五糖（1F-fructofuranosylnystose，C30H52O26，CAS：59432-60-9，纯度≥80.0%），蔗果六糖 （Fructo-oligosaccharide，GF5，C36H62O31，CAS：308066-66-2，纯度≥92.1%）。 4.8 标准储备液的配制：准确称取 0.2020 g 的蔗果三糖、0.2020 g 的蔗果四糖、0.2500 g 蔗果五糖、 0.2172 g 蔗果六糖标准品，用 50%乙腈溶液（4.6）溶解并定容至 10 mL，配制成浓度为 20 mg/mL 的标 准储备液。标准储备液置于冰箱中 0 ℃～4 ℃温度下保存，有效期 3 个月。 4.9 标准工作溶液的配制：将标准储备液采用逐级稀释的方法用 50%乙腈溶液（4.6）配制浓度从 0.1 mg/mL，0.2 mg/mL，0.5 mg/mL，1.0 mg/mL，2.0 mg/mL，5.0 mg/mL 的系列标准工作溶液。标准 工作溶液均置于冰箱中 0 ℃～4 ℃温度下保存，有效期 1 个月。 1 DB35/T 1737—2018 5 仪器与设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 6 高效液相色谱仪配示差折光检测器。 分析天平：分度值为 0.1 mg。 高速离心机：转速不低于 15000 r/min。 超声振荡器。 涡旋混合器。 滤膜：0.22 μm 有机相滤膜。 分析步骤 6.1 试样的预处理 称取均匀饲料样品10 g（精确至0.0001 g）于100 mL的具塞三角瓶中，加入70 mL 50%乙腈溶液（4.6）， 于超声波振荡器中超声萃取30 min后，转移至100 mL容量瓶中，用50%乙腈溶液（4.6）定容至刻度线， 混匀。取该提取液并经4000 r/min离心5 min后，取上清液2.0 mL，加入20 μL的甲酸（4.3）酸化后， 加入100 mg的PSA（4.4）和100 mg 的GCB（4.5）作为复合吸附剂，涡旋混合1 min，15000 r/min下离 心5 min，取上清液以0.22 μm滤膜（5.6）过滤，滤液供分析用。 6.2 测定条件 6.2.1 液相色谱条件 液相色谱条件参照下列要求： a) 色谱柱：氨基柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)或性能相当的色谱柱； b) 柱温：35 ℃； c) 流动相：乙腈+水= 65+35（v+v）； d) 流速：1.0 mL/min； e) 进样量：20 μL。 6.2.2 测定 试样和标准品溶液，按照规定色谱条件分别进样20 μL，以蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、蔗果 六糖保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图参见附录A中的图A.1。 7 结果计算 试样中各组分 X i 的百分含量，按式（1）计算： Xi  C  V  100 ..................................... (1) m  1000 式中： Xi——试样中各组分i的百分含量(蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、蔗果六糖)，单位为克每百克 （g/100 g）； C ——试样溶液中各组分i的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； V ——试样定容体积，单位为毫升（mL）； 2 DB35/T 1737—2018 m ——试样质量，单位为克（g）。 试样中低聚果糖的百分含量，按式（2）计算： F = F1+ F2+ F3+ F4 .................................... (2) 式中： F—低聚果糖的百分含量，单位为克每百克（g/100 g）； F1—蔗果三糖的百分含量，单位为克每百克（g/100 g）； F2—蔗果四糖的百分含量，单位为克每百克（g/100 g）； F3—蔗果五糖的百分含量，单位为克每百克（g/100 g）； F4—蔗果六糖的百分含量，单位为克每百克（g/100 g）。 结果保留小数点后两位。 8 重复性 在重复性条件下，获得两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 3 DB35/T 1737—2018 附 录 A （资料性附录） 低聚果糖标准品色谱图 低聚果糖标准品色谱图见图A.1。 说明： 1——蔗糖三糖（0.3 mg/mL）； 2——蔗糖四糖（0.5 mg/mL）； 3——蔗糖五糖（0.3 mg/mL）； 4——蔗糖六糖（0.3 mg/mL）。 图A.1 低聚果糖标准品色谱图 _________________________________ 4 DB35/T 1737－2018 福 建 省 地 方 标 准 饲料中低聚果糖的测定 高效液相色谱法 DB35/T 1737—2018 * 2018 年 4 月第一版 2018 年 4 月第一次印刷