ICS 65.020.01 DB23 B 64 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2338—2019 侧金盏花组培快繁技术规程 2019-04-03 发布 黑龙江省市场监督管理局 2019-05-02 实施 发布 DB23/T 2338—2019 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省森林工业总局提出。 本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究、黑龙江省林业监测规划院、黑龙江茅兰沟国家级自然保 护区、黑龙江省林业科学院、黑龙江丰林国家级自然保护区管理局、哈尔滨理工大学。 本标准主要起草人：李晶、王丹、王承义、王颖、王英、孙海滨、孙一萌、黄金龙、王晓荣、舒钰、 赵学丽、崔崧、刘延滨、刘强。 I DB23/T 2338—2019 侧金盏花组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了侧金盏花（Adonis amurensis Regel et Rddde）组培快繁技术的培养基制备、外植体 选择、采集与消毒处理、培养条件、诱导分化与继代增殖、生根培养、组培苗炼苗与移栽和技术档案。 本标准适用于侧金盏花组织培养生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 3 GB/T 6001 育苗技术规程 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁育苗技术规程。 3.1 培养基制备 培养基 初代培养基：MS+ NAA 0.1 mg/L +IAA 0.5 mg/L+琼脂6.0 g/L+蔗糖20 g/L，pH值调至5.8； 诱导分化培养基：MS+6-BA 0.8 mg/L+ NAA 0.3 mg/L+琼脂6.0 g/L+蔗糖20 g/L，pH值调至5.8； 继代增殖培养基：MS+6-BA 0.8 mg/L+ NAA 0.5 mg/L+琼脂6.0 g/L+蔗糖20g/L，pH值调至5.8； 生根培养基：1/2 MS+IAA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L+琼脂6.0 g/L+蔗糖20 g/L，pH值调至5.8。 培养基制备按NY/T 2306进行。 3.2 培养基消毒灭菌。 瓶装培养基需在10 h内完成灭菌，采用高压蒸汽灭菌锅灭菌，在压力0.105 MPa、温度121 ℃条件下 灭20 min～25 min，锅内的灭菌物应不超过锅的容量3/4，高压灭菌时锅内使用蒸馏水。 3.3 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7 d内使用，2 ℃～4 ℃条件下14 d内使用。培养基应保存 于洁净环境中，应避光和防尘。 4 4.1 外植体采集及处理 采集时间 1 DB23/T 2338—2019 应选择晴天上午采集外植体。 4.2 采集部位 五月上旬，花凋落后，选择生长健壮无病虫害的母株，剪取有芽茎段作为外植体，外植体大小4 cm～5 cm。 4.3 外植体清洗 洗涤剂清洗表面泥土，然后用自来水冲洗2 h～3 h。 4.4 外植体灭菌 将外植体用洗涤剂作表面清洗后，流水冲洗30 min，放入超净台中,加入75 %酒精灭菌10 s，无菌水 冲洗3次～5次，然后用0.1 %升汞灭菌8 min，无菌水冲洗3次～5次,并用无菌水浸泡20min，无菌滤纸吸 干水分备用。 4.5 切割 将外植体两端各剪去2 mm，应保持茎段长度1.0 cm～2.0 cm。 5 5.1 培养条件 温度 培养室温度应控制在25 ℃±2 ℃。 5.2 湿度 培养室相对湿度应保持40 ％～50 ％。 5.3 光照强度 培养室光照强度控制在27μmol•m-2•s-1～36μmol•m-2•s-1。 5.4 光照时间 每天光照12h。 6 6.1 诱导分化与继代增殖 外植体的接种 将培养瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒，将外植体放入培养瓶中，每个培养瓶放3个外植体，接 种后盖上封口膜，并标注日期。 6.2 初代培养 将消毒好的茎段接种到初代培养基上，培养40 d生长侧芽。 6.3 诱导分化 2 DB23/T 2338—2019 将侧芽接种到分化培养基中进行诱导分化。每个培养瓶放3个～4个外植体，培养10 d后开始分化不 定芽，20 d分化成丛生芽。 6.4 继代增殖培养 将芽接种到继代增殖培养基中，经过50d可分化成丛生苗，3周～5周继代一次。 7 生根培养 选取生长健壮且高度在1.0 cm～2.0 cm的分化苗，接种到生根培养基中进行生根培养，培养30 d诱 导生根。 8 组培苗炼苗与移栽 8.1 炼苗 8.1.1 炼苗标准 当组培幼苗基部长出3条以上新根、根长1.0 cm～2.0 cm即可进行炼苗。 8.1.2 炼苗方法 将组培苗转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在 20 ℃～25 ℃，湿度在 70 %～80 %， 揭去封口膜，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，3 d 后移栽。 8.2 移栽 8.2.1 基质选择 蛭石。 8.2.2 移栽方法 取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，移栽至基质中，育苗基质放入育苗容器并浇透水，育苗 盘规格35 cm×50 cm×10 cm，基质厚度5 cm～7 cm，株行距3 cm～3 cm，组培苗移栽应在傍晚进行，育苗 管理按GB/T 6001进行。 8.2.3 移栽管理 50 %透光率遮光网遮光7 d，7 d后移除，温室应保持80 %～90 %的空气湿度，温度应保持18 ℃～25 ℃。 9 技术档案 档案内容主要包括：材料来源、外植体类型、培养基及植物生长调节剂、诱导率、污染率、增殖系 数、生根率和移栽成活率。 3 DB23/T 2338—2019 附录A （规范性附录） 技术档案表 A.1 技术档案表 培养基及植物生长 材料来源 外植体类型 移栽成活 诱导率% 调节剂浓度 污染率% 增殖系数 生根率% 率% 4