(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210911995.1 (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 绵阳市中心医院 地址 621000 四川省绵阳市涪城区常家巷 12号 (72)发明人 刘丹　柯琦　陈杨　刘盛均　 (74)专利代理 机构 成都四合天行知识产权代理 有限公司 51274 专利代理师 廖祥文 (51)Int.Cl. G01N 1/28(2006.01) G01N 1/30(2006.01) (54)发明名称 脱黑色素溶液及应用、 脱黑色素的方法及应 用和染色方法 (57)摘要 本发明公开了一种脱黑色素溶液及应用、 脱 黑色素的方法及应用和染色方法， 脱黑色素的方 法包括向沸腾的所述脱黑色素溶液中加入待脱 黑色素的组织切片后保温20分钟； 操作简单方 便， 修复同时即可去除黑色素， 黑色素脱色均匀 彻底， 无论黑色素含量多少都可适用； 组织完整 性、 抗原性均保留完整， 减少了染色过程中弱阳 性和假阴性的出现； 无需额外花时间脱色素， 大 大缩短操作时间， 避免了脱色时间、 漂白时间、 变 化温度等 不易控制因素的干 扰。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115266271 A 2022.11.01 CN 115266271 A 1.一种脱黑色素溶液， 其特征在于， 向pH值为8.8～9.0的EDTA修复液中加入过氧化氢 溶液制备而成， 所述脱黑色素 溶液中过氧化氢的浓度为0.75％。 2.根据权利要求1所述的脱黑色素 溶液， 其特征在于， 所述EDTA修复液的pH值 为9.0。 3.一种脱黑色素的方法， 其特征在于， 所述方法包括： 向沸腾的权利要求1或2所述脱黑 色素溶液中加入待 脱黑色素的组织切片后保温20分钟。 4.一种权利要求1或2所述的脱黑色素 溶液在免疫组织 化学染色中的应用。 5.一种权利要求3所述的脱黑色素的方法在免疫组织 化学染色中的应用。 6.一种免疫组织的染色方法， 其特 征在于， 所述方法包括： 向沸腾的权利要求1或2所述脱黑色素溶液中加入待脱黑色素的组织切片后保温20分 钟， 得到待染色组织切片； 对所述待染色组织切片进行染色。 7.根据权利要求6所述的免疫组织的染色方法， 其特征在于， 在所述对待染色组织切片 进行染色中采用H E染色液进行染色。 8.根据权利要求6所述的免疫组织的染色方法， 其特征在于， 在所述对待染色组织切片 进行染色中采用免疫组织 化学染色。 9.根据权利要求8所述的免疫组织的染色方法， 其特征在于， 所述免疫组织化学染色包 括以下步骤： 将所述待染色组织切片进行第一次滴加一抗， 室温下保持30～45min； 第二次滴加第二 抗试剂， 室温下保持20～3 0min； DAB显色， 室温保持10～15mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115266271 A 2脱黑色素溶液及应用、 脱黑色素的方 法及应用和染色方 法 技术领域 [0001]本发明涉及免疫组织化学染色技术领域， 具体涉及一种脱黑色素溶液及应用、 脱 黑色素的方法及应用和染色方法。 背景技术 [0002]恶性黑色素瘤是病理科日常工作中比较常见的一类肿瘤， 需进行免疫组化染色辅 助诊断， 但部 分黑色素瘤中黑色素大量沉积， 形成深浅不一的棕黄 色、 棕褐色或棕黑色的黑 色素颗粒与免疫组化 染色常用的DNA显 色剂颜色非常接近， 相互干扰， 难以区分， 影响判读； 因此需要进行脱色素处理。 据文献报道国内外学者对脱黑色素进行了多种 方法的探索， 大 致分为五类。 [0003]第一类是在常规免疫组织化学染色DAB显色后， 运用不同的染液复染将黑色素颗 粒显色为不同程度的绿色， 可与棕褐色的阳性颗粒区分， 但无论使用哪种染液复染， 都存在 有过量黑色素在组织和细胞中堆积时物理遮蔽严重的现象， 使得组织结构和细胞的形态不 清， 细胞的异型性和核分裂像观察困难， 并妨碍抗体与细胞中抗原结合， 造成假阴性或染色 减弱的现象， 影响诊断， 因此 此方法不适合含大量 黑色素组织。 [0004]第二类是运用罗氏免疫组化ultra  View Universal  AP Red Delection  Kit(AP 染色液)来标记抗原， FR显 色使阳性颗粒为玫红色与组织原有的棕褐色色素颗粒形成对比， 但FR显色切片不可使用乙醇类脱 水剂脱水， 接触乙醇类脱 水剂可使标记的红色阳性颗粒褪 色， 令实验失败； 也不能使用二甲苯进行透明处理， 影响切片的透明度和清晰度； 并且FR显 色切片需使用水性封片剂封固， 不利于切片的长期保存； 同时也存在细胞中堆积过量黑色 素时会妨碍抗体与细胞中抗原结合， 造成假阴性或染色减弱的 的问题。 [0005]第三类是在组织脱水前进行脱黑色素处理获得满意结果， 但该方法耗时太长(36 ‑ 40小时)， 脱黑色素时间与黑色素含量呈正比脱色时间难以掌握， 且对 是否含有黑色素难以 估计。 [0006]第四类是运用不 同浓度的高锰酸钾脱黑色素， 也是目前最经典常用的方法， 但组 织切片经强氧化剂脱黑色素处理后进 行免疫组织化学检测存在一定的问题， 一是这种传统 的脱色素方法费时长(2 ‑4小时)， 脱色素的时间与色素含量呈正比， 且对是否含有色素难以 估计， 脱色时间难以掌握； 二是草酸漂白时间不易控制， 草酸漂白时要根据色素多少， 随时 关注切片颜色变化， 至组织不再脱色时应立即水洗终止反应， 若漂白时间过短， 脱色不干 净， 若漂白时间过长， 会 出现细胞核淡然不着色， 组织结构不清， 影响阅片； 三是需考虑抗原 的敏感性和特异性存在的差异， 切片长时间浸泡在高锰酸钾中会引起部分抗原丢失， 抗原 抗体结合位点 失去活性的情况， 从而 出现弱阳性或假阴性的结果； 四是易造成组织掉片， 可 能是由于强氧化剂作用于切片破坏了玻片上的涂胶多聚赖氨酸阳离子基团的结构， 使载玻 片粘附力下降导 致的， 从而无法进行后续的免疫组织 化学染色。 [0007]第五类是用H2O2脱黑色素， H2O2对大部分抗原均适用， 室温下对抗原性基本无影 响； 但是H2O2脱色素的能力与温度和处理时间密切相关， 温度越高时间越长脱色素越彻底，说　明　书 1/5 页 3 CN 115266271 A 3