(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210482907.0 (22)申请日 2022.05.05 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 李景平　席咏梅　郑慧梅　金帆　 李晨　杨小航　张峰彬　梁忠炎　 吴敬根　侯佳汝　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 邱启旺 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G01N 33/573(2006.01) (54)发明名称 RBBP7基因/蛋白作为药物靶点在制备诊断 及治疗男性不育疾病产品中的应用 (57)摘要 本发明提供了RBBP7基因/蛋白作为药物靶 点在制备诊断及治疗男性不育疾病产品中的应 用。 实验表明RBBP7突变基因/蛋白导致男性不 育、 精子发生障碍、 生精阻滞、 无精子。 本发明的 RBBP7突变基因/蛋白及其1个致病突变位点可作 为诊断男性不育的靶基因。 同时， RBBP7基因/蛋 白的RBBP7的表达 水平非梗阻性无精子患者中显 著降低， 通过提高RBBP7蛋白活性和/或表 达量可 以预防和/或治 疗男性不育症。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图6页 CN 114854844 A 2022.08.05 CN 114854844 A 1.检测RB BP7基因/蛋白异常的试剂在制备诊断男性 不育症检测试剂盒的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述RBBP7基因异常包括以下异常中的至 少一种： 基因的启动子或者增强子序列突变， 基因编码序列存在单或多碱基序列缺 失、 插入 或替换； 所述RBBP7蛋白异常包括以下异常中的至少一种： RBBP7蛋白表达减少， RBBP7蛋白提前 终止或表达缺失， RB BP7蛋白重要功能域中氨基酸 缺失、 插入或替换。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， RBBP7基因在最后一个外显子上发生半合 子突变， 其核苷 酸序列是RBBP7基因序列的第16863960位的1个T碱基插入， 而导致翻译提前 终止； 或其氨基酸序列是RBBP7多肽的第401位氨基酸由W突变成M， 且402 ‑425位氨基酸截短 成AGE， 提前终止 。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述男性不育症检测试剂 盒包括用于检测 RBBP7蛋白或RB BP7 DNA、 mRNA、 RNA序列的试剂或靶向RB BP7的miRNA。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 检测RBBP7  DNA序列的试剂包括RBBP7全基 因组测序、 RB BP7全外显子组测序检测试剂； 检测RBBP7蛋白的试剂包括特异性结合RB BP7蛋白的抗体。 6.一种特异性结合RB BP7蛋白的抗体在制备男性 不育症检测试剂盒中的应用。 7.一种诊断男性不育症的试剂盒， 包括用于检测如SEQ  ID NO.1所示的核苷酸序列或 如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的试剂。 8.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 试剂包括1对引物， 所述引物的核苷酸序 列如SEQ ID NO.3～SEQ  ID NO.4所示。 9.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括记载有判断标准的载体； 所述判 断标准为： 如果待测者精子中存在RBBP7突变基因/蛋白， 则所述待测者为或疑似为男性不 育患者。 10.RBBP7基因/蛋白作为药物靶点在制备产品中应用， 所述产品功能可能如下A1)至 A9)中的至少一种： A1)预防男性不育； A2)治疗男性不育； A3)提高男性生育能力； A4)促进精子的成熟； A5) 促进生精细胞有丝分裂； A6)促进生精细胞减数分裂； A7)降低生精细胞凋亡； A8)促进生精 细胞分化； A 9)修复生精细胞的细胞周期。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854844 A 2RBBP7基因/蛋白作 为药物靶点在制备诊断及治疗男性不育疾 病产品中的应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药领域， 具体涉及RBBP7基因和/或蛋白作为分子标志物在诊断 男性不育疾病中的应用， 以及涉及对人类男性 不育症基因致病突变位 点的检测方法。 背景技术 [0002]近几十年来， 全世界男性生殖能力不断下降， 精子的数量及质量都在降低。 育龄夫 妇不孕不育患病率高达15％， 其中男性因素约占50％， 男性不育症给个人、 家庭和社会 带来 了沉重的负担。 临床上男性不育主要表现为少弱畸精子症或无精子症， 其中非梗阻性无精 子症 (non‑obstructive  azoospermia,NOA)， 其病变部位主要在于睾丸， 导致精液中检测 不到精子， 是男性不育中最严重的情况之一。 导致男性不育症的病因复杂， 包括生殖系统解 剖结构及功能因素、 感染因素、 内分泌免疫因素、 遗传因素、 精神心理因素等等。 基因缺陷引 起的睾丸生精功能障碍约占男性不育症的10％ ‑15％， 部分少弱精子症及无精子症患者能 够通过辅助生殖技术(ART)获得自己的后代， 但对于基因缺陷导致的男性不育或精子发生 异常， ART可使其发生垂直传递， 从而影响子代的生殖健康。 [0003]RBBP7基因位于X染色体上， 属于高度保守的WD ‑repeat蛋白亚家族， 其是许多组蛋 白修饰和染色质重塑复合体的重要组成成分， 参与细胞内组蛋白乙酰化、 去乙酰化、 DNA甲 基化等生物学进程， 调控许多生理、 病理过程。 在临床上， 仅知视网膜母细胞瘤和肾母细胞 瘤 1(Wilms 1)等一些癌症与RBBP7表达水平异常相关， 但目前没有发现该基因突变导致疾 病发生的家系或其他直接证据。 RBBP7功能多样， 在肾母细胞瘤中， RBBP7是肿瘤抑制因子   WT1的靶基因， 可以抑制细胞生长速度； 在非小细胞肺癌细胞中， 敲低RBBP7可抑制肺癌细胞 的迁移能力。 在小鼠卵母细胞中敲低RBBP7的表达后， 会影响减数分裂进程和染色体分离； 因为RBBP7与调节纺锤体解聚的VCP相互作用， 敲低RBBP7干扰第一次减数分裂后期纺锤体 的解聚， 影响同源染色体的精确分离， 导致减 数分裂阻滞； 此外， 敲低RBBP7扰乱了组蛋白乙 酰化水平， 影响减数分裂染色体乘客复合体(CPC)的正确定位， 也会导致减数分裂阻滞。 雄 性大鼠减 数分裂和精子发生的表达谱研究中， RBBP7被认 为可能是调节减数分裂候选基因。 与RBBP7互作的基因中， 如RBBP7的上游基因WT1调控睾丸中Sertoli细胞的细胞极性， 小鼠 中缺失WT1导致生殖细胞死亡， 输精管中仅有Sertoli细胞。 尽管对RBBP7  的研究取得了很 多的进展， 但是临床上RB BP7突变引起男性 生精障碍导 致男性不育症还未 见报道。 [0004]RBBP7蛋白在多个物种间保守， 并且在哺乳动物睾丸中高表达。 RBBP7在精子发生 中的生物学功能和相关 分子机制仍然不清楚。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供RBBP7作为分子标志物在诊断男性不育疾病中的应用， 本 发明发现特发性非梗阻性无精子症(NOA)的发生与RBBP7基因异常或RBBP7基因编码蛋白表 达水平异常相关。 通过检测RBBP7基因序列或RBBP7蛋白表达水平可明确判断特发性NOA  与说　明　书 1/7 页 3 CN 114854844 A 3