(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211009479.6 (22)申请日 2022.08.22 (71)申请人 杭州柏炬 科技有限公司 地址 311500 浙江省杭州市桐庐县 县城健 康路9号5号楼 A座-409室 (72)发明人 毛凌峰　杨狄　倪莉丽　吕潜　 孙雪慧　吴斯豪　 (74)专利代理 机构 杭州汇和信专利代理有限公 司 33475 专利代理师 吴琰 (51)Int.Cl. C12M 1/38(2006.01) C12M 1/36(2006.01) C12M 1/34(2006.01) C12M 1/02(2006.01)C12M 1/00(2006.01) C40B 60/14(2006.01) C12Q 1/6806(2018.01) (54)发明名称 一种阶梯取样的自动建库仪以及建库方法 (57)摘要 本发明公开了一种阶梯取样的自动建库仪 及建库方法， 包括制冷模组、 热循环模组、 常温试 剂存储模组、 枪头模组、 加热震荡模组、 光学检测 模组、 磁吸模组、 机械移动模组； 枪头模组包括若 干个可上下叠放的枪头架， 枪头架上设有若干个 用于存放枪头的枪头孔， 枪头架上设有定位连接 机构， 上下两个枪头架之间通过定位连接机构相 连； 机械移动模组， 设置在移动导轨部件 上， 移动 导轨部件驱动机械移动模组沿着X轴方向和Y轴 方向移动， 机械移动模组上设有可上下移动的移 液器和可上下移动的机械手部件。 本发明能够代 替人工实现自动建库操作， 省时省力， 操作效率 高。 权利要求书2页 说明书10页 附图17页 CN 115197833 A 2022.10.18 CN 115197833 A 1.一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 包括制冷模组、 热循环模组、 常温试剂存 储模组、 枪头模组、 加热震荡模组、 光学检测模组、 磁吸模组、 机 械移动模组； 枪头模组包括若干个可上下叠放的枪头架， 枪头架上设有若干个用于存放枪头的枪头 孔， 枪头架上设有定位连接 机构， 上下两个枪头架之间通过定位连接 机构相连； 机械移动模组， 设置在移动导轨部件上， 移动导轨部件驱动机械移动模组沿着X轴方向 和Y轴方向移动， 机 械移动模组上设有可 上下移动的移液器和可 上下移动的机 械手部件。 2.根据权利要求1所述的一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 所述制冷模组、 热 循环模组、 常温试剂存储模组设置在枪头模组的一侧， 加热震 荡模组、 磁吸模组和光学检测 模组位于枪头模组的另一侧。 3.根据权利要求1所述的一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 所述磁吸模组包括 支撑座、 设置在支撑座上的P CR板托架、 磁力柱底板托， P CR板托架上设有用于驱动磁力柱底 板托上下移动的升降驱动装置， 磁力柱底板托上设有磁力柱固定板， 磁力柱固定板上设有 若干个磁力柱； PCR板托架上端的两侧设有定位槽； 当PCR板放置在PCR板托架上时， P CR板的 两侧卡入PCR板托架上的定位槽中， 磁力柱固定 板位于PCR板的下 方。 4.根据权利要求1所述的一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 所述定位连接机构 包括设置在枪头架上侧的定位套筒和设置在枪头架下方的与定位套筒相对应的定位插杆， 当枪头架竖直叠放时， 位于上方的枪头架上的定位插杆插入位于下方的枪头架上的定位套 筒中。 5.根据权利要求1所述的一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 所述机械移动模组 包括安装基板， 安装基板与 移动导轨部件相连， 安装基板上滑动连接有升降架， 安装基板上 设有用于驱动升降架移动的升降驱动机构； 移液器和机械手部件设置在升降架上， 升降架 上还设有用于驱动移液器上下移动的移液器升降驱动装置和用于驱动机械手部件上下移 动的机械手部件升降驱动装置 。 6.根据权利要求5所述的一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 所述升降驱动机构 包括设置在安装基板上的升降驱动电机、 第一导轨， 第一导轨竖直设置在安装基板上， 第一 导轨上连接有第一滑块， 升降架安装在第一滑块上； 安装基板上转动连接有丝杆， 丝杆与第 一导轨平行， 丝杆与升降驱动电机传动连接， 升降架上设有与丝杆相对应的螺纹孔， 丝杆螺 纹连接在螺纹孔中。 7.根据权利要求5所述的一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 所述升降架上设有 固定板， 固定板上设有第二导轨， 第二导轨沿着竖直方向设置， 第二导轨上连接有第二滑 块， 机械手部件安装在第二滑块上； 机械手部件升降驱动装置上设有可竖直移动的第一输 出轴， 第一输出轴的一端连接 机械手部件。 8.根据权利要求1所述的一种阶梯取样的自动建库仪， 其特征在于， 移液器升降驱动装 置上设有可 竖直移动的第二输出轴， 第二输出轴的一端连接移液器。 9.一种建库方法， 其特征在于， 采用权利要求1到8任一所述的阶梯取样的自动建库仪 实现纳米孔单分子 长片段测序平台的文库自动化构建， 覆盖 长片段扩增子及基因 组建库。 10.根据权利要求9所述的建库方法， 其特 征在于， 包括： 取未知浓度样本置于PCR板的1 ‑3列区域， 移动未知样本至光学检测模组以获取未知样 本的初始浓度；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115197833 A 2将末端修复酶预混液分液至热循环模组的PCR板的4 ‑6列区域， 基于所述初始浓度自1 ‑ 3列区域移取设定体积量的未知样本加入4 ‑6列区域得到 混匀液体， 调控热循环模组的温度 对所述混匀液体进行孵育； 自常温试剂存储模组中移取设定体积的磁珠加入孵育后的混匀 液体， 转移PCR板至加热震荡模组完成震荡孵育后转移PCR板至磁吸模组上， 在磁吸模组保 持磁吸状态时移除上清液后加入清洗试剂； 保持磁 吸状态吸去上清液， 并重复一次加入清 洗试剂后再次移除上清液； 保持磁吸状态自然风干30s后， 转移PCR板至加热震荡模组并加 入常温试剂存贮模组上的核酸洗脱液孵育， 再次转移PCR板至磁吸模组分离磁珠后转移上 清液至PCR板的7 ‑9列区域； 从制冷模组中吸取核酸分子标签加入PCR板的7 ‑9列区域并加入从制冷模组吸取的T/A 连接酶预混液后得到 混匀液体； 转移P CR板至热循环模组后控温孵育， 自常温试剂存储模组 中移取设定体积的磁珠加入孵育后的混匀液体， 转移PCR板至加热震荡模组完成震荡孵育 后转移PCR板至磁吸模组， 在磁吸模组保持磁吸状态时移除上清液后加入清洗试剂， 保持磁 吸状态吸去上清， 并重复一次加入清洗试剂后再次移除上清； 保持磁吸状态自然风干30s 后， 转移PCR板至加热震荡模组并加入常温试剂存贮模组上的核酸洗脱液， 待孵育3分钟后 再次转移P CR板至磁吸模组分离磁珠； 吸取分离后的样本至光学检测区检测样本二次浓度， 基于所述样本二次浓度计算每个样本所需混样体积， 吸取所述混样体积的每例样本至PCR 板的10列A孔区实现高通 量混样； 在PCR板的10列A孔区加入特定体积测序接头和快速连接酶及缓冲液后混匀， 转移至热 循环模组控温孵育， 自常温试剂存储模组中移取设定体积的磁珠加入孵育后的混匀液体， 转移PCR板至加热震 荡模组完成震荡孵育后转移P CR板至磁吸模组， 在磁吸模组保持磁吸状 态时移除上清液； 转移P CR板至加热震 荡模组后加入从制冷模组吸取的接头清洗试剂混匀， 接着转移P CR板至磁吸模组使 液相与磁珠分离后移除上清液； 重复一次转移P CR板至加热震 荡模组后加入从制冷模组吸取 的接头清洗试剂混匀， 接着转移PCR板至磁吸模组使液相与 磁珠分离后移除上清液； 保持磁吸状态自然风干30s后， 转移PCR板至加热震荡模组并加入 从制冷模组吸取的加接头核酸洗脱液震荡混匀并孵育10分钟， 接着转移PCR板至磁吸模组 使液相与磁珠分离， 吸取上清液至PCR板的10列E孔区,即得到合格的高质量基于纳米孔单 分子测序平台的多样本文库。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115197833 A 3