(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211057618.2 (22)申请日 2022.08.31 (71)申请人 深圳市曙芯生物科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市南 山区桃源街 道平山社区丽山路65号平山民企科技 园2栋5层505 (72)发明人 赵智　李浩东　詹果　邝杰辉　 (74)专利代理 机构 深圳市汉 瑞知识产权代理事 务所(普通 合伙) 44766 专利代理师 陈秀丽 (51)Int.Cl. C12P 19/34(2006.01) C12M 1/40(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种高通 量基因合成方法 (57)摘要 本发明涉及一种高通量基因合 成方法， 所述 高通量基因合成方法， 包括以下步骤： 对芯片表 面进行处理， 获得具有网格形状的微结构芯片， 将所述微结构芯片清洗干燥后进行镀膜处理， 制 得亲疏水网格 芯片； 在所述亲疏水网格 芯片的网 格内采用喷墨打印方法合成DNA； 将合成的DNA进 行氨解、 转移， 然后进行拼接和扩增， 获得高通量 的合成基因。 拼接和扩增产物可进一步组装成重 组质粒。 本发明中的合成方法简单， 成本低、 通量 高且效率较高。 理论上基因合成成本可降到 0.35‑0.4元/bp， 仅为当前主流合成成本的一半 左右， 一次性合成的寡聚核苷酸链可满足100 ‑ 1000条基因的拼接， 可在短时间内合成大量基 因。 权利要求书2页 说明书13页 附图3页 CN 115323019 A 2022.11.11 CN 115323019 A 1.一种高通 量基因合成方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 对芯片表面进行处理， 获得具有网格形状的微结构芯片， 将所述微结构芯片清洗干燥 后进行镀膜处 理， 制得亲疏水网格芯片； 在所述亲 疏水网格芯片的网格内采用喷墨打印方法合成DNA； 将合成的所述DNA进行氨解、 转移， 然后进行拼接和扩增， 获得高通 量合成基因。 2.根据权利要求1所述的合成方法， 其特征在于， 所述微结构， 包括圆柱体、 锥形体、 立 方体、 半圆体、 棱台、 抛物线、 正弦或球形 结构中的任意 一种或多种。 3.根据权利要求2所述的合成方法， 其特征在于， 所述微结构中， 圆柱体、 立方体、 半圆 体、 球形结构的直径为(0.01 ‑100)微米， 锥形体、 棱台、 抛物线、 正弦结构的最大宽度为 (0.01‑100)微米。 4.权利要求1所述的合成方法， 其特征在于， 所述镀膜处理， 包括溶液镀膜、 物理真空镀 膜或CVD气相镀膜中的任意 一种。 5.根据权利要求1至4任一项所述的合成方法， 其特征在于， 合成DNA的方法， 包括以下 步骤： 先将所述亲疏水网格芯片的表面进行脱保护处理， 清洗干燥后， 通过喷墨打印方法打 印第一碱基和催化剂； 然后将芯片表面先后在流体 中流通加帽试剂、 氧化试剂， 并分别进行清洗干燥处理， 再 在芯片表面 流通脱保护试剂； 重复打印第一碱基及后续的过程， 以合成第二碱基至第N碱基。 6.根据权利要求1至4任一项所述的合成方法， 其特征在于， 所述氨解， 包括以下步骤： 将合成有DNA的芯片用溶剂清洗后， 干燥处理， 然后将芯片正面朝上放入氨 解仪中， 在(0.1 ‑ 0.75)Mpa、 (6 0‑90)℃下氨解(1 ‑4)小时。 7.根据权利要求1至4任一项所述的合成方法， 其特征在于， 所述转移， 包括以下步骤： 首先在芯片的每一个网格内添加5 ‑30ul纯水， 静止或轻微震 荡5分钟， 然后通过移液装置将 网格内的水吸取到转移到标准的96， 394或15 36孔板内。 8.根据权利要求1至4任一项所述的合成方法， 其特征在于， 所述拼接和扩增， 包括以下 步骤： (1)首先去除DNA三级结构； (2)然后解除DNA的双链及单链空间位阻， 再在(50 ‑55)℃下进行同源片段或引物配对， 并进行DNA段延伸补齐双链； (3)重复步骤(2)5 ‑10次； (4)解除DNA双链及 单链空间位阻， 再在(56 ‑60)℃下进行同源片段或引物配对， 并进行 DNA片段延伸补齐双链； (5)重复步骤(4)20 ‑30次； (6)修复补齐DNA双链错配碱基。 9.根据权利要求1至4任一项所述的合成方法， 其特征在于， 将获得的所述高通量合成 基因， 进行质粒组装， 所述质粒 组装， 还包括将5 ’方向延伸后 片段与质粒进 行重组形成重组 质粒过程， 该过程包括以下步骤： 分别将载体片段和基因片段末端5 ’至3’方向DNA单链水解切除， 基因片段末端与载体权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115323019 A 2片段末端 形成同源互补末端， 然后将未形成DNA双链的末端区域补齐， 最后将末端重组区域 3’5’磷酸二脂键连接上 形成完整的重组质粒。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115323019 A 3