(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210522900.7 (22)申请日 2022.05.13 (71)申请人 中国一冶集团有限公司 地址 430081 湖北省武汉市青山区工业大 道3号 (72)发明人 谢宇　龙明　曾凡虎　张海东　 谭斌　呙于平　贾君座　黄永炳　 倪裳　徐杰斐　黄福瑶　 (74)专利代理 机构 湖北武汉 永嘉专利代理有限 公司 42102 专利代理师 李丹 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/36(2006.01) C12N 11/14(2006.01)C12N 9/42(2006.01) C12N 9/26(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/38(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C02F 101/16(2006.01) (54)发明名称 一种用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂 及其制备和使用方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于黑臭水体脱氮的复 合微生物菌剂及其制备和使用方法， 按重量份数 由50～60份土著微生物吸附剂、 2 0～30份微生物 菌种、 10～20份营养剂、 5～10份酶制剂组成。 包 括以下步骤： 首先， 取黑臭水体分离富集脱氮土 著微生物并制成微生物悬浮液； 其次， 将膨润土 和活性炭置于微生物悬浮液中震荡吸附得土著 微生物吸附剂； 最后， 将土著微生物吸附剂与微 生物菌种、 营养剂和酶制剂混合得复合微生物菌 剂。 本发明所制得的复合微生物菌剂在黑臭水体 中脱氮效果好， 适应低溶解氧环境、 在水体上、 中 和下层均能生长 繁殖脱氮。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115305216 A 2022.11.08 CN 115305216 A 1.一种用于黑臭 水体脱氮的复合 微生物菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 包 含如下步骤： (1)取黑臭 水体， 分离富 集脱氮土著微 生物并制成微 生物悬浮液； (2)将微生物载体灭菌， 置 于微生物悬浮液中震荡吸附， 烘干得土著微 生物吸附剂； (3)将土著微 生物吸附剂与微 生物菌种 、 营养剂和酶制剂混合得复合 微生物菌剂。 2.如权利要求1所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤(1)取黑臭 水体， 分离富 集脱氮土著微 生物并制成微 生物悬浮液， 具体方法如下： 1)取黑臭 水体水样与底泥， 加入细菌富 集培养基， 厌氧 下震荡培 养得到菌液； 2)取步骤1)制备的菌液， 间隔24h加入黑臭水体水样、 无机盐营养液驯化培养， 以3d为 一周期， 前一周 周期结束取菌液重复步骤2)， 共3周期， 得到 菌液A； 3)将步骤2)菌液A涂于平板固体培养基中培养至长出微黄、 边缘规则、 菌落透明有光泽 的杆状菌落； 取 上述菌落与已灭菌的牛肉高 蛋白胨培 养液中震荡培 养， 得对数期菌液； 4)取一定量对数期菌液于无菌离心管中离心， 去除上部培养基， 洗涤， 用生理盐水将菌 体制成微 生物悬浮液。 3.如权利要求2所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤1)中黑臭水体水样与底泥体积5ml， 细菌富集培养基45ml， 30℃、 150r/min恒 温摇 床中震荡培 养时间2d。 4.如权利要求2所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤2)中所 取得菌液10ml， 加入的黑臭 水体水样体积10ml， 无机盐营养液3 0ml。 5.如权利要求2所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤3)中牛肉高 蛋白胨培 养液体积10 0ml， 30℃、 150r/min恒温摇床中震荡培 养24h。 6.如权利要求2所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤4)中所 取对数期菌液体积5 0ml， 4000r/min离心十分钟， 制成的微 生物悬浮液5 0m。 7.如权利要求1所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤(2)中微生物载体为膨润土和活性炭， 质量比7： 3～7： 1， 灭菌条件 是高压蒸汽灭菌 锅中灭菌20min； 微生物载体与微生物悬浮液质量体积比为1g： 10ml～1g： 20ml， 于20～30 ℃、 150r/min恒温摇床中震荡吸附12 ～24h， 105℃烘干1～ 2h。 8.如权利要求1所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤(3)中微生物菌种为厌氧氨氧化菌、 芽孢杆菌属和假单胞杆菌属； 营养剂按质份数 为葡萄糖5～10份、 淀粉2～4份、 NH4Cl0.5～1份、 NaN O30.5～1份、 甲醇0.5～1份、 Na2 CO30.5 ～1份、 KH2PO40.5～1份以及微量元素0.5～1份； 酶制剂为葡萄糖酶和淀粉酶； 复合微生物 菌剂按质量份数由50～60份土著微生物吸附剂、 20～30份微生物菌种、 10～20份营养剂、 5 ～10份酶制剂组成。 9.一种用于黑臭 水体脱氮的复合 微生物菌剂的使用方法， 其特 征在于， 使用方法如下： (1)取上述复合微生物菌剂与黑臭水体水样， 按质量体积比1kg： 10L混合均匀， 厌氧条 件下常温放置24h得菌液； (2)将上述菌液直接泼洒到黑臭 水体中， 投加量 为2～2.5L/m3。 10.如权利要求9所述的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的使用方法， 其特征在 于： 所述复合 微生物菌剂是由如权利要求1 ‑8任一所述的方法制备而成的。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115305216 A 2一种用于黑 臭水体脱氮的 复合微生物菌剂及其制备和使用 方法 技术领域 [0001]本发明涉及水体脱氮的技术领域， 尤其涉及一种用于黑臭水体脱氮的复合微生物 菌剂及其制备和使用方法。 背景技术 [0002]近年来， 随着中国工业化进程的加快和经济 的快速发展， 大量未经处理的或处理 不完全的工业废水进入河流、 湖泊， 同时化肥的产生和过量使用、 有机垃圾和家畜家禽粪便 等随着地表径流进入水体， 导致水体中氮元素超标。 氮的过量使植物疯涨， 藻类大量繁殖， 水生生物残体在水体不断积累， 水体溶解氧含量下降， 逐渐富营养化和黑臭， 严重影响动植 物的生存以及人的身体健康， 降低城市生态 环境质量。 [0003]目前黑臭水体氮污染的控制 方法主要有物理、 化学和生物生态法。 其中物理法主 要包括截污控源、 清除底泥、 引水换水和人工曝气等， 化学法包括絮凝剂、 氧化剂等药剂投 加。 物理法、 化学法不仅 操作繁琐复杂， 而且存在二次污染的风险、 对氮控制效果不佳。 生物 生态法利用了生物自身的生命活动， 某些特定的生物将水体中的污染物吸收、 转化为自身 生长代谢所需的营养物质， 是一种经济、 可行、 高效的治理方法。 其中微生物菌剂法是将培 养筛选出 的微生物固定在合适载体上 的一种技术， 将微生物菌剂投放到水体中， 能够对特 定的污染物进行降解， 加速改善水质， 恢复水体生态净化能力， 具有经济成本低廉、 精华效 率高、 无毒环保和 应用前景广阔等优点。 黑臭水体溶解氧含量极低， 污染物浓度高、 水质情 况复杂， 普通微生物菌剂脱氮效果差， 不适用于低溶解氧环境， 需要与曝气联用， 耐冲击负 荷差。 发明内容 [0004]基于以上现有技术的不足， 本发明所解决的技术问题在于提供一种脱氮效果好， 适应低溶解氧环境、 在黑臭水体上、 中和下层均能生长繁殖脱氮的复合微生物菌剂及其制 备和使用方法。 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明提供一种用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂的 制备方法， 包含如下步骤： [0006](1)取黑臭 水体， 分离富 集脱氮土著微 生物并制成微 生物悬浮液； [0007](2)将微生物载体灭菌， 置于微生物悬浮液中震荡吸附， 烘干得土著微生物吸附 剂； [0008](3)将土著微 生物吸附剂与微 生物菌种 、 营养剂和酶制剂混合得复合 微生物菌剂。 [0009]作为上述技术方案的优选， 本发明提供的用于黑臭水体脱氮的复合微生物菌剂及 其制备和使用方法进一 步包括下列技 术特征的部分或全部： [0010]作为上述技术方案的改进， 所述步骤(1)取黑臭水体， 分离富集脱氮土著微生物并 制成微生物悬浮液， 具体方法如下：说　明　书 1/6 页 3 CN 115305216 A 3