(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210521910.9 (22)申请日 2022.05.13 (71)申请人 济南大学 地址 250022 山东省济南市 市中区南 辛庄 西路336号 (72)发明人 谷劲松　赵晓东　张艳楠　王艺霖　 徐会连　张秀君　谭晓军　成堃　 (74)专利代理 机构 山东舜源联合知识产权代理 有限公司 373 59 专利代理师 于晓晓 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C02F 1/28(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/38(2006.01)C12R 1/225(2006.01) C12R 1/25(2006.01) C12R 1/24(2006.01) C02F 101/10(2006.01) C02F 101/16(2006.01) C02F 101/30(2006.01) C02F 103/20(2006.01) (54)发明名称 一种微生物制剂及养殖水体净化方法 (57)摘要 本发明涉及水 处理技术领域， 具体涉及一种 微生物制剂及养殖水体净化方法。 微生物制剂 包 括复合细菌固定剂和亚铁稳定剂， 复合细菌固定 剂的制备方法包括如下步骤： (1)将复合载体加 入水中搅拌， 得到预混液， 复合载体包括海藻酸 钠、 沸石粉和CaCO3； (2)向预混液中加入复合菌 液， 搅拌混合得到混合溶液； (3)将混合溶液滴入 CaCl2溶液中， 静置交联， 得到凝胶球； (4)洗涤凝 胶球， 即得复合细菌固定剂； 亚铁稳定剂为负载 有亚铁粒子的活性炭。 养殖水体净化方法为采用 上述微生物制剂降低养殖水体亚硝酸盐和/或硝 酸盐含量。 本发 明微生物制剂及养殖水体净化方 法能够获得更加快速高效的亚硝酸盐降解速率。 权利要求书1页 说明书9页 附图4页 CN 114806959 A 2022.07.29 CN 114806959 A 1.一种微生物制 剂， 其特征在于， 包括复合细菌 固定剂和亚铁稳定剂， 其中复合细菌 固 定剂的制备 方法包括如下步骤： (1)将复合载体加入水中搅拌， 得到预混液， 复合载体包括海藻酸钠、 沸石粉和CaCO3； (2)向预混液中加入复合菌液， 搅拌混合得到混合溶 液； (3)将混合溶 液滴入CaCl2溶液中， 静置交联， 得到 凝胶球； (4)洗涤凝胶球， 即得复合细菌固定剂； 亚铁稳定剂为负载有亚铁粒子的活性炭。 2.如权利要求1所述的微生物制剂， 其特征在于， 复合菌液加入量为复合载体的2wt％ ‑ 4wt％。 3.如权利要求1所述的微生物制 剂， 其特征在于， 复合菌液中含有的复合细菌包括施氏 假单胞菌、 鼠李糖乳杆菌、 植物乳杆菌、 短乳杆菌 。 4.如权利要求3所述的微 生物制剂， 其特 征在于， 复合菌液的制备 方法包括如下步骤： (Ⅰ)将活化后的施氏假单胞菌、 鼠李糖乳杆菌、 植物乳杆菌、 短乳杆菌分别接种至液体 培养基中， 37℃恒温培 养至对数生长期， 得到四种单一细菌 菌悬液； (Ⅱ)将施氏假单胞菌、 鼠李糖乳杆菌、 植物乳杆菌、 短乳杆菌的单一细菌菌悬液按照2： 1～2： 1～2： 1～2的质量比混合， 然后配制成活菌数≥1.0 ×109cfu/mL的复合菌液。 5.如权利要求3所述的微生物制 剂， 其特征在于， 施氏假单胞菌、 鼠李糖乳杆菌、 植物乳 杆菌、 短乳杆菌的单一细菌 菌悬液按照2： 1： 2： 2的质量比混合。 6.如权利要求1所述的微生物制剂， 其特征在于， 亚铁稳定剂的制备方法包括如下步 骤： (a)活性炭用蒸馏水冲洗干净后超声， 取出后用电炉温火煮沸， 反复换水煮至水干净， 然后干燥备用； (b)取FeSO4·7H2O和步骤(a)处理后的活性炭置于烧杯 中， 加入蒸馏水并搅拌均匀， 烧 杯密封后放入烘 箱中浸润； (c)浸润后， 用蒸馏水冲洗石墨烯至水清澈， 然后干燥备用。 7.如权利要求1所述的微生物制 剂， 其特征在于， 复合细菌固定剂和亚铁稳定剂的质量 比为2： 1。 8.一种养殖水体净化方法， 其特征在于， 采用如权利要求1 ‑7任一所述的微生物制 剂降 低养殖水体亚硝酸盐和/或硝酸盐含量。 9.如权利要求8所述的养殖水体净化方法， 其特征在于， 使用微生物制 剂净化养殖水体 后， 对复合细菌固定剂和亚铁稳定剂分别进行回收再生， 将复合细菌固定剂保藏于麦芽汁 液体培养基中再生， 将亚铁稳定剂置 于H2SO4溶液中洗脱后重新浸润F eSO4·7H2O再生。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114806959 A 2一种微生物制剂及养殖水体净化方 法 技术领域 [0001]本发明涉及水处 理技术领域， 具体涉及一种微 生物制剂及养殖 水体净化方法。 背景技术 [0002]渔业生产在 生产生活中具有重要意义。 在养殖水体中投入大量饵料会造成氮素的 大量积累， 这些氮素通过各种微生物的作用， 转化为氨氮、 亚硝酸盐和硝酸盐， 一方面被藻 类和水生植物吸收， 另一方面硝酸盐在条件成熟的时候通过脱氮作用将硝态氮转化为氮 气。 如果水体达到一定的自净平衡状态， 没有外力干涉， 那么水体中的氮循环会比较正常， 硝酸氮将一直维持在稳定状态。 但是在养殖水体内， 定期使用的消毒药剂会把有害的和有 益的细菌通通杀灭， 导致氧气供应不 足， 进而造成硝化过程受阻， 最 终致使亚硝酸盐的含量 居高不下。 [0003]一旦水体中的亚硝酸盐富集， 不仅会对养殖水环境造成危害， 使水体处于富营养 化状态， 导致浮游生物在水中迅速生长， 降低水体的透明度， 使水生态系统严重恶化； 也会 对养殖动物造成危害， 养殖动物吸收的亚硝酸盐后会引起体内酶的水解活性改变， 同时会 破坏细胞膜稳定性， 出现进食困难、 呼吸不畅、 免疫力下降等不良反应， 甚至大量死亡。 亚硝 酸盐被人体 吸收， 可以与血液中起传送氧气功能的血红蛋白反应形成高血红蛋白， 从而影 响血液中的氧的传输能力， 当人体内亚硝酸盐含量高时， 会形成 高度致癌、 致突变物质亚硝 基胺和亚硝基酰胺， 它 们会诱导产生脑、 肠道、 神经系统、 骨骼、 皮肤 等肿瘤疾病。 [0004]微生态制剂降解法被认为是减少或消除养殖水体中有害化合物污染的一种新型 有效的生物治理方法， 已经在水污染治理中得到了广泛的研究和应用。 微生态制剂 中的益 生菌能利用所在环 境所提供的营养物质(污染物)生长繁殖， 在将营养物质变成自身物质的 同时， 将水体中大量污染物质分解 成水、 氮气等无害的物质释放到环境中去， 从而达到净化 水体的作用。 罗秀针等发现从海底养殖池的底泥中筛选到的假单胞菌JN1具有很好的降解 亚硝酸盐的能力， 降解率达到35％以上。 梁前才等研究沼泽红假单胞菌、 枯草芽孢杆菌和地 衣芽孢杆菌在的单一菌剂投放和复合菌剂投放模式下对水体亚硝酸氮的降解效率， 结果表 明复合菌剂比单一菌剂能更高效地降解亚硝酸氮。 施大林等利用光合细菌、 乳酸菌、 纳豆芽 孢杆菌、 硝化细菌进行复合配比净化养殖水体， 处理5天， 亚硝酸盐去除率达80％。 CN104118945A公开了一种降解养殖水体中亚硝酸盐的复合微生态制剂及应用， 以粪链球 菌、 光合细菌和反硝化细菌重量比为20： 5： 5， 结合辅料沸 石粉、 膨润土和滑石粉的重量比为 35： 21： 14制成微生态制剂处理养殖水体， 亚硝酸盐降解率最高可达63.53％。 CN109536190B 公开了一种用于水质净化的复合菌剂， 以植物乳杆菌与西姆芽孢杆菌比为2： 1制备复合菌 剂处理养殖水体， 亚硝酸盐降解率最高可达93％。 微生物处理养殖废水， 具有成本低、 见效 快的特点， 但受环境影响大， 处理效果不稳定， 而且复合菌剂中有益菌群存活率和含量低、 生物活性和适应性差， 对亚硝酸盐降解效果 不稳定。说　明　书 1/9 页 3 CN 114806959 A 3