(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210517127.5 (22)申请日 2022.05.13 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.24646 202 2.04.06 (71)申请人 新疆农业科 学院 地址 830091 新疆 维吾尔自治区乌鲁 木齐 市沙依巴克区南昌路40 3号 (72)发明人 王成　范盈盈　刘峰娟　丁宇　 阳瑾　于吕健　贾秦岚　马玉珊　 段帅帅　钦巧眉　李世翠　韩杰　 (74)专利代理 机构 北京鼎佳达知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11348 专利代理师 刘铁生　孟阿妮 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)A23L 5/20(2016.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 莫海威芽孢杆菌YL-RY0310及其培养方法和 应用 (57)摘要 本发明提供了一株新分离的莫海威芽孢杆 菌(Bacillus  mojavensis)YL ‑RY0310及其培养 方法和应用， 所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus   mojavensis)YL ‑RY0310于2022年4月6日保藏于 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心， 保藏编号为CGMCC  NO.24646， 该莫海威芽孢 杆菌在平板对峙试验中显示出对扩展青霉菌生 长有较好的抑制作用， 同时对展青霉素的合成也 有抑制作用， 可将其应用于果蔬展青霉素污染的 生物防治中。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图3页 CN 114921368 A 2022.08.19 CN 114921368 A 1.一株莫海威芽孢杆菌(Bacillus  mojavensis)YL ‑RY0310， 于2022年4月6日保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心， 保藏编号 为CGMCC NO.24646 。 2.如权利要求1所述的莫海威芽孢杆菌YL ‑RY0310的培养方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： 将菌株YL ‑RY0310用接种针接种到NA固体培养基上活化， 在25 ‑40℃的培养箱中培养 24‑48h， 用接种 针挑取莫海威芽孢杆菌的单菌落， 转移至NB液体培养基中， 在25 ‑40℃的振 荡培养箱中以125 ‑150r/min的速率培养12 ‑24h， 吸取液体培养基总体积1 ‑5％的培养液转 移至新鲜的NB液体培养基 中， 在25‑40℃下以125‑150r/min培养24 ‑72h， 获得YL ‑RY0310发 酵液， 活菌数达 到(1‑10)×107CFU/mL。 3.权利要求1所述的莫海威芽孢杆菌 YL‑RY0310在防治果蔬扩展青 霉污染中的应用。 4.如权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述应用包括以下步骤： 将浓度为(1 ‑10)×107CFU/mL的莫海威芽孢杆菌YL ‑RY0310的发酵液直接喷洒在生物样 品表面。 5.一种含有权利要求1所述的莫海威芽孢杆菌 YL‑RY0310的生防制剂。 6.如权利要求5所述的生防制 剂， 其特征在于， 所述生防制剂的形式为液体、 喷粉、 干燥 可湿性粉剂或干燥可湿性颗粒。 7.如权利要求5所述的生防制剂， 其特征在于， 所述生防制剂含有上述的YL ‑RY0310发 酵液。 8.一种权利要求5 ‑7任一项所述的生防制剂在防治果蔬展青 霉素污染中的应用。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述防治果蔬展青霉素污染包括抑制扩展青 霉菌生长和抑制展青 霉素合成中的至少一种。 10.如权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述应用包括以下步骤： 将上述生防制 剂喷 洒在生物样品表面， 以抑制扩展青 霉菌及展青 霉素。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921368 A 2莫海威芽孢杆菌YL ‑RY0310及其培养方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及果蔬真菌毒素防控技术领域， 具体涉及一株莫海威芽孢杆菌YL ‑ RY0310及其培 养方法和应用。 背景技术 [0002]中国是全球最大的苹果生产国， 产量占全球苹果产量的50％以上， 是除瓜类以外 我国产量最大的水果品种， 在我国水果产业中具有重要地位。 然而在苹 果的采摘、 储藏及运 输过程中由扩展青霉(P.expansum)引起的苹果青霉病较为严重， 在造成巨大经济损失的同 时还在果实体内积累了大量对人体健康有潜在威胁的展青 霉素(Patul in， PAT， C7H6O4)。 [0003]早在2005年世界卫生组织(WHO)曾报道过PAT是一种基因毒性化合物， WHO和美 国 食品药品监督管理局(USAFDA)都对食品中PAT的检测含量限定为50 μg/kg。 由于孕妇及婴幼 儿属于暴露在PAT 下的高危人群， 日本将这一标准提高至10 μg/kg， 欧盟委员会 更是把PAT每 日最高容许摄入量限制在0.4μg/kg。 我国苹果种 植面积及产量虽常年均居世界首位， 但出 口量却因毒素检出率受到严格的限制。 有研究表明在25份的苹果汁样品中发现有8％的样 品都检测到展青霉素的存在； 陕西的不同加工季节苹果汁样品中展青霉素的污染率到达 96.7‑100％， 其水平约为6.30 ‑8.90 μg/kg； 近两年又有研究者对我国市场上销售和消费的 137种水果产品进行调查， 得出被展青霉素污染率为30.7％， 其浓度范 围从10‑276.9 μg/kg 不等。 因此防控展青 霉素对果蔬的污染已经成为亟 待解决的问题。 [0004]化学杀菌剂一直是对防控病菌侵染果实中常用的重要方法， 但随着深入研究发现 大多数化学杀菌剂都存在潜在致癌的风险， 且长期使用还会加剧环境的污染并使病菌产生 抗药性。 相对来讲， 采用安全、 环保、 高效的生物杀菌剂更为科 学、 合理和迫切。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本 发明的主要目的在 于提供一株能抑制扩展青霉菌(P.expansum)生长 和高效抑制 展青霉素产生的莫海威芽孢杆菌YL ‑RY0310及其培养方法和应用， 具有抑制 采 后苹果中扩展青 霉的生长， 同时抑制体内展青 霉素产生的效果。 [0006]本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。 依据本发明提出 的一株莫海威芽孢杆菌(Bacillus  mojavensis)YL‑RY0310， 已于2 022年4月6日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心， 保藏编号 为CGMCC NO.24646 。 [0007]上述莫海威芽孢杆菌(Bacillus  mojavensis)YL ‑RY0310是首次从新疆和田昆玉 244团枣园地的土壤中分离出的， 对苹果中扩展青霉菌和展青霉素具有良好抑制效果的生 防菌株YL ‑RY0310， 经16S  rRNA鉴定为莫海威芽孢杆菌 。 [0008]本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术方案来实现。 依据本发明提出 的一株莫海威芽孢杆菌 YL‑RY0310的培养方法， 包括以下步骤： [0009]将菌株YL ‑RY0310用接种针接种到NA固体培养基上活化， 在25 ‑40℃的培养箱中培 养24‑48h， 用接种 针挑取莫海威芽孢杆菌的单菌落， 转移至NB液体培养基中， 在25 ‑40℃的说　明　书 1/8 页 3 CN 114921368 A 3