(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210523107.9 (22)申请日 2022.05.14 (71)申请人 昆明理工大 学 地址 650093 云南省昆明市五华区学府路 253号 (72)发明人 梁小波　谭海青　商攀飞　王振宇　 罗扬　陈玮玮　冯应山　刘贻坦　 韩鹏　 (74)专利代理 机构 昆明同聚专利代理有限公司 53214 专利代理师 苏芸芸 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23B 9/28(2006.01) A23K 30/00(2016.01)C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种耐高温抗菌活性发酵液及其在经济作 物贮藏中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种耐高温抗菌活性发酵液， 其是通过液态发酵贝莱斯芽孢杆菌 （ Bacillus   velezensis ） FS001， 离心去除菌体后， 可直接或 灭菌后使用； 发酵液具有良好的耐高温和耐酸碱 特性， 将该耐高温抗菌活性发酵液应用在经济作 物、 饲料贮藏中， 发酵产物对黄曲霉具有很强的 抑制活性； 延长贮藏期效果， 本发明耐高温抗菌 活性发酵液在经济作物及饲料贮藏方面具有广 阔的应用前 景。 权利要求书1页 说明书9页 附图3页 CN 114958661 A 2022.08.30 CN 114958661 A 1.一种耐高温抗菌活性发酵液， 其特征在于： 通过液态发酵贝莱斯芽孢杆菌 （ Bacillus   velezensis ） FS001， 离心去除菌体后制得。 2.权利要求1所述的耐高温抗菌活性发酵 液在经济作物、 饲料贮藏中的应用。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于： 经济作物包括玉米、 小麦、 花 生。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958661 A 2一种耐高 温抗菌活性发酵液及其在经 济作物贮藏 中的应用 技术领域 [0001]本发明属于应用微生物技术领域， 具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌FS001 （ Bacillus  velezensis  FS001） 液态发酵制备耐高温抗菌活性发酵 液， 及其在经济作物贮藏中的应用。 背景技术 [0002]粮食、 饲料、 经济作物及其加工制品， 在贮藏过程中易受到微生物 （比如细菌、 真菌 以及放线菌等） 的侵染， 其中， 危害最大的是真菌及其真菌毒 素。 真菌毒 素污染动物产品 （如 动物组织、 蛋、 奶等） 和粮食后， 不易清除， 不仅会降低产品的营养价值和经济价值， 且通过 食物链传递， 威胁人体健康。 在动植物养殖、 生产、 贮藏、 加工、 销售等环节中， 细菌、 真菌性 病害的控制仍然依靠传统的化学药物和抗生素。 然而， 长时间、 大剂量、 大面积的不正当使 用， 会导致病原菌产生耐药、 药物残留， 以及环境污染等问题， 对人类身体健康造成安全隐 患。 因此， 研究保护粮食作物的替代解决方案已势在必行， 在这些替代物中， 通过有益微生 物的生物控制是减少与使用合成化学品， 减少其对环境的负面影响的一种 可能方法。 与生 物防治有关的科学证据表明， 酵母、 细菌和真菌等微生物有能力通过防止真菌毒素在动物 饲料和动物源性食品中的存在来减轻真菌毒素。 发明内容 [0003]针对现有技术存在的问题， 本发明提供了一种耐高温抗菌活性发酵液， 其是通过 液态发酵贝莱斯芽孢杆菌 （ Bacillus  velezensis ） FS001， 离心去除菌体后制得， 可直接使 用功能或灭菌后使用。 [0004]为了实现上述发明目的， 本发明通过以下技 术方案来实现： 本申请中的贝莱斯芽孢杆菌FS001 （ Bacillus  velezensis  FS001） 已经在本发明 申请日之前在202110275531.1 中公开过， 其在中 国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物 中心的保藏编号 为CGMCCNo.17946。 [0005]本发明中贝莱斯芽孢 杆菌FS001的液态发酵培养基 （GLB） 为胰蛋白胨10 ‑15g、 氯化 钠10‑15g、 酵母提取物2 ‑10g、 玉米淀粉10 ‑20g、 磷酸二氢钠0.5 ‑1.5g， 加水加热煮沸至溶 解， 定容至1L， 冷却至室温后调节pH 至5.0‑6.0， 121℃高压蒸汽灭菌20 ‑30min。 [0006]采用贝莱斯芽孢 杆菌FS001发酵的方法如下： （1） 配制LB 培养基， 121℃高压蒸汽灭 菌20min， 将保存在 ‑80℃超低温冰箱中的贝莱斯芽孢杆菌FS001取出于LB固体平板上划线 分离活化12h， 挑取平板上的单菌落于含5mL液体LB培养基的试管中， 37℃、 250rpm振 荡培养 12h， 作为后续发酵使用的种 子液； （2） 配制GLB培养基， 将种 子液接入含50mL  GLB培养基的 250mL锥形瓶中， 31℃、 2 50rpm振荡培养36h ‑60h。 将发酵液在10000rpm条件下离心10min， 弃 掉菌沉淀， 收集上清液于 0.22 μm水系滤膜过 滤除菌， 测定其对黄曲霉的抑制活性。 [0007]抑黄曲霉活性的测定方法： （1） 用含吐温80的0.01mol/L磷酸盐缓冲液洗脱生长在 PDA平板上的黄曲霉孢子， 制成均匀的孢子悬液并在显微镜下用血球计数板计数； （2） 配制 PDA培养基并121℃高压蒸汽灭菌20min后， 凉至45℃ ‑60℃后加 入黄曲霉孢子悬液， 使体系说　明　书 1/9 页 3 CN 114958661 A 3