(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210526304.6 (22)申请日 2022.05.16 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.18270 2019.07.2 2 CGMCC NO.1826 5 2019.07.2 2 CGMCC NO.18261 2019.07.2 2 (71)申请人 湖南中烟工业有限责任公司 地址 410014 湖南省长 沙市雨花区万家丽 中路三段18 8号 (72)发明人 张锦韬　夏凯　易克　郭山虎　 高志豪　杜江　李光华　唐应勇　 门思润　徐赛　付品山　盘文政　 张琦　尚海丽　 (74)专利代理 机构 长沙市融智专利事务所(普 通合伙) 43114 专利代理师 袁靖(51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12N 1/20(2006.01) A01G 13/00(2006.01) A01G 24/28(2018.01) A01G 24/15(2018.01) A01G 24/10(2018.01) A01N 63/38(2020.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01) C05G 3/60(2020.01) C05F 17/20(2020.01) C12R 1/885(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种具有防控烟草根腐病功能的微生物菌 剂及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种具有防控烟草根腐病功 能的微生物菌剂及其应用， 包括以下三株功能菌 株复配而成： 一株保藏号为CGMCCNO.18270 的具 有抑制群结腐霉病原真菌生长繁殖的木霉菌 (Trichoderma  spp.)WSWFJ ‑17、 一株保藏号为 CGMCC NO.18265的具有抑制异丝腐霉病原真菌 生长繁殖的枯草芽孢杆菌(B acillussubtilis) WSWFJ‑20、 一株保藏号为CGMCC  NO.18261的具有 促生长、 促植物抗性提升作用的解淀粉芽孢杆菌 (Bacillusamyloliquefaciens)WSWFJ ‑19。 本发 明产品能有效降低烟草根腐病的发病率， 同时能 促进烟草根系恢复和再生长， 提高烟草抗性和生 长活力。 权利要求书2页 说明书21页 附图2页 CN 115322907 A 2022.11.11 CN 115322907 A 1.一种具有防控烟草根腐病功能的微生物菌剂， 其特征在于， 包括以下三株功能菌株 复配而成： 一株保藏号为CGMCC  NO.18270的具有抑制群结腐霉病原真菌生长繁殖的木霉菌 (Trichoderma  spp.)WSWFJ ‑17、 一株保藏号为CGMCCNO.18265的具有抑制异丝腐霉病原真 菌生长繁殖的枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)WSWFJ ‑20、 一株保藏号为CGMCC   NO .18261的具有促生长、 促植物抗性提升作用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus   amyloliquefaciens)WSWFJ ‑19。 2.根据权利要求1所述的具有防控烟草根腐病功能的微生物菌剂， 其特征在于， 两种芽 孢杆菌菌粉中有效活菌数均为1 ×1011cfu/g， 木霉菌 菌粉中有效活菌数为5 ×105cfu/g。 3.根据权利要求1所述的具有防控烟草根腐病功能的微生物菌剂， 其特征在于， 将三种 菌分别发酵后制备菌粉混合制备菌剂； 进一步的， 枯草芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌和木霉菌的菌粉混合比例为质量比0.5 ‑3: 0.5‑3:1.3‑3.8。 4.根据权利要求1所述的具有防控烟草根腐病功能的微生物菌剂， 其特征在于， 枯草芽 孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌 菌粉的制备： 将活化培养的种子液按照1 ‰‑5‰的比例接种到发酵罐中的发酵培养液中， 在温度为 35℃‑38℃， 转速为100 ‑150rpm/min条件下培养48h ‑60h， 得到发酵液； 所述发酵液的有效活 菌数大于2.0 ×107cfu/mL； 将发酵液导入离心机中， 离心后排除上层菌悬液， 得到菌种浓缩 液， 并使菌种浓 缩液中的芽孢杆菌有效活菌数不小于1 ×1010cfu/mL； 加入辅料， 喷雾 干燥； 进一步地， 将菌种浓缩液加入搅拌罐中， 加入占菌种浓缩液10％～13％的辅料， 通过 0.8‑1.0Pa的压力将所述菌种浓缩 液压至旋转喷头， 并使喷头保持在转速为18000 ‑22000r/ min下喷雾， 同时在干燥塔中通入140 ‑160℃、 3800 ‑4200m3/h的热风进行干燥， 经过喷雾干 燥后制得芽孢杆菌有效活菌数不小于1 ×1011cfu/g的芽孢杆菌微 生物菌粉； 进一步地， 所述发酵培养液的组成成分及其重量份数比为： 黄豆粉2 ‑4份、 蔗糖0.5 ‑1 份、 牛肉膏1 ‑3份、 玉米粉2 ‑3份、 碳酸钙0.8 ‑1.5份、 鱼粉1 ‑2份、 磷酸二氢钾0.05 ‑0.1份、 磷 酸氢二钾0.05 ‑0.1份、 氯化钠1 ‑5份、 消泡剂0.1 ‑0.3份， 水1000份。 采用盐酸、 氢氧化钠调节 pH至6.8‑7.5。 进一步地， 所述喷雾阶段的辅料包括如 下重量份的组分： 硅藻土55～65份， 碳酸钙15～ 25份， 淀粉15～ 25份。 5.根据权利要求1所述的具有防控烟草根腐病功能的微生物菌剂， 其特征在于， 木霉菌 菌粉的制备 将活化的菌种体积6 ‰‑7‰的比例接种到液体发酵培养液中， 黑暗条件下培养55 ‑75h， 温度控制在25 ‑30℃， pH值为6.0 ‑7.0， 通气量为200 ‑260m3/h， 每小时搅拌1 ‑2次， 搅拌时间 为10‑20min， 得到发酵菌液， 所述菌液的有效活菌数大于1.0 ×1010cfu/mL； 按照18 ‑22％的 比例将菌液接种到固体培养基中， 采用浅盘发酵法进 行培养， 得到木霉菌， 再将木霉菌烘干 过筛， 得到有效活菌数不小于 5×105cfu/g菌粉； 进一步的， 发酵培养液的组成成分为： 蔗糖10 ‑80g/L， 黄豆粉 1‑30g/L， 硝酸钠0.1 ‑20g/ L， 磷酸氢二钾0.0 5‑5g/L， 硫酸锌0.0 3‑3g/L， 硫酸铁 0.01‑1g/L； 进一步的， 固体培养基 的组成成分为： 玉米粉1 ‑3份、 麸皮1 ‑3份、 黄豆粉2 ‑5份、 稻壳粉权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115322907 A 20.5‑2份， 加入原料重量6 5％‑80％的水； 进一步的， 浅盘发酵的具体步骤： 1 ‑5d内温度控制在2 1‑23℃， 当温度达到26℃以上 时， 采用通风、 冷藏方法使温度下降至21 ‑23℃， 共计发酵天数至少15d。 6.权利要求1 ‑5任一项所述的具有 防控烟草根腐病功能的微生物菌剂的应用， 其特征 在于， 在烟草育苗和移栽时进 行灌根、 蘸根处理， 用于烟草根腐病的防治， 进一步， 具体将菌 剂兑水稀释3 00‑500倍， 用于蘸根和灌根， 每 亩用量1‑2kg。 7.权利要求1 ‑5任一项所述的具有 防控烟草根腐病功能的微生物菌剂的应用， 其特征 在于， 菌剂与育苗基质混合后用于烟草育苗， 在苗期进行功能菌种的定殖， 避免根腐病的发 生， 进一步， 具体为基质和复合菌剂菌粉按照质量比10 00:2‑10进行混合， 用于 育苗。 8.权利要求1 ‑5任一项所述的具有 防控烟草根腐病功能的微生物菌剂的应用， 其特征 在于， 菌剂与有机肥料混合制成生物有机肥， 用于烟草移栽时底肥的施用， 在烟苗进入大田 时进行功能菌种的定殖， 避免根腐病的发生， 进一步， 具体为有机肥料和复合菌剂菌粉按照 质量比1000:1 ‑5进行混合制成生物有机肥， 生物有机肥每亩施用量50 ‑200kg， 包括采用穴 施、 塘施、 条施、 撒施的方法进行施用。 9.一株保藏号为CGMCC  NO.18270的具有抑制群结腐霉病原真菌生长繁殖的木霉菌 (Trichoderma spp.)WSWFJ ‑17。 10.一株保藏号为CGMCC  NO.18265的具有抑制异丝腐 霉病原真菌生长繁殖的枯草芽孢 杆菌(Baci llus subtilis)WSWFJ ‑20。 11.一株保藏号为CGMCC  NO.18261的具有促生长、 促植物抗性提升作用的解淀粉芽孢 杆菌(Baci llus amyloliquefaciens)WSWFJ ‑19。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115322907 A 3