(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210527595.0 (22)申请日 2022.05.16 (71)申请人 中国药科大学 地址 210009 江苏省南京市 鼓楼区童家巷 24号 (72)发明人 吴旭日　曹玉丹　吴羚锐　陈宁静　 徐允聪　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 专利代理师 唐循文 (51)Int.Cl. C12P 21/02(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C07K 5/078(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种多糖 基化诺卡沙星的制备方法 (57)摘要 本发明属于生物 合成领域， 具体涉及种多糖 基化诺卡沙星的制备方法。 本发 明发现获得一株 可以产生多糖基化诺卡沙星衍生物的菌株 Actinokineospora  fastidiosa  JCM 3276。 多糖 基化诺卡沙星与诺卡沙星的抗菌活性相近， 但稳 定性更佳。 因此， 本发明公开了一种成药性好的 诺卡沙星衍 生物及其产生菌 株。 权利要求书1页 说明书5页 附图6页 CN 114921512 A 2022.08.19 CN 114921512 A 1.一种多糖基化诺卡沙星的制备方法， 其特征在于新型多糖基化诺卡沙星具有下式 (I)结构： 由菌株Acti nokineospora fastidiosa JCM 3276生物合成化 合物I。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于菌株发酵培养基为Nos发酵培养基， SM20， SM1、 Noc可溶培养基或SM 5。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921512 A 2一种多糖基化诺卡沙星的制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物合成领域， 具体涉及种多糖 基化诺卡沙星的制备 方法。 背景技术： [0002]硫肽类抗生素是一类核糖体合成和翻译后修饰的肽(RiPP)天然产物， 对革兰氏阳 性病原体的各种耐药菌株具有很高的致死率。 如： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐 万古霉素屎肠球菌(VRE)等 耐药菌均有良好作用。 目前， 已发现的硫肽类化合物超过200个， 根据结构中核心氮的氧化状态不同， 将其划分为a、 b、 c、 d和e五个系列， 而诺卡沙星属于其 中氧化程度最高的e型中的代表。 (VinogradovAA ,Suga  H .Introduction  to  Thiopeptides:Biological  Activity,Biosynthesis,and  Strategies  for Functional   Reprogramming.Cell  Chem Biol.2020Aug  20； 27(8):1032 ‑1051.doi:10.1016/ j.chembiol.2020.07.003.Epub  2020Jul 21.PMID:32698017.)硫肽类抗生素作 为一种生 物多肽， 其具有多肽类物质良好的活性、 独特的机制。 例如， 诺卡沙星抗耐药菌的机制与鸟 苷三磷酸酶相关中心(GAC)密切相关(Clementi和Polac ek,2010)。 硫肽类抗生素GA C结合位 点与临床使用的抗生素多有不同(Polikanov等人， 2018年)， 这也有助于我们理解硫肽类抗 生素抗耐药菌的关键。 在翻译 过程中， GAC结合延伸因子， 从而触发它们的GTPase 活性， 而这 对于结合到新生肽链的tRNA的易位是不可或缺的。 对于硫链肽和诺西肽， 空间结合阻断GAC 并阻止转译因子与核糖体的联系， 从而导致蛋 白质合成抑制(Cameron等人， 2002； Harms等 人， 2008年； Walter等人， 2012)进 而达到强大的杀菌效果。 [0003]现有诺卡沙星是硫肽环素中具有新颖靶点、 高度抗菌活性的一种抗生素。 它作用 于细菌核糖体50S大亚基中的23S  rRNA和L11蛋白形成复合物， 从而抑制L11蛋白构象的转 变， 细菌蛋白质合成过程中的肽链转座被影响， 使细菌无法合成蛋白质， 导致菌体死亡， 进 而达到杀菌的效果。 目前， 尚无针对该靶点和机制的抗生素成药。 另外， 其能够在极低浓度 下(ng/mL)能杀死G+敏感菌和耐药菌株， 抗菌效果优于绝大多数已报道的抗生素(Naidu   BN,et al.Bioorg.Med.Chem.Lett.,2004,14:5573； LingLL,et  al.Nature,2015,517: 455)。 也正因为其新颖性与高效性， 美国百时美施贵宝公司和默克公司等多家制药企业对 其进行了长达几十年的研究， 希望通过化学或生物转化法对硫肽环素结构进 行多样化修饰 以期解决其水溶性问题(Pucci  MJ,etal.Antimicrob.Agents  Chemother.,2004,48:3697； Naidu BN ,etal .Bioorg .Med .Chem .Lett .,2004 ,14:3743； Naidu  BN ,et  al.Bioorg.M ed.Chem.Lett.,2 005,15:2069)但最终仅能够改善其水溶性， 结构稳定性问题 没有得到良好的解决优化方案， 最 终导致其成药性不 足， 投入难以得到转化， 没有完成对于 诺卡沙星的结构优化。 [0004]文献(Yousefet  al.Discovery  andbiosynthesis  ofpersiathiacins:Unusual   polyglycosylated  thiopeptides  active against  multi‑drug resistant   tuberculosis.bioRxiv  2021.10.24.465558； doi:https://doi.org/10.1101/ 2021.10.24.46 5558)报道了一种新型多糖 基化诺卡沙星具有下式(I)结构：说　明　书 1/5 页 3 CN 114921512 A 3