(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210536972.7 (22)申请日 2022.05.17 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M2021 1157 2021.09.13 (71)申请人 淮阴工学院 地址 223005 江苏省淮安市洪泽区东七街 三号高新技术产业园A12-2 （淮 阴工学 院技术转移中心 洪泽分中心） (72)发明人 王小花　吴静雨　罗楚平　夏雪芹　 徐琳　陆晨曦　张金峰　田宝霞　 邬章欣　杜未雨　黄宇洁　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 孙斌(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) C12P 21/04(2006.01) C07K 7/62(2006.01) A23K 50/30(2016.01) A23K 50/60(2016.01) A23K 10/18(2016.01) A61K 35/742(2015.01) A61P 1/12(2006.01) A61P 31/04(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 多粘芽孢杆菌 CPL258及其筛 选和应用 (57)摘要 本发明公开了一株多粘芽孢杆菌CPL258及 其筛选和应用， 该菌株CPL2 58经鉴定为多粘芽孢 杆菌(Paenibacillus  polymyxa)， 已保藏于中国 典型微生物保藏中心， 保藏时间为2 021年09月13 日， 保藏编号为CCTCC  NO.M20211157。 本发明多 粘芽孢杆菌CPL258是一种产芽孢 的革兰氏阳性 短杆状细菌， 可产生具有抑菌作用的抗菌肽类、 核苷类物质、 抗生素及抗菌蛋白等， 且其具有防 治动物性埃希氏大肠杆菌导致的猪腹泻， 从而增 强仔猪免疫力， 降低死亡率的作用。 综上， 本发明 多粘芽孢杆菌CPL258在仔猪饲料应用方面具有 广阔的前 景。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图5页 CN 114891678 A 2022.08.12 CN 114891678 A 1.一株多粘芽孢杆菌(Paenibacillus  polymyxa)CPL258， 已保藏于中国典型微生物保 藏中心， 保藏时间为2021年09月13日， 保藏编号 为CCTCC NO.M 20211157。 2.一种权利要求1所述的多粘芽孢杆菌CPL258的筛选方法， 其特征在于， 包括如下步 骤： (1)取土壤样品与生理盐水混匀， 热处理后加入NaCl， 水浴后取土壤悬液用无菌水稀 释； (2)取稀释后的稀释液滴加在LB固体培养基上， 涂布均匀， 培养得到初筛菌株， 以分离 筛选得到的初筛 菌株为供 试菌； (3)以金黄色葡萄球菌为指示菌， 采用牛津杯法筛选出具有金黄色葡萄球菌拮抗效果 多粘芽孢杆菌 CPL258。 3.一种权利要求1所述的多粘芽孢杆菌CPL258在生产具有抑菌作用的肽类、 核苷类物 质、 抗菌蛋白、 抗 生素中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述 抗生素优选为Co listin A。 5.根据权利 要求4所述的应用， 其特征在于， 所述多粘芽孢杆菌CPL258接种于发酵培养 基中进行发酵， 从发酵 液中分离获得 所述的Co listin A。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述发酵培养基的配方为每1L中包括： 蛋 白胨4.5‑5g， 玉米浆0.02 ‑0.05L， 淀粉8.0 ‑11.0g， (NH4)2SO42.8‑3.3g， CaCO3 10.0‑12.0g， K2HPO4 6.0‑8.0g， VB1、 VB3、 VB5、 VB12、 VH各1‑3mg， pH 7.0‑7.2。 7.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述发酵过程为通气比5.8 ‑6.2vvm， 转速 130‑180r/min， 接种量1.8 ‑2.0％。 8.一种权利要求1所述的多粘芽孢杆菌CPL258在制备防治猪腹泻病害的生防制剂或饲 料中的应用。 9.根据权利 要求8所述的应用， 其特征在于， 所述多粘芽孢杆菌CPL258在制备防治猪腹 泻埃希氏大肠杆菌疾病生防制剂或饲料中的应用。 10.根据权利要求8 或者9所述的应用， 其特征在于， 所述生物制 剂或者饲料中含有权利 要求1所述的多粘芽孢杆菌CPL258的菌体、 芽孢、 发酵液或者由多粘芽孢杆菌CPL258发酵液 制备的Co listin A。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891678 A 2多粘芽孢杆菌CPL258及其筛选和应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术应用领域， 具体涉及一株多粘芽孢杆菌CP L258及其筛选和应 用。 背景技术 [0002]多粘芽孢杆菌于2002年被美国环境保护 署列为商业应用微生物 之一， 也是我国农 业部规定免做安全鉴定的一级菌种之一。 该种属 微生物能在不利条件下形成芽孢， 即使在 苛刻的胃酸环境中也能保持较高的活性， 目前在畜禽生产养殖中具有较为广泛的应用。 芽 孢杆菌能改善畜禽肠道微生态环境， 治疗和预防细菌性肠道疾病， 提高动物抗病能力， 促进 动物生长。 以猪腹泻疾病为例， 已经有饲料添加多种芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌、 解淀粉芽孢 杆菌、 地衣芽孢杆菌等)提高仔 猪的抵抗力， 维持其肠道 平衡的研究报道。 [0003]多粘芽孢杆菌代谢产物之一为Colistin， 一种多组分碱性多肽类抗生素。 本项目 发现ColistinA是Colistin的成分之一， 它可以用来可用来对抗一些由革兰氏阴性菌引起 的感染。 Colistin  A的分子结构如图1所示， 它的结构主要由三部分组成， 环状7肽 包括:4个 L‑Dab， 1个L ‑Leu,1个L ‑Thr， 1个D ‑Leu； 线性3肽包括:2个L ‑Dab， 1个L ‑Thr； 疏水酰基尾包 括:甲基辛酸， 异辛酸。 分子量约为1169.5g/mol。 相对于传统的抗生素， Colistin  A具有更 高的稳定性， 但是Co listin A的产量很低， 如何高效生产Co listin A是继续解决的问题。 [0004]Colistin A如下所示： [0005] 发明内容 [0006]发明目的： 针对现有技术存在的问题， 本发明提供一株产抗细菌代谢产物的菌株 多粘芽孢杆菌(Paenibacillus  polymyxa)CPL258， 本发明筛选到的多粘芽孢杆菌CPL2 58可 以高产Co listin A， 对于猪 腹泻埃希氏大肠杆菌疾病具有非常好的效果。 [0007]本发明还提供所述多粘芽孢杆菌(Paenibacillus  polymyxa)CPL258的筛选方法 和应用。说　明　书 1/7 页 3 CN 114891678 A 3