(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210533250.6 (22)申请日 2022.05.17 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.4115 2010.08.27 CGMCC NO.23697 2021.1 1.01 CGMCC NO.23698 2021.1 1.01 (71)申请人 福建省农业科 学院农业 生物资源研 究所 地址 350000 福建省福州市五四路247号 (72)发明人 车建美　史怀　陈倩倩　刘国红　 刘波　 (74)专利代理 机构 福州市鼓楼区京华专利事务 所(普通合伙) 35212 专利代理师 林云娇(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/20(2020.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种生防复合微生物菌剂及其制备方法和 应用 (57)摘要 本发明提供一种生防复合微生物菌剂及其 制备方法和应用， 所述复合微生物菌剂包括短短 芽孢杆菌FJAT ‑0809‑GLX， 短短芽孢杆菌FJAT ‑ 10623和贝莱斯芽孢杆菌FJAT ‑55034， 所述短短 芽孢杆菌FJAT ‑0809‑GLX与短短芽孢杆菌FJAT ‑ 10623、 贝莱斯芽孢杆菌FJAT ‑55034混合菌株的 用量百分比为90％～70％:10％～30％， 其中短 短芽孢杆菌 FJAT‑10623和贝莱斯芽孢杆菌 FJAT‑ 55034的用量为1:1。 本发明的复合微生物菌剂 对 葡萄灰霉病菌、 龙眼焦腐病菌、 莲雾黑腐病菌、 枇 杷炭疽病菌、 梨炭疽病菌、 甘薯灰霉病菌具有抑 制作用， 并且对葡萄灰霉病具有良好的防治效 果。 权利要求书1页 说明书7页 序列表3页 CN 115029261 A 2022.09.09 CN 115029261 A 1.一种生防复合微生物菌剂， 其特征在于： 所述复合微生物菌剂包括短短芽孢杆菌 (Brevibacillus  brevis)FJAT ‑0809‑GLX， 短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑ 10623和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  velezensis)FJAT ‑55034， 所述短短芽孢杆菌 (Brevibacillus  brevis)FJAT ‑0809‑GLX与短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑ 10623、 贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  velezensis)FJAT‑55034混合菌株的用量百分比为90％ ～70％:10％～30％， 其中短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑10623和贝莱斯芽 孢杆菌(Baci llus velezensis)FJAT ‑55034的用量 为1:1。 2.如权利要求1所述的一种生防复合微生物菌剂的制备方法， 其特征在于： 包括如下步 骤： (1)菌株活化： 用接种环将短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑0809‑GLX、 短 短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑10623和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus   velezensis)FJAT ‑55034分别划线于LB培养基上， 并于恒 温培养箱中培养48h， 并且培养温 度为30℃； (2)制备种子液： 将步骤(1)所获得的短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT‑ 0809‑GLX、 短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑10623和贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus  velezensis)FJAT‑55034的单菌落 分别接种于100ml的LB培养基中， 并将其置于 恒温振荡摇床中培 养24h， 温度3 0℃， 转速180rpm/mi n； (3)制备液体发酵液： 按1％移种量将步骤(2)所获得的短短芽孢杆菌(Brevibacillus   brevis)FJAT‑0809‑GLX、 短短芽孢杆菌(Brev ibacillus  brevis)FJAT‑10623和贝莱斯芽孢 杆菌(Bacillus  velezensis)FJAT ‑55034种子液分别转入已消毒灭菌的LB培养基中培养， 温度30℃， 转速180rpm/mi n， 培养48h； (4)复合微生物菌剂的制备： 将步骤(3)所获得的短短芽孢杆菌(Brevibacillus   brevis)FJAT ‑10623和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  velezensis)FJAT ‑55034液体发酵液按 1:1混合， 然后将短短芽孢杆菌(B revibacillus  brevis)FJAT‑0809‑GLX菌株发酵液与该混 合发酵液按90％～70％:10％～3 0％的比例混匀即可获得 所述复合 微生物菌剂。 3.一种生防复合微生物菌剂的应用， 其特征在于： 所述复合微生物菌剂是基于权利要 求2所述的一种生防复合微生物菌剂的制备方法制备得到， 所述复合微生物菌剂用于抑制 葡萄灰霉病菌、 龙眼焦腐病菌、 莲雾黑腐病菌、 枇杷炭疽病菌、 梨炭疽病菌、 甘薯灰霉病菌的 生长。 4.一种生防复合微生物菌剂的应用， 其特征在于： 所述复合微生物菌剂是基于权利要 求2所述的一种生防复合微生物菌剂的制备方法制备得到， 所述复合微生物菌剂用于葡萄 灰霉病的防治。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115029261 A 2一种生防复合微生物菌剂及其制备方 法和应用 【技术领域】 [0001]本发明涉及微生物领域， 具体涉及一种生防复合微生物菌剂及其制备方法和应 用。 【背景技术】 [0002]葡萄灰霉病由灰葡萄孢(Botrytis  cinerea)侵染引起， 是葡萄贮藏过程中的毁灭 性病害， 每年可造成葡萄高达50％的产后损失(张迪等， 2017)。 目前葡萄灰霉病的防治仍以 化学杀菌剂为主， 但长期使用化学杀菌剂不仅容易产生抗药性， 而且农药残留导致环境污 染及威胁人类健康等。 绿色防控技术利用生态控制及生物防治等方法实现安全生产及化学 农药使用量减少目标， 从而构建环境友好型方式的生物控制措施(柯杨等， 2017； Smilanick   et al.,2010； Chen  et al.,2016)。 随着消费者对食品中的农药残留和环境安全的日益关 注， 开发病害控制的替代方法的需求也在不断增加(Rosslenbroich  et al.,2000； Romanazzi  et al.,2011)， 因而， 研究和寻找有效安全的葡萄灰霉病生物防治技术和方法， 是解决葡萄绿色种植的重要方向之一。 在实际生产应用时， 复合生防菌对环境的适应性、 抗 病范围、 防效稳定性等方面比单一菌株更有优势， 能够提高对植物病害的防治效果(孙菲菲 等， 2012； Mao et al.,1998)。 陈永珍(2 013)利用复合生防细菌解淀粉芽孢杆菌和荧光假单 胞菌防治烟草灰霉病， 对单个菌株和复合菌株进行药效测试并发现， 复合菌剂对灰霉病的 防效显著高于单一菌剂。 谯天敏(2015)利用铜绿假单胞菌和长枝木霉对竹梢枯病进行防 治， 结果表明两菌株分别对竹梢枯病有良好的防治作用， 而将两个菌株 混合使用， 协同防效 很大提高。 因此， 筛选获得不同功能微生物， 进 行复合菌剂的研发将更有助于葡萄 灰霉病菌 的绿色防控。 【发明内容】 [0003]本发明要解决的技术问题， 在于提供一种生防复合微生物菌剂及其制备方法和应 用， 该复合微生物菌剂对葡萄 灰霉病菌、 龙眼焦腐病菌、 莲雾黑腐病菌、 枇杷炭疽病菌、 梨炭 疽病菌、 甘 薯灰霉病菌具有抑制作用， 并且 对葡萄灰霉病具有良好的防治效果。 [0004]本发明是这样实现的： [0005]一种生防复合微生物菌剂 ， 所述复合微生物菌剂包括短短芽孢杆菌 (Brevibacillus  brevis)FJAT ‑0809‑GLX， 短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑ 10623和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  velezensis)FJAT ‑55034， 所述短短芽孢杆菌 (Brevibacillus  brevis)FJAT ‑0809‑GLX与短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑ 10623、 贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  velezensis)FJAT‑55034混合菌株的用量百分比为90％ ～70％:10％～30％， 其中短短芽孢杆菌(Brevibacillus  brevis)FJAT ‑10623和贝莱斯芽 孢杆菌(Baci llus velezensis)FJAT ‑55034的用量 为1:1。 [0006]进一步地， 所述的一种生防复合 微生物菌剂的制备 方法， 包括如下步骤： [0007](1)菌株活化： 用接种环将短短芽孢杆菌( Brevibacillus  brevis)FJAT ‑0809‑说　明　书 1/7 页 3 CN 115029261 A 3