(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210531928.7 (22)申请日 2022.05.17 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.15410 2018.0 3.05 (71)申请人 微康益生菌 （苏州)股份有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江经济技 术 开发区龙桥路10 33号 (72)发明人 方曙光　严涛　陈珂可　冯胜鹏　 朱建国　盖忠辉　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 边人洲 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/04(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种 菌剂的制备方法 (57)摘要 本发明提供一种保持功效递送的动物双歧 杆菌乳亚种菌剂的制备方法。 所述制备方法包括 以下步骤： （1） 将保护剂和生长特定时期的动物 双歧杆菌乳亚种菌体混合， 得到乳化液； （2） 将乳 化液和包埋壁材混合， 进行微包埋处理， 得到包 埋混合物； （3） 将包埋 混合物进行静电喷雾干燥， 得到所述保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种 菌剂。 本发 明所述制备方法能够显著减少工艺生 产过程对菌体细胞造成的损伤， 使菌体的活性得 到保持， 精准在肠道进行释放， 在贮存保质期内 仍能保持益 生菌的功效性， 适 合工业化生产。 权利要求书2页 说明书17页 附图2页 CN 114645004 A 2022.06.21 CN 114645004 A 1.一种保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特征在于， 所述制备 方法包括以下步骤： （1） 将保护剂和生长特定时期的动物双歧杆菌 乳亚种菌体混合， 得到 乳化液； 所述生长特定时期为菌体生长对数期后期和/或稳定期初期； 所述保护剂包括组分一、 组分二和组分三， 所述组分一包括海藻糖、 甜菜碱和山梨糖醇， 所述组分二包括大豆卵磷 脂， 所述组分三包括邻苯二甲酸二丁酯、 大豆蛋白和羟乙基淀粉， 且所述组分一、 组分二和 组分三分顺序加入到 菌体中； （2） 将步骤 （1） 得到的乳化液和包埋 壁材混合， 进行微包埋处 理， 得到包埋混合物； （3） 将步骤 （2） 得到的包埋混合物进行静电喷雾干燥， 得到所述保持功效递送的动物双 歧杆菌乳亚种菌剂； 步骤 （1） 中， 所述保护剂按照一定的添加顺序加入到菌体中， 所述添加顺序包括： 组分 一组分二组分三； 其中， 步骤 （1） 中， 所述保护剂中的各 组分在搅拌下加入， 所述搅拌的转速 为300‑600 rpm， 且每加入一个组分所需搅拌的时间各自独立 地为2‑8 min； 步骤 （2） 中， 所述包埋壁材的灭菌条件： 110 ‑120℃灭菌35 ‑45 min； 所述乳化液和包埋 壁材的质量比为1:(1 ‑3)； 其中， 所述包埋壁材按质量百分含量计由以下组分组成： 酪朊酸 钠5‑15%、 低聚果糖5 ‑20%， 余量为水。 2.根据权利要求1所述的保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特 征在于， 步骤 （1） 中， 所述 生长特定时期的动物双歧杆菌 乳亚种菌体由以下步骤制备 得到： （a） 将动物双歧杆菌乳亚种接种至MRS固体培养基中， 在36 ‑38℃下厌氧培养48 ‑72 h得 到单菌落， 再将所述单菌落接种至MRS液体培养基中， 在36 ‑38℃下活化培养9 ‑12 h， 得到活 化2代后的菌液； （b） 将步骤 （a） 得到的菌液以0.5 ‑5 vol%的接种量接种至MRS液体培养基中， 在36 ‑38℃ 下厌氧培养， 所述厌氧培养的过程中通过在线光密度检测仪和在线活细胞检测仪对菌体的 光密度及菌体活性进 行直接在线检测， 直至菌体生长对数期后 期和/或稳定期初期， 收集得 到菌体。 3.根据权利要求2所述的保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特 征在于， 步骤 （b） 中， 所述 直至菌体生长对数期后期和/或稳定期初期所需时间为10  h以上。 4.根据权利要求2所述的保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特 征在于， 步骤 （b） 中， 所述收集的具体步骤为： 将菌液以6500 ‑8000 rpm、 3‑5℃的条件下离心 10‑20 min， 弃去上清液， 采用无菌生理盐水清洗菌体2次以上后， 再将混合液以6500 ‑8000  rpm、 3‑5℃的条件下离心10 ‑20 min， 得到生长的特定时期的动物双歧杆菌 乳亚种菌体。 5.根据权利要求1所述的保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特 征在于， 步骤 （1） 中， 所述菌体、 组分一、 组分二和组分三的质量比为1:(0.1 ‑0.4):(0.2 ‑ 0.5):(0.2 ‑0.5)； 其中， 所述组分一按质量百分含量计 由以下组分组成： 海藻糖10 ‑25%、 甜菜碱0.1 ‑1%、 山梨糖醇0.5 ‑5%， 余量为水； 所述组分二按质量百分含量计由以下组分组成： 大豆卵磷脂 0.5‑2%， 余量为水； 所述组分三按质量百分含量计由以下 组分组成： 邻苯二甲酸二丁酯0.1 ‑ 1%、 大豆蛋白5 ‑10%、 羟乙基淀粉1 ‑5%， 余量为水。 6.根据权利要求1所述的保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114645004 A 2征在于， 步骤 （2） 中， 所述微包埋处理在搅拌下进行， 所述搅拌的转速为400 ‑600 rpm， 所述 搅拌的时间为10 ‑15 min。 7.根据权利要求1所述的保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特 征在于， 步骤 （3） 中， 所述静电喷雾干燥采用喷嘴式喷雾干燥器进 行， 具体条件参数为： 进风 温度为40 ‑60℃， 进风流量为15 ‑25 Nm3/h， 出风温度为20 ‑30℃， 雾化温度为30 ‑46℃， 雾化 压力为10 0‑350 kPa， 静电 电压为15 ‑30 kV。 8.根据权利要求1所述的保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法， 其特 征在于， 步骤 （3） 中， 所述保持功效递送的动物双歧杆菌乳亚种菌剂采用铝薄袋进 行抽真空 贮存。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114645004 A 3