(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210536195.6 (22)申请日 2022.05.17 (71)申请人 山东圣奥生物科技有限公司 地址 250000 山东省济南市高新区颖秀路 2766号生产楼1-102-176室 (72)发明人 谷劲松　张艳楠　陈立　刘文　 (74)专利代理 机构 山东舜源联合知识产权代理 有限公司 373 59 专利代理师 宋玉霞 (51)Int.Cl. C02F 3/34(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C02F 101/16(2006.01) C02F 103/20(2006.01) (54)发明名称 一种亚硝酸盐还原酶促进剂及其应用 (57)摘要 本发明涉及亚硝酸盐还原酶技术领域， 具体 涉及一种亚硝酸盐还原酶促进剂及其应用。 以重 量份数计包括60 ‑80份的0.1mmol/L  FeCl2溶液 和40‑80份酶基稳定混合物， 其中酶基稳定混合 物的制备方法为按照50： 25： 25： 2： 1的质量比将 葡萄糖、 海带多糖、 连二亚硫酸钠、 MnSO4·H2O和 CaCl2·2H2O混合， 然后用等质量水溶解混合物。 本发明提供的亚硝酸盐还原酶促进剂能够高效 提高配合使用的复合发酵液中产亚硝酸盐还原 酶的益生菌活性， 提高亚硝酸盐还原酶的产量及 其活性， 有效提高亚硝酸盐还原酶对亚硝酸盐的 分解率。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 114873739 A 2022.08.09 CN 114873739 A 1.一种亚硝酸盐还原酶促进剂， 其特征在于， 以重量份数计包括60 ‑80份的0.1mmol/ LFeCl2溶液和40 ‑80份酶基稳定混合物， 其中酶基稳定混合物的制备方法为按照50： 25： 25： 2： 1的质量比将葡萄糖、 海带多糖、 连二亚硫酸钠、 MnSO4·H2O和CaCl2·2H2O混合， 然后用等 质量水溶解混合物。 2.如权利要求1所述的亚硝 酸盐还原酶促进剂， 其特征在于， 发酵液亚铁螯合物的重量 份数为75份， 酶基稳定混合物的重量份数为5 0份。 3.一种如权利要求1所述的亚硝 酸盐还原酶促进剂的应用， 其特征在于， 将亚硝 酸盐还 原酶促进剂作为水质调控剂使用。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 将复合发酵液与亚硝酸盐还原酶促进剂加入 养殖水体中， 一起常温孵育得到发酵液亚铁螯合物， 再将发酵液亚铁螯合物泼洒入养殖环 境； 复合发酵液为植物乳杆菌(Lactobacillus  plantarum)、 干酪乳杆菌(Lactobacillus   casei)、 巨大芽孢杆菌(Bacillus  megaterium)和屎肠球菌(Enterococcus  faecium)的混 合发酵液。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 复合发酵液的制备方法为将植物乳杆菌、 干 酪乳杆菌、 巨大芽孢杆菌和屎肠球菌的菌落混合物按照3％ ‑4％的体积比接种在pH值为 6.0‑6.8的发酵培 养基中， 28℃、 厌氧培 养菌落混合物3天， 水分含量达 到80％‑90％， 即得。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 发酵培养基含有 肉骨粉7.50g、 麦麸24.38g、 MgSO4·7H2O 0.313g、 (NH4)2SO4 1.0g、 KH2PO4 2.0g、 去离子水1000mL， 制备方法为将发酵培 养基组分于121℃下高温高压灭菌， 保持15min， 静置， 待温度冷却至28℃， 形成培养基， 该发 酵培养基的pH值 为6.0‑6.8。 7.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 亚硝 酸盐还原酶促进剂与复合发酵液的体积 比为1： 40 0。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114873739 A 2一种亚硝酸盐还原酶促进剂及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 亚硝酸盐还原酶技术领域， 具体涉及 一种亚硝酸盐还原酶促进剂及其 应用。 背景技术 [0002]为追求巨大消费市场带来的庞大利润， 水产养殖逐渐发展成高密度集约化模式。 与此同时消费者的观念也在发生变化， 追求生活质量的消费者不仅需要大量的水产品， 更 是对水产品质量的要求越来越高， 而集约化养殖导致的氨氮、 亚硝酸盐、 致病菌和有毒元素 超标等正在引发让消费者和养殖户都在担忧的水产品养殖的质量问题， 其中亚硝酸盐含量 上升的问题普遍常见， 在养殖过程中亚硝酸盐含量过高不仅严重污染水体环境， 甚至诱使 水产动物患病致死。 为解决这一问题， 各种化学品类的水产制剂如消毒剂、 水质改良剂和灭 藻剂层出不穷， 这些水质改良剂将在一定程度上能够快速降低过高的亚硝酸盐含量， 但是 对养殖的生态环境以及水产动物来说， 长期使用将带来环境污染、 生态破坏、 抗药性和药物 残留等不良后果， 这些不良后果不仅限制 了水体的养殖能力， 也在很大程度上影响了养殖 动物的质量。 为此生物防治法的应用逐渐成为热点， 经走访发现在亚硝酸盐问题可控之前 使用微生态制剂对水体具有明显的改善作用， 但是亚硝酸盐问题一旦爆发， 水体的氧化还 原电位升高， 微生态制剂 便很难发挥高效的降解作用， 不仅养殖动物的生长会受到影响， 更 使得水体中部 分益生菌的生长定植受到威胁。 因此水体治理中生物防治法具有很大的局限 性。 [0003]为应对养殖动物及水 中益生菌受到的极大的安全挑战， 专一高效的亚硝酸盐还原 酶(nitritereductase， NiR)成为研究的焦点。 研究发现亚硝酸盐还原酶通过将亚硝酸盐降 解为N2或NH4+， 减少了亚硝态氮在水产环境中的积累。 目前， 根据其分子结构和包含的金属 离子不同， 将NiR分为两类： 由nirK基因编码的铜型亚硝酸盐还原酶(CuNiR)和由nirS基因 编码的细胞色素cd1 ‑亚硝酸盐还原酶(cd1 ‑NiR)。 CuNiR分布广泛， 在巨大芽孢杆菌 (Bacillus  megaterium)， 蜡样芽孢杆菌(Bacillus  cereus)， 植物乳杆菌(L actobacillus   plantarum)等中均有存在。 CuNiR是由3个相同亚基组成 的三聚体蛋白， 每个单体都包含两 种类型的铜原子活性中心， 即提供电子的T1Cu中心和起催化作用的T2Cu中心。 在T1Cu位置， Cu由2个His、 1个Cys和轴向Met配位形成四面体几何形状； T2Cu在静息状态呈(His)3‑H2O四 面体几何结构。 [0004]然而， 在亚硝酸盐 高爆发的不良水体中， 亚硝酸盐还原酶也存在活性不高的问题。 基于此， 有必要提供一种能够提高亚硝酸盐还原酶产率及活性、 促进亚硝酸盐还原酶对亚 硝酸盐分解 率的促进剂。 发明内容 [0005]针对在亚硝酸盐高爆发的不良水体中， 亚硝酸盐还原酶活性不高的技术问题， 本 发明提供一种亚硝酸盐还原酶促进剂及其应用， 本发明提供的亚硝酸盐还原酶促进剂能够说　明　书 1/8 页 3 CN 114873739 A 3