(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210538106.1 (22)申请日 2022.05.18 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.20831 2020.09.25 (71)申请人 李国安 地址 850000 西藏自治区拉萨市城关区藏 大东路与江冲路交叉口 (72)发明人 杨瑞金　 (74)专利代理 机构 南昌合达信知识产权代理事 务所(普通 合伙) 36142 专利代理师 黄晓滨 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A61K 35/742(2015.01) A61P 3/04(2006.01)A61P 37/04(2006.01) A23L 33/135(2016.01) A23K 10/18(2016.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一株枯草芽孢杆菌以及其在减肥和提升免 疫力中的应用 (57)摘要 本申请公开了一株枯草芽孢杆菌以及其在 减肥和提升免疫力中的应用。 该菌株 保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保 藏编号为CGMCC  No.22654， 分类命名为枯草芽孢 杆菌Bacillus  subtilis ‑1， 保藏日期为2020年9 月25日， 保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号 院3号。 经过体内和体外实验证实了该菌株具有 在减肥和提升免疫力方面的应用价 值。 权利要求书1页 说明书13页 附图2页 CN 115074269 A 2022.09.20 CN 115074269 A 1.一株枯草芽孢杆菌， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏 编号为CGMCC  No.22654， 分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillus  subtilis‑1， 保藏日期为202 0 年9月25日， 保藏 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 2.利用权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌的发酵 方法， 包括以下步骤： 配制种子培养液和发酵培养液， 所述种子培养液包含小麦胚芽油， 所述发酵培养液包 含麦麸粉和小麦胚芽油； 制备种子悬液， 所述种子悬液由保藏的Bacillus  subtilis ‑1进行菌种活化后， 接种于 所述种子 培养液中进行培 养得到； 获得发酵 液， 所述发酵 液是将所述种子悬 液转接至所述发酵培 养液发酵 得到； 得到干燥制品和囊泡， 所述干燥制品和囊泡均由所述发酵 液进行纯化得到 。 3.根据权利 要求2所述的发酵方法， 其特征在于， 所述种子培养液包含1.5wt％葡萄糖、 1.0wt％蛋白胨、 0.1wt％KH2PO4、 0.1wt％K2HPO4、 0.05wt％MgSO4、 0.02wt％CaC12和0.01v/ v％小麦胚芽油。 4.根据权利要求2所述的发酵方法， 其特征在于， 所述发酵培养包含1.5wt％淀粉、 1.5wt％麦麸粉、 1.0wt％蛋白胨、 0.1wt％KH2PO4、 0.1wt％K2HPO4、 0.05wt％MgSO4、 0.02wt％ CaC12和0.01v/v％小麦胚芽油。 5.根据权利要求2所述的发酵方法， 其特征在于， 得到干燥制品和囊泡的步骤具体包 括： 将发酵液于4℃、 15000 ×g离心20min， 收集上清液， 将上清液用100KD 滤膜进行超滤， 得 到滤液和包含胞外囊泡的浓 缩液； 所述浓缩液进行 纯化得到胞外囊泡； 所述滤液经减压悬蒸， 冷冻干燥， 得到冻干制品。 6.根据权利要求5所述的发酵方法， 其特征在于， 将所述浓缩液进行纯化得到胞外囊泡 的步骤包括： 将浓缩液于4℃、 10 0000×g离心10mi n， 取上清液； 上清置于10％～55％浓度梯度的密度梯度离心介质中进行密度梯度超速离心， 于4℃、 200000×g离心12h； 采用测定离心所得的层状物每层中纳米颗粒， 收集纳米颗粒较多的梯度区间， 即可得 到富集的囊泡颗粒； 取囊泡聚集区间的溶 液于4℃、 180 000×g离心2h富集得到的沉淀即可 得到胞外囊泡。 7.权利要求1所述的Baci llus subtilis‑1在制备减肥制品中的应用。 8.权利要求1所述的Baci llus subtilis‑1在制备提升免疫力制品中的应用。 9.权利要求1所述的Baci llus subtilis‑1在制备动物饲料中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074269 A 2一株枯草芽孢杆菌以及其在减肥和提升免疫力中的应用 技术领域 [0001]本申请涉及 枯草芽孢杆菌技术领域， 尤其涉及一株枯草芽孢杆菌以及 其在减肥和 提升免疫力中的应用。 背景技术 [0002]在众多的微生态制剂中， 枯草芽孢杆菌(B.subtilis)为常用的一种水质调控剂及 饲料添加剂。 枯草芽孢杆菌常以芽孢形式存在， 其通过分泌蛋白酶、 淀粉酶、 脂肪酶等多种 胞外酶， 能够快速有效分解水体中的有机物水产作为藻生长繁殖 的营养素， 藻类又通过光 合作用产生溶解氧， 供有机物分解和水中微生物及养殖动物呼吸消 耗所用， 形成一种良好 的微生态环境平衡。 另外， 枯草芽孢杆菌还通过直接分泌细菌素、 伊枯草菌素、 芬枯草菌素 等多种抗菌活性物质， 抑制病原菌的生长， 达到净化水质的目的。 同时枯草芽孢杆菌还能还 能改变养殖动物肠道菌群结构， 提高营养物质的消化吸 收， 强化动物免疫能力。 [0003]然而， 发掘枯 草芽孢杆菌 菌株资源， 以其拓展其应用领域， 仍然成为研究需要。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本申请通过特殊方法筛选得到了一株枯草芽孢杆菌， 能够形成具有促 进巨噬细胞增殖和细胞因子表达的作用， 并且其发酵产物具有减肥作用。 该枯草芽孢杆菌 作为新型 的菌株资源， 拓宽了枯草芽孢杆菌作为微生态制剂的应用范围， 具有非常实际的 应用价值。 [0005]第一方面， 本申请实施例公开了一株枯草芽孢杆菌， 保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC No.20831， 分类命名为枯草芽孢杆菌 Bacillus  subtilis ‑1， 保藏日期为2020  年9月25日， 保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1 号院3号。 [0006]第二方面， 本申请实施例公开了利用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法， 包括以下步骤： [0007]配制种子培养液和发酵培养液， 所述种子培养液包含小麦胚芽油， 所述发酵培养 液包含麦麸粉和小麦胚芽油； [0008]制备种子悬液， 所述种子悬液由保藏的Bacillus  subtilis ‑1进行菌种活化后， 接 种于所述种子 培养液中进行培 养得到； [0009]获得发酵 液， 所述发酵 液是将所述种子悬 液转接至所述发酵培 养液发酵 得到； [0010]得到干燥制品和囊泡， 所述干燥制品和囊泡均由所述发酵 液进行纯化得到 。 [0011]在本申请实施例中， 所述种子培养液包含1.5wt％葡萄糖、 1.0wt％蛋白胨、 0.1wt％KH2PO4、 0.1wt％K2HPO4、 0.05wt％MgSO4、 0.02wt％CaC12和0.01v/v％小麦胚芽油。 [0012]在本申请实施例中， 所述发酵培养包含1.5wt％淀粉、 1.5wt％麦麸粉、  1.0wt％蛋 白胨、 0.1wt％KH2PO4、 0.1wt％K2HPO4、 0.05wt％MgSO4、 0.02wt％CaC12和0.01v/v％小麦胚 芽油。说　明　书 1/13 页 3 CN 115074269 A 3