(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210536805.2 (22)申请日 2022.05.18 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114634900 A (43)申请公布日 2022.06.17 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.24041 2021.12.0 6 (73)专利权人 鲁东大学 地址 264025 山 东省烟台市芝罘区红旗中 路184号 (72)发明人 王凯　田雅楠　侯玉平　张乐乐　 薛圆圆　吕春晖　张旭　高龙坤　 马振豪　姜广峻　郑诗怡　贾龙武　 闫瀚升　俞兰良　秦耿　刘雅莉　 林强　(74)专利代理 机构 北京中济纬天专利代理有限 公司 11429 专利代理师 顾明月 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01K 61/10(2017.01) A23K 50/80(2016.01) A23K 10/18(2016.01) A61K 35/744(2015.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 31/04(2006.01) C12R 1/46(2006.01) 审查员 程静之 (54)发明名称 一株屎肠球菌LD-NXY01及其在海马养殖中 的应用 (57)摘要 本发明涉及微生物领域， 具体公开了一株屎 肠球菌LD ‑NXY01及其在海马养殖中的应用。 所述 屎肠球菌LD ‑NXY01分离自未患 肠炎的海马肠 道， 于2021年12月6日保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心， 保藏地址为中国北 京， 保藏编号为CGMCC  No.24041， 分类命名为屎 肠球菌Enterococcus  faecium。 该屎肠球菌对迟 钝爱德华氏菌YT1具有抗性， 可以预防和治疗海 马由迟钝爱德华氏菌YT1诱发的肠炎； 可以调节 海马肠道内菌群平衡和提高肠道内消化酶活性， 进而可以促进 海马生长和发育 。 权利要求书1页 说明书10页 附图3页 CN 114634900 B 2022.08.19 CN 114634900 B 1.一株屎肠球菌LD ‑NXY01， 其特征在于， 所述屎肠球菌LD ‑NXY01分离自未患肠炎的海 马的肠道， 分类命名为屎肠球菌 Enterococcus  faecium ， 保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心， 保藏地址为中国北京， 保藏日期为2021年12月06日， 保藏编号为 CGMCC No.24041。 2.权利要求1所述的屎肠球菌LD ‑NXY01的应用， 其特征在于， 所述应用包括： 在制备促 进海马生长和发育的菌剂中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述菌剂的制备方法如下： 在无菌环境中 将冻存的屎肠球菌LD ‑NXY01菌液融化， 然后接种 于MRS液体培养基中， 在37℃、 150rpm摇床 中培养13h， 之后将菌液离心， 除去上清， 用灭菌海水冲起沉淀并将菌液浓度调至1011cfu/ ml。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114634900 B 2一株屎肠球菌L D‑NXY01及其在海 马养殖中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及 一株屎肠球菌及其应用， 具体涉及一株从海马肠道中分离得到的屎肠 球菌LD‑NXY01及其在海马养殖中的应用， 属于微 生物技术领域。 背景技术 [0002]海马与其他硬骨鱼类相比， 在生殖方式、 生活习性、 器官的组织结构和功能等方面 都存在巨大差异， 例如： “雄性卵胎生 ”并且具有长期稳定的 “一雌一雄 ”繁殖单元； 游泳能力 弱， 运动范围小， 种群密度低； 体表被覆坚硬骨片， 头部与躯体呈直角， 直立游泳； 消化系统 缺少胃， 肠道短且盘曲少； 缺少胸腺和脾脏等鱼类中的中枢免疫器官以及肠道相关淋巴组 织 （GALT） ， 因此其免疫系统被认为存在一定缺陷。 [0003]在工厂化养殖中， 疾病是制约海马人工繁育快速发展的主要原因之一。 在众多疾 病中， 细菌性疾病的占比最高且危害最为严重， 尤其是细菌感染诱 发的肠炎具有 范围广、 危 害强、 季节 性、 区域性和复杂性的特点， 严重影响海马养殖的效益。 目前， 已经发现了近20种 海马的细菌病原， 绝大部 分能够诱 发海马细菌性肠炎的发生。 近期， 我们从患细菌性肠炎的 海马的肠道中分离出一种新的肠炎致病 菌——迟钝爱德华氏菌YT1 （ Edwardsiella  tarda  YT1） 。 被该迟钝爱德华氏菌YT1感染后， 海马会出现游泳能力减弱， 摄食量下降， 肛门发白、 突出， 肠道积液变多， 肠壁充 血， 腹部肿胀等现象， 导致海马大量死亡。 通过肠道微生物测序 分析发现， 海马被迟钝爱德华氏菌YT1感染后， 迟钝爱德华氏菌YT1在海马肠道中的丰度显 著升高， 而其它肠道固有的益生菌属的丰度则显著降低， 进而诱发肠道菌群和功能的严重 失衡， 导致细菌性肠炎发生。 因此， 探究如何调控和维持海马肠道微生物的健康和平衡， 抑 制病原菌生长， 对于提升海马工厂化养殖的效益具有重要意 义。 [0004]益生菌能通过重塑肠道微生物平衡， 提高养殖动物的生长速率和免疫力。 作为肠 道固有菌群的典型代表之一， 屎 肠球菌的益生作用已在 多种动物中被证实。 研究发现， 屎 肠 球菌 （HDRsEf1） 在人体肠 道中可上调  TLR1、 TLR2 和 TLR6的mRNA  水平， 尤其是  TLR2， 屎肠 球菌 （HDRsEf1） 可以独立于MyD88的模式激活TLR2  通路， 并显著下调  TLR4、 TLR5、 TLR7和 TLR8的mRNA水平， 可以调节人类肠细胞样  HT‑29 细胞的炎症反应。 在仔猪养殖中， 饲粮添 加屎肠球菌B13能提高仔猪生产性能、 粗蛋白及钙的消化率， 增强仔猪免疫力的同时， 还能 维持仔猪消化道菌群稳态， 遏制致病微生物的生长。 随着水产养殖的快速发展， 有 学者发现 鱼类饲料中添加屎肠球菌能显著提高养殖鱼的各项生长指标， 例如： 鲤鱼饲料中添加 不同 浓度的屎肠球菌可使鲤鱼血清 中超氧化物歧化酶 （SOD） 活力显著上升， 溶菌酶 （LZM） 、 碱性 磷酸酶 （AKP） 和过氧化物酶 （POD） 的活力呈上升趋势， 免疫球蛋白M （IgM） 的质量浓度也呈上 升趋势。 因此， 屎肠球菌在水产养殖中具有很好的应用前 景。 [0005]在水产养殖行业中， 益生菌通常被用做饲料添加剂， 但饲料在高温制粒时， 高温可 能会造成益生菌的失活， 从而影响益生菌的使用效果。 目前， 海马养殖主要以活体动物和冰 冻糠虾为饵料， 尚无可用商品化饲料。 因此， 将活化的益生菌剂直接投于养殖水体中， 是最 直接、 简便且有效的方法， 益生菌剂在改善水质的同时， 通过海马摄食进入海马肠道， 逐渐说　明　书 1/10 页 3 CN 114634900 B 3