(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210559681.X (22)申请日 2022.05.19 (71)申请人 南京林业大 学 地址 210037 江苏省南京市玄武区龙蟠路 159号 (72)发明人 张瑞　刘仪若　骆广利　戴林　 周鑫　徐勇　 (74)专利代理 机构 南京智转慧移知识产权代理 有限公司 32649 专利代理师 王伟 (51)Int.Cl. C12P 7/58(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种高产葡萄糖酸的方法 (57)摘要 本发明公开了一种高产 葡萄糖酸的方法， 以 葡萄糖为底物， 采用持续补 充底物方式进行好氧 发酵生产葡萄糖酸， 其中以氧化葡萄糖酸杆菌为 发酵菌株， 控制pH在4.5 ‑5.5之间， 并在发酵开始 之后定时添加过碳酸钠， 定时回收菌体循环进入 发酵体系， 发酵24h后葡萄酸累积浓度不低于 400g/L， 单位体积产率不低于15g/L/h。 本发明利 用氧化酸杆菌生物转化制备葡萄糖酸， 单位体积 生产效率高， 终产量高， 且菌体可重复利用实现 了葡萄糖酸连续 化生产。 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 CN 114891835 A 2022.08.12 CN 114891835 A 1.一种高产葡萄糖酸的方法， 以葡萄糖为底物， 采用持续补充底物方式进行好氧发酵 生产葡萄糖酸， 其特征在于， 以氧化葡萄糖酸杆菌为 发酵菌株， 控制pH在4.5 ‑5.5之间， 并在 发酵开始之后定时添加过碳酸钠， 定时回收菌体循环进入新的发酵体系使用， 发酵2 4h后葡 萄酸累积浓度不低于 500g/L。 2.根据权利要求1所述的高产葡萄糖酸的方法， 其特征在于， 初始底物葡萄糖浓度100 ～600g/L。 3.根据权利要求1所述的高产葡萄糖酸的方法， 其特征在于， 通入纯氧气并调节发酵罐 出气口控制罐压在0.01 ‑0.1MPa。 4.根据权利 要求1所述的高产葡萄糖酸的方法， 其特征在于， 搅拌转速250～550r/min， 调节温度并控制恒定在25～3 0℃。 5.根据权利要求1所述的高产葡萄糖酸的方法， 其特征在于， 初始菌体的浓度为0.5～ 2.5g/L。 6.根据权利 要求1所述的高产葡萄糖酸的方法， 其特征在于， 经发酵12～24h， 菌体生长 进入稳定期停止发酵， 回收菌体。 7.根据权利要求1所述的高产葡萄糖酸的方法， 其特征在于， 待发酵过程中pH自然下降 并低于5.5后通过自动添加碱液控制反应 体系pH在4.5 ‑5.5。 8.根据权利要求1所述的高产葡萄糖酸的方法， 其特征在于， 发酵菌体生长进入稳定期 后停止反应， 回收菌体再发酵， 并控制在发酵初始菌体的浓度为1～4g/L。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891835 A 2一种高产葡萄糖酸 的方法 技术领域 [0001]本发明属于生物工程 技术领域， 具体涉及一种高产葡萄糖酸的方法。 背景技术 [0002]葡萄糖酸是一种目前已广泛应用于建筑、 食品、 医药等领域的多羟基一元羧酸。 目 前， 葡萄糖酸工业生产方法主要生物酶法以及微生物发酵法。 酶法虽然选择性高， 但酶的成 本高且不能回收再利用。 微生物法采用可回收的菌种， 相对成本更低， 且 更容易控制。 因此， 目前工业上葡萄糖酸生产主要以微生物发酵法为主。 目前， 葡萄糖酸发酵法主要采用黑 曲 霉为生产菌株， 但产率一般不超 过20g/L/h， 产量不超过200g/L。 因此， 需要进一步提高葡萄 糖酸及其盐的生产效率及产量， 并降低生产与纯化成本 。 发明内容 [0003]针对现有技术存在的不足， 本发明所要解决的技术问题是提供一种高产葡萄糖酸 的方法， 进一 步提高葡萄糖酸的生产效率与最终产量。 [0004]为了解决上述 技术问题， 本发明采用的技 术方案为： [0005]一种高产葡萄糖酸的方法， 以葡萄糖为底物， 采用持续补充底物方式进行好氧发 酵生产葡萄糖酸； 以氧化葡萄糖酸杆菌为发酵菌株， 控制pH在4.5 ‑5.5之间， 并在发酵开始 之后定时添加过碳酸钠， 定时回收菌体循环进入发酵体系， 发酵2 4h后葡萄酸累积浓度不低 于500g/L。 [0006]所述的高产葡萄糖酸的方法， 初始 底物葡萄糖浓度10 0～600g/L。 [0007]所述的高产葡萄糖酸的方法， 通入纯氧气并调节发酵罐出气口控制罐压在0.01 ‑ 0.1MPa。 [0008]所述的高产葡萄糖酸的方法， 搅 拌转速250～550r/min， 调节温度并控制恒 定在25 ～30℃。 [0009]所述的高产葡萄糖酸的方法， 初始菌体的浓度为0.5～ 2.5g/L。 [0010]所述的高产葡萄糖酸的方法， 经发酵12 ～24h， 菌体生长进入稳定期停止发酵。 [0011]所述的高产葡萄糖酸的方法， 待发酵过程中pH自然下降并低于5.5后通过自动添 加碱液控制反应 体系pH在4.5 ‑5.5。 [0012]所述的高产葡萄糖酸的方法， 发酵菌体生长进入稳定期后停止反应， 回收菌体再 发酵， 并控制在发酵的初始菌体的浓度(干 重)为1～4g/L。 [0013]有益效果： 与现有技术相比， 本 发明的优势在于： 本发明利用氧化酸杆菌生物转化 制备葡萄糖酸， 经发酵12～24h， 菌体生长进入稳定期停止发酵， 葡萄酸累积浓度不低于 500g/L以上， 终产量高达2600g/L， 且菌体可重复利用实现了葡萄糖酸连续化生产， 具有很 好的工业 化前景。说　明　书 1/3 页 3 CN 114891835 A 3