(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210545263.5 (22)申请日 2022.05.19 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.14743 2017.09.26 (71)申请人 山东省林业科 学研究院 地址 250014 山东省济南市文化 东路42号 (72)发明人 张淑静　武海卫　马丙尧　刘幸红　 王孟筱　孙超　王霞　高嘉　 牛赡光　 (74)专利代理 机构 济南诚智商标专利事务所有 限公司 3710 5 专利代理师 韩百翠 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/27(2020.01)A01P 3/00(2006.01) C12R 1/39(2006.01) (54)发明名称 一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病 害中的应用 (57)摘要 本发明公开了一株荧光假单胞菌及其在防 治樱桃枝干病害中的应用。 本发 明自樱桃产区发 病区域的健康植株根际土壤中筛选到对樱桃枝 干病害有较强抑制效果的荧光假单胞菌 (Pseudomonas  fluorescens)GH2 ‑1， 该菌株已于 2017年09月26日保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC   NO.14743。 该菌株及其发酵上清液对樱桃枝干病 害菌均具拮抗效果， 抑菌率分别为90.98％和 87.45％； 同时， 该菌株液体制剂300倍稀释液对 樱桃枝干病害防治效果为64.3％， 能够有效控制 樱桃枝干病害的发生， 可开发针对樱桃枝干病害 的微生物农药， 实现对樱桃枝干病害绿色、 高效 防治。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 114891679 A 2022.08.12 CN 114891679 A 1.荧光假单胞菌(Pseudomonas  fluorescens)GH2 ‑1， 所述菌株的保藏编号为CGMCC   NO.14743 。 2.权利要求1所述的荧光假单胞菌GH2 ‑1菌株及其代谢产物在拮抗樱桃枝干病害病原 菌越橘间座壳(Diapor the vaccinii)中的应用。 3.一种以权利要求1所述的荧光假单胞菌(Pseudomonas  fluorescens)GH2 ‑1为主要有 效成分的生物制剂。 4.权利要求3所述的生物防治制剂的制备方法， 其特征是， 所述制备方法包括： 将荧光 假单胞菌GH2 ‑1制备种子液后， 将种子液接入发酵培养基在25～30℃条件下发酵培养30～ 36h， 得到发酵 液。 5.如权利要求4所述的制备方法， 其特征是， 所述种子液培养基， 按质量比计， 其成为及 含量为： 蛋白胨0.8～1.2％， 牛肉粉0.2～0.4％， 氯化钠0.4～0.6％， 其余为水， 调整pH7.3 ±0.1。 6.如权利要求4所述的制备方法， 其特征是， 所述发酵培养基， 按质量比计， 其成为及含 量为： 蔗糖1.5～2.5％、 可溶性淀粉1.5～2.5％、 酵母浸粉1.0～2.0％、 鱼蛋白胨0.3～ 0.5％、 硫酸镁0.03～0.08％、 磷酸二氢钾0.03～ 0.08％、 碳酸钙0.5～ 0.8％， 剩余为豆制品 废水， pH调至7.0 ‑7.2。 7.如权利要求6所述的制备方法， 其特征是， 所述豆制品废水中蛋白质含量控制在16 ‑ 18％。 8.权利要求3所述的生物防治制剂在防治樱桃枝干病害方面的应用。 9.如权利 要求8所述的应用， 其特征是， 所述樱桃枝干病害为由越橘间座 壳(Diaporthe   vaccinii)侵染引起的樱桃枝干病害。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891679 A 2一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病害中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及 一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病害中的应用， 属于微生物技 术领域。 背景技术 [0002]樱桃枝干病害是樱桃生长期的一种常见病害， 特别在幼苗移 栽后及生长期的前三 年发病严重。 该病是由越橘间座壳(Diaporthe  vaccinii)侵染引起， 樱桃树一旦感染此病， 常常导致樱桃产量的下降， 影响种植效益； 若发现不及时， 随着病原菌不断积累， 樱桃树近 乎全部死 亡， 造成绝收。 [0003]针对该病， 目前主要通过剪枯枝、 清园等物理措施进行防范， 但该方法不能有效清 除病原物， 特别是在枯枝附近的健康 植株中往往已侵染该病菌， 虽把枯枝剪掉， 但病原物还 可不断侵染， 严重影响来年樱桃挂果。 喷施化学农药虽然在一定程度上能够缓解枯枝病的 发病状况， 但对于渗透性较差的农药来说往往指标不治本。 化学农药 的大量使用还会带来 一系列问题， 如： 引起越橘间座壳抗药性， 使其防治难度加大， 还会造成环境污染， 并且樱桃 农药残留严重威胁人类健康。 生物防治由于具有防效高、 专一性强、 药效持久性好、 环境友 好， 以及不易产生抗药性等优点， 因而受到越来越多的青睐。 但目前对于樱桃枝干病害生物 防治报道少之又少。 [0004]荧光假单胞菌(Pseudomonas  fluorescens)隶属于变形菌门、 假单胞菌目、 假单胞 菌科的假单胞菌属的细菌， 在植物病害生物防治中用途广泛。 目前报道有用于防治黄连白 绢病(CN202110929652 .3)、 烟草角斑病(CN200910088952 .2)、 烟草野火病 (CN200810224386.9)、 多种细菌性软腐病(CN201810449282.1)等， 但是没有发现荧光假单 胞菌用于防治樱桃枝干病害的报道。 发明内容 [0005]针对上述问题， 本发明提供了一株荧光假单胞菌(Pseudomonas  fluorescens) GH2‑1， 该菌株及其发酵上清液对樱桃枝干病害菌均具拮抗效果， 能够 有效控制樱桃 枝干病 害的发生， 可开发针对 樱桃枝干病害的微 生物农药， 实现对 樱桃枝干病害绿色、 高效防治。 [0006]本发明首先自樱桃产区发病区域的健康植株根际土壤中分离， 并经平板对峙培养 法实验筛选到对樱桃枝干病害病原菌越橘间座壳(Diaporthe  vaccinii)具有较强拮抗效 果的荧光假单胞菌(Pseudo monas fluoresc ens)GH2‑1， 然后将该菌株于2 017年09月26日保 藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC  NO.14743。 实验 表明： 菌株GH2 ‑1及其代谢产 物均能有效抑制樱桃枝干病害菌生长， 在樱桃 枝干病害防治中 具有广泛应用前 景。 [0007]本发明还提供了上述荧光假单胞菌(Pseudomonas  fluorescens)GH2 ‑1的生物制 剂。 [0008]该生物制剂的制备方法包括： 将荧光假单胞菌GH2 ‑1制备种子液后， 将种子液接入说　明　书 1/7 页 3 CN 114891679 A 3