ICS 65.020.01 CCS B23 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2155—2021 马铃薯黑痣病田间抗性鉴定技术规程 Technique standards for resistant identification of stem canker and black scurf by Rhizoctonia solani in potato in fields 2021-04-15 发布 2021-05-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2155—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区马铃薯生产与种植标准化技术委员会（SM/TC42）归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、中国农业科学院农业资源与农业区划研究所、兴安盟农牧业科 学研究所。 本文件主要起草人：张笑宇、于卓、李得宙、于肖夏、卢艳丽、尤艳华、张冬梅、李宇晨、刘雨薇、 王野、冯亚艳、王丽玮、修志君、宋亚迪、邢星。 I DB15/T 2155—2021 马铃薯黑痣病田间抗性鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了田间马铃薯抗黑痣病鉴定材料的选择与鉴定方法。 本文件适用于马铃薯黑痣病田间抗性鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 马铃薯黑痣病 black scurf of potato 由丝核菌侵染马铃薯引起的一种病害，症状为在幼芽、匍匐茎及地下茎上出现褐色坏死斑，影响幼 苗、匍匐茎和地下茎的生长，严重的引起烂芽，造成匍匐茎和地下茎生长势减弱甚至死亡；在块茎表面 形成黑色菌核，称为黑痣。 3.2 马铃薯蔗糖琼脂培养基 Potato-Saccharose-Agar （PSA） 主要用于普通真菌的培养。 4 鉴定材料 4.1 马铃薯 抗病对照品种底西芮、感病对照品种大西洋、被鉴定材料。 4.2 病原菌 取自内蒙古马铃薯主产区黑痣病发病植株，经病原菌分离，致病性测定和鉴定得到的黑痣病致病菌 株，于4 ℃的冰箱保存。 4.3 培养基 PSA培养基。 5 鉴定方法 1 DB15/T 2155—2021 5.1 PSA 培养基平板制备 将马铃薯去皮切成1 cm3左右的小块，取200 g加入1000 mL蒸馏水，在容器内煮沸20min左右，至马 铃薯块软而不烂时，用2层纱布过滤，滤液加入琼脂粉15 g～18 g，加热搅拌至融化，再加蔗糖20 g搅 拌溶解，然后定容至1000 mL，分装到三角瓶内，121 ℃高压湿热灭菌20 min，冷却至室温倒入培养皿 内，制成PSA平板。 5.2 病原菌活化 将保存的黑痣病病原菌接种在PSA培养基平板中央，置25 ℃恒温培养箱中黑暗培养4 d。 5.3 接种体的制备 100 g麦麸加200 mL蒸馏水搅拌均匀，装入500 mL的三角瓶中，121 ℃高压灭菌40 min，冷却后每 瓶接种活化后的病原菌菌饼10片（直径0.8 cm），置25 ℃恒温培养箱中黑暗培养30 d，直至产生大量 菌丝和菌核，取出晾干，搓成粉末，混匀备用。 5.4 田间鉴定 取马铃薯黑痣病菌接种体2 g～4 g，接种在播种穴内，然后播种覆土。按照常规的马铃薯栽培模式 进行管理，采用滴灌或喷灌的灌溉方式，避免大水漫灌。重复2年。 5.5 地下茎病情调查和抗性评价 在播种后55 d～60 d，对地下茎发病情况进行调查，每个品种调查20株，重复3次。按照表1的分级 标准调查病级，计算发病率、病情指数和相对抗病指数，用相对抗病指数进行抗性评价，见表2，感病 对照品种大西洋病情指数大于40数据有效。 表1 马铃薯黑痣病地下茎病情分级标准 级别 代号 茎部病斑面积占地下茎面积的比例（%） 1 0 0 2 1 1～5 3 2 6～25 4 3 26～50 5 4 51～75 6 5 76～100 计算公式： 发病率（%）=发病植株数/调查植株总数×100 病情指数=∑（各级病薯数×各级代表值）/（调查总薯数×最高一级代表值）×100 相对抗病指数=1-所测品种病情指数/发病最重品种病情指数 2 DB15/T 2155—2021 表2 相对抗病指数评价标准 分级 相对抗病指数 抗性评价 1 1.00 免疫（I） 2 0.99～0.80 高抗（HR） 3 0.79～0.60 中抗（MR） 4 0.59～0.40 中感（MS） 5 0.39～0.00 高感（HS） 5.6 块茎病情调查及抗性评价 马铃薯成熟收获后，在阴凉处放置2 d，使马铃薯块茎上的菌核干燥，用清水冲洗表面泥土（清洗 时注意不要用手搓，以防菌核脱落），按表3的分级标准调查病级，每个处理调查100个块茎，计算病情 指数和相对抗病指数，利用相对抗病指数进行评价，感病对照品种大西洋病情指数大于40数据有效。病 情指数、相对抗病指数计算方法同上，抗性评价方法见表3。 表3 马铃薯黑痣病块茎病情分级标准 级别 代号 块茎表面菌核面积占块茎总面积的比例（%） 1 0 0 2 1 ＜1 3 2 1～10 4 3 11～20 5 4 21～50 6 5 51～100 3