(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210588780.0 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 盐城工学院 地址 224051 江苏省盐城市希望大道中路1 号 (72)发明人 柳晓晨　高杨　朱思慧　王冕　 刘宇航　余晓红　李凤伟　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 专利代理师 强萌 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) A61K 31/715(2006.01) A61K 36/12(2006.01) A61P 29/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A23L 33/125(2016.01) (54)发明名称 一种薇菜 多糖及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种薇菜多糖及其制备方法 和应用， 所述薇菜多糖是由6种单糖组成的杂多 糖， 其中Ara和Glc是该多糖的主要单糖； 相对分 子量为252.54 ±10.84kDa； 主链以1,3 ‑linked  Araf方式连接， 其分支度很高， 在O ‑2和O‑3位置 上与支链相连， T ‑Araf和T‑Glcp主要在主链的末 端。 本发明系统研究从薇菜中提取的一种具有生 物活性多糖， 采用微波辅助提取法优化了提取纯 化工艺流程。 本发明对纯化后的薇菜多糖的结构 组成进行了表征， 推断出薇菜多糖结构信息。 从 一氧化氮(NO)诱导的角度分析了薇菜多糖对 RAW264.7细胞的影响， 并通过对小鼠子宫肌瘤的 抑制性研究明确薇菜多糖的免疫活性调节作用 及其应用。 权利要求书1页 说明书12页 序列表1页 附图9页 CN 115043952 A 2022.09.13 CN 115043952 A 1.一种薇菜多糖， 其特征在于， 所述薇菜多糖由阿拉伯糖、 鼠李糖、 半乳糖、 葡萄糖、 木 糖、 甘露糖组成， 摩尔比为(53.28 ±1.00)： (4.13 ±0.10)： (3.17 ±0.14)： (32.51 ±0.59)： (1.25±0.11)： (5.67 ±0.08)， 其中阿拉伯糖和葡萄糖是所述薇菜多糖的主要单糖； 相对分 子量为(252.54 ±10.84)kDa； 具有阿拉伯糖的主链结构， 其重复单元的结构中主链由 →1) Araf‑(3→的阿拉伯糖组成， 支链通过阿拉伯糖的O ‑2键和O‑3键连接在 主链上， T ‑Araf和T‑ Glcp主要在主链的末端； 所述薇菜多糖的结构如下 所示： 其中， R为1,4 ‑linked Xylp， 1,3,4 ‑linked Xylp或1,3,4 ‑linked Galp。 2.权利要求1所述的一种薇菜多糖的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤1)新鲜薇菜洗净， 60～80℃干燥至恒重， 粉碎并过60目筛， 甲醇回流脱脂3次， 抽滤 后滤渣干燥至恒重， 加水适 量， 微波处 理， 重复萃取1～3次， 搅拌抽滤并浓 缩上清液； 步骤2)向上清液中加入三倍95 ％乙醇隔夜沉淀过滤， 离心， 真空冷冻干燥沉淀， 得薇菜 粗多糖粉末； 步骤3)将薇菜粗多糖粉末经过1:50复水成粗多糖溶液， 采用Sevage法除蛋白， 在60℃ 下7.5％H2O2脱色2h， 进行大孔树脂纯化、 透析、 醇沉、 离心、 真空冷冻干燥沉淀， 最后得到薇 菜纯多糖样品。 3.根据权利要求2所述的一种薇菜多糖的制备方法， 其特征在于， 步骤1)所述微波处理 的步骤为： 微波240W下辅助处 理0.5～2.5min。 4.权利要求1所述的薇菜多糖或权利要求2或3所述制备方法制得的薇菜多糖在制备提 升RAW264.7巨噬细胞 吞噬作用药物中的应用。 5.根据权利 要求4所述的应用， 其特征在于， 加入薇菜多糖的浓度 为12.5～200 μg/mL可 以提升RAW264.7巨噬细胞的吞噬作用， 薇菜多糖对RAW264.7细胞增殖的促进作用呈剂量依 赖性。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特 征在于， 所述薇菜多糖的浓度为25 μg/mL。 7.权利要求1所述的薇菜多糖或权利要求2或3所述制备方法制得的薇菜多糖在制备抗 炎药物或保健品中的应用。 8.权利要求1所述的薇菜多糖或权利要求2或3所述制备方法制得的薇菜多糖在制备抗 肿瘤药物或保健品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115043952 A 2一种薇菜多糖及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于生物化学技 术领域， 具体涉及一种薇菜多糖及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]薇菜因其含有丰富的蛋白质、 矿物质、 维生素、 膳食纤维、 多糖和类黄酮 等物质， 使 其具有安神、 清热、 增强免疫、 降低血压和减轻体重的功能。 薇菜具有独特的口味和风味， 堪 称山野菜中的最佳营养品。 它对过度疲劳、 运动不足和长期生病的人有 特殊的滋补作用， 可 加速恢复健康。 自1960年代以来， 人们发现多糖具有多种生物学功能， 例如增强免疫力， 抗 溃疡等， 因此被生物学家和药理学家广泛地重视。 薇菜多糖中的酸性多糖是使其具有活性 的主要成分， 它具有阳离子交换能力并且可以调节机体肠道的pH， 但它 是如何影响机体的 免疫调节， 目前还缺少相关文献进行描述(李磊， 陶海南.紫萁多糖POJI的分离纯化和 基本 性质研究[J].食品科 学， 1999(06)： 11‑14)。 [0003]植物多糖的药用特性已通过在世界范围内进行的密集研究得到确认。 从食用菌、 细菌细胞壁和 植物中分离出不同类型 的抗氧化剂、 抗肿瘤和免疫调节多糖。 这些多糖不会 直接攻击癌细胞。 它们通过刺激各种防御性免疫系统间接产生抗肿瘤作用。 目前已经发现 薇菜多糖对子 宫肌瘤产生积极的预防和治疗作用， 其主要的作用是通过影响机体的免疫调 节， 可以抑制肿瘤的发生和发展(Liu,X.,Yu,X.,Lyu,J.,Li,F.,Shang,Y.,L yu,Y.,&Liu,J. (2022).Chemical  structure  characterization  of polysaccharide  from Osmunda  japonica  Thunb and its inhibitory  activity  on uterine fibroids.Arabian   Journal of Chemistry,15(4),10 3724.)。 [0004]近年来， 使用免疫调节剂增强宿主的防御反应已成为替代传统抗生素治疗的最有 前途的方法之一。 目前， 已发现许多类型的免疫调节剂， 包括哺乳动物来源的蛋白， 如IFN ‑ γ、 粒细胞集落刺激因子、 粒细胞 ‑巨噬细胞集落刺激因子(GM ‑CSF)等。 近几十年来， 植物 来 源的多糖由于具有多种生物活性和相对较低的毒性而被生物医学界广泛研究。 通过对这些 生物活性成分的作用机理的深入研究， 发现最重要的机理之一是影响 免疫系统的非特异 性 免疫。 研究发现， 植物多糖的免疫调节、 抗肿瘤、 抑菌等生物学作用的基本机制通过巨噬细 胞和补体系统的激活而发挥作用。 调节先天免疫力对于机体快速有效地对抗各种外源性病 原体具有重要意义。 如今， 从不同蔬菜及其植物中分离出 的植物多糖因其多样性而受到化 学家和免疫生物学家的关注。 今天的植物多糖是食品和药品行业 非常有吸引力的添加剂来 源， 因为它 们可以在药物补充剂中的使用。 [0005]目前关于薇菜多糖的研究大都还停留在对多糖结构的初步解析及抗氧化特性上 [1‑5]， 在对子宫肌瘤免疫活性调节作用及其应用还没有相关报道， 因此纯化多糖并获得具 有所需功能的生物活性多糖会成为以后多糖研究 的趋势。 ([1]胡彦波,刘 扬,赵偲如,赵珺. 薇菜酸性多糖的分离纯化及成分分析[J].吉林农业科技学院学报,2021,30(06):1 ‑4+13.； [2]胡彦波,翟丽媛,刘扬,赵偲如,赵珺.薇菜多糖的分离纯化及体外抗氧化活性[J].食品 科学,2022,43(01):59 ‑66.； [3]柯琼华.薇菜多糖结构初步分析及抗氧化特性研究[D].湖说　明　书 1/12 页 3 CN 115043952 A 3