(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210620765.X (22)申请日 2022.06.02 (71)申请人 四川大学 地址 610065 四川省成 都市武侯区一环路 南一段24号 (72)发明人 杨金亮　彭玉嘉　勾蓝图　 (74)专利代理 机构 成都极纬知识产权代理有限 公司 51320 专利代理师 梁鑫 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 靶向CD25的抗体及其用途 (57)摘要 本发明涉及抗体技术领域， 具体涉及抗CD25 抗体或其片段的制备以及它们的用途。 本发明要 解决的技术问题是提供一种IL ‑2非阻断型抗 CD25抗体或其片段。 本发明技术方案提供了新的 抗CD25抗体。 本发明的抗CD2 5抗体具有良好的亲 和力、 特异性、 热稳定性， 不阻断IL ‑2下游信号通 路， 能够特异性抑制调节性T细胞(Tregs)， 而不 影响T效应细胞(Teffs)， 从而 通过增强肿瘤免疫 达到抗肿瘤的作用， 在癌症治疗 方面显示出良好 的应用潜力。 权利要求书1页 说明书18页 序列表9页 附图10页 CN 115197321 A 2022.10.18 CN 115197321 A 1.抗CD25的抗体或其片段， 其特征在于： 所述抗体或其片段的重链互补决定区VH ‑ CDR1、 VH‑CDR2、 VH‑CDR3的氨基酸序列分别为SEQ  ID NO.1、 SEQ  ID NO.2、 SEQ  ID NO.3所 示， 所述抗体或其片段的轻链互补决定区VL ‑CDR1、 VL‑CDR2、 VL‑CDR3的氨基酸序列分别为 SEQ ID NO.4、 SEQ ID NO.5、 SEQ ID NO.6所示。 2.抗CD25的抗体或其片段， 其特征在于： 所述抗体或其片段的重链互补决定区VH ‑ CDR1、 VH‑CDR2、 VH‑CDR3的氨基酸序列分别为SEQ  ID NO.7、 SEQ  ID NO.8、 SEQ  ID NO.9所 示， 所述抗体或其片段的轻链互补决定区VL ‑CDR1、 VL‑CDR2、 VL‑CDR3的氨基酸序列分别为 SEQ ID NO.10、 SEQ  ID NO.11、 SEQ ID NO.12所示。 3.根据权利 要求1所述的抗CD25的抗体或其片段， 其特征在于： 重链可变区VH由所述的 VH‑CDR1、 VH ‑CDR2、 VH ‑CDR3与人源抗体框架区FR拼接而成， 轻链可变区VL由所述的VL ‑ CDR1、 VL‑CDR2、 VL‑CDR3与人源抗体框架区FR拼接而成， 其中优选抗体的重链可变区VH和轻 链可变区VL的氨基酸序列分别为SEQ  ID NO.13、 SEQ  ID NO.14所示。 4.根据权利 要求2所述的抗CD25的抗体或其片段， 其特征在于： 重链可变区VH由所述的 VH‑CDR1、 VH ‑CDR2、 VH ‑CDR3与人源抗体框架区FR拼接而成， 轻链可变区VL由所述的VL ‑ CDR1、 VL‑CDR2、 VL‑CDR3与人源抗体框架区FR拼接而成， 其中优选抗体的重链可变区VH和轻 链可变区VL的氨基酸序列分别为SEQ  ID NO.15、 SEQ  ID NO.16所示。 5.根据权利要求3所述的抗CD25的抗体或其片段， 其特征在于： 所述抗体重链可变区 VH‑CDR2中糖基化基序NYS中的N可突变为Q、 A或S， 其中S为优选的突变， 其重链可变 区VH的 氨基酸序列为SEQ  ID NO.17所示。 6.根据权利要求1～5任一项所述的抗CD25的抗体或其片段， 其特征在于所述的抗体片 段可以为Fab或scFv。 7.根据权利要求1～6任一项所述的抗CD25的抗体或其片段， 所述抗体的重链恒定区可 以来自人免疫球蛋白IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgM、 IgE、 IgA或IgD重链的恒定区， 轻链恒定区 可以来自人免疫球蛋白κ 或λ轻链的恒定区。 8.编码权利要求1～7中所述 抗CD25的抗体或其片段的核酸分子 。 9.包含权利要求8所述的核酸分子的重组载体。 10.包含权利要求9所述的重组载体的细胞。 11.权利要求1～7中任一项所述 抗CD25的抗体或其片段在制备抗肿瘤药物中的用途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115197321 A 2靶向CD25的抗体及其用途 技术领域 [0001]本发明涉及抗体技 术领域， 具体涉及靶向CD25的抗体及其用途。 背景技术 [0002]抗体是由重链和轻链共同组成的生物大分子， 由B淋巴细胞分泌， 在机体的体液 免 疫中发挥重要作用。 抗体分子的重链或轻链分别由可变区和恒定区组成， 可变区主要发挥 靶抗原结合作用， 恒定区主要发挥免疫调控效应。 根据空间结构和氨基酸序列特征， 抗体可 分为IgG、 IgM、 IgE、 IgA、 IgD等， 并且重链和轻链也可进一步细分为多个亚型。 比如， 人IgG重 链可分为IgG1、 IgG2、 IgG3和IgG4， 轻链可分为κ和 λ。 由于抗体可以特异、 高效地结合靶分子 或靶细胞， 调控靶分子下游的信号通路， 或者通过免疫效应杀伤靶细胞， 因此抗体可以开 发 为药物用于疾病治疗。 当前， 抗体已经发展成为一种重要的生物技术药物， 其中单克隆抗体 占据了绝大部分， 这其中又以IgG型抗体为主， 因此通常所说的单克隆抗体往往指的是IgG 型抗体。 [0003]IgG型抗体分子是由2条重链和2条轻链通过链间二硫键构成的四聚体， 分子量约 150kD。 根据结构和功能特征， 抗体分子可分为可变区和和恒定区， 其中可变区主要发挥抗 原结合作用， 而恒定区主要发挥免疫学效应和 转运等功能。 抗体的可变区可进一步分为互 补决定区CDR和框架区FR， 其中重链或轻链各含有3个CDR区(重链VH ‑CDR1、 VH‑CDR2、 VH‑ CDR3， 轻链VL ‑CDR1、 VL‑CDR2、 VL‑CDR3。 )和CDR区两侧的4个 FR区(FR1、 F R2、 FR3、 F R4)。 CDR区 形成的loop环是抗体分子与抗原结合的主要部位， FR区则通过空间折叠形成CDR区的支撑 结构。 抗体对不同抗原分子的特异性识别主要是通过6个CDR区(VH ‑CDR1、 2、 3和VL ‑CDR1、 2、 3)的氨基酸多态 性以及loop环的构象多态 性共同实现。 由于不同抗体FR区的结构相似度较 高， 因此当把某一株抗体的CDR区去替换其他抗体分子的CDR区后， 如果不同抗体分子之间 的FR区匹配合适， 那么替换前后CDR区构象变化较小， 因此替换后形成的新可变区仍可以保 留抗原结合能力， 这种特点是CDR移植(CDR  grafting)技术的基础。 鼠源抗体的CDR区可以 通过CDR移植技术去替换人源抗体的CDR， 从而与人FR区重组成为人源化抗体(humanized   antibody)， 如果人 ‑鼠抗体之间的FR区匹配合 适， 那么就 仍可以保留抗原的结合能力。 [0004]杂交瘤技术是目前抗体发现过程中的重要技术， 该技术产生的抗体分子是在小鼠 体内完成亲和力成熟过程， 因此抗体分子可以有效减少与自身或其相似蛋白的非特异性结 合。 由于不同物种间抗体基因编码的氨基酸序列存在差异， 因此当鼠源抗体用于人体治疗 时会产生人抗 ‑小鼠抗体， 即HA MA(human  anti‑mouse antibody)反应， 导致ADA(anti ‑drug  antibody)的发生。 中和性抗药抗体不但可以影响抗体药物的靶点可及性， 降低抗体药物的 治疗效果， 而且抗药抗体所形成的免疫复合物 也会增加 副作用风险。 采用CDR移 植技术把鼠 源抗体改造为人源化抗体， 可以减少HAMA反应的风险， 降低ADA发生率， 这已经被临床研究 所证实。 目前， 已经有数十个人源化抗体上市， 其中包括trastuzumab、 pembrolizumab、 bevacizumab等重磅药物， 这说明人源化 技术是一种可靠的开发治疗性 抗体的技 术。 [0005]单克隆抗体可以通过多种机制发挥药理作用。 抗体可变区可以结合细胞外的可溶说　明　书 1/18 页 3 CN 115197321 A 3