(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210796777.8 (22)申请日 2022.07.07 (71)申请人 中国药科大学 地址 211198 江苏省南京市江宁区龙眠大 道639号 (72)发明人 王莹　彭定川　谭春路　李梦菲　 汤佳立　徐昊沄　 (51)Int.Cl. A61K 47/61(2017.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 31/7068(2006.01) A61P 1/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C08B 37/00(2006.01) (54)发明名称 一种靶向胰腺癌 的褐藻糖胶吉西他滨脂质 体制备及其应用 (57)摘要 本发明属于生物医药领域， 涉及一种靶向胰 腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体制备及其应用。 本发明所解决的问题， 提供一种能够靶向并有效 治疗胰腺癌的纳米粒。 该靶向性纳米粒的具体制 作步骤如下： 1)通过将褐藻糖胶脱色、 离子交换 层析、 浓缩、 透析、 冻干， 获得分子量合适且带负 电的褐藻糖胶。 2)利用DOTAP， DMPC， Chol， DSPE ‑ PEG2000按照摩尔比1∶1∶1∶0.1通过 乙醇注入法 制备吉西他滨阳离子脂质体。 3)利用静电自组装 将褐藻糖胶包裹于阳离子脂质体外层。 本发明所 制作的纳米粒对胰腺癌细胞生长有较好的抑制 作用， 是实现靶向治 疗胰腺癌的新型载体 。 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 CN 115040658 A 2022.09.13 CN 115040658 A 1.一种靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体的制备方法， 其特征在于： 将纯化的褐 藻糖胶通过静电吸附到吉西他滨阳离 子脂质体表面形成一种自组装纳米材 料。 2.按权利要求1所述， 靶向治疗胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体， 其特征在于： 吉西 他滨的抗胰腺癌作用和褐藻糖胶的P选择 素靶向作用。 3.按权利要求1所述纯化的褐藻糖胶， 其特征在于： 来源于墨角藻(Fucus   vesiculosus)的褐藻糖胶粗品经过脱色、 透析、 离子交换层析、 旋蒸浓缩、 透析， 冻干得到浓 度为1mol/L盐洗脱组分的褐藻糖胶。 4.按权利 要求3所述浓度为1mol/L盐洗脱组分的褐藻糖胶， 其特征在于： 所述的褐藻糖 胶分子量 为200‑8500KDa。 5.按权利要求1所述的吉西他滨阳离子脂质体， 其特征在于： 磷脂与胆 固醇的摩尔比为 2.5∶ 1， 所述脂质体的浓度为1.666mg/mL， 所述脂质和吉西他滨的重量比为2.5∶ 1， 所述的脂 质为DOTAP， DMPC， C hol， DSPE‑MPEG2000四种的组合， 其摩尔比为1∶ 1∶ 1∶ 0.1。 6.按权利要求5所述制备的阳离子脂质体， 其特征在于： 所述的脂质体采用乙醇注入法 制备。 7.按权利要求5或6所述的乙醇注入法， 其特征在于： 将DOTAP， DMPC， Chol， DSPE ‑ MPEG2000按照摩尔比溶解于二氯甲烷中， 在旋蒸仪上除去有机溶剂， 形成蜂窝状 薄膜， 真空 下干燥0.5h； 而后用乙醇复溶， 通过恒流泵均匀注入到去离子水中， 静水透析24h， 最后过 0.22微米的滤膜， 于4℃储 存备用。 8.按权利要求7所述的吉西他滨阳离子脂质体， 在肿瘤部位中更易释放， 其特征在于： 吉西他滨脂质体在 pH 6.5的环境中释放速度比pH  7.4更快。 9.按权利要求1所述的褐藻糖胶通过静电吸附到阳离子吉西他滨脂质体表面的制备方 法， 其特征在于： 将褐藻糖胶按照体积比10∶1加入到脂质体溶液中， 搅拌2h， 再依次过0.45 微米滤膜和0.2 2微米滤膜， 4℃储 存备用。 10.一种按权利要求1所述靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115040658 A 2一种靶向胰 腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体制备及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 一种靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体制备及 其应用， 属于生物 医药领域。 背景技术 [0002]胰腺癌是起源于胰腺的消化道恶性肿瘤。 发病早期具有成像困难、 纤维炎症反应 强烈、 易产生耐受性以及转移性强等特点。 其有较高的发生率和死亡率， 预后极差。 对胰腺 癌进行有效治疗是目前面临的难题， 以期望新型治疗方案的产生。 [0003]吉西他滨(Gemcitabine， GEM)作为阿糖胞苷开发以来最重要的胞苷类似物， 可以 抑制癌细胞增殖， 是临床上经典的胰腺癌切除辅助化疗药物。 其被细胞摄取后， 通过结合到 新生的DNA链中来扰乱DNA复制， 从而抑制细胞的增殖。 [0004]脂质体(Liposomes， LPs)是 由双分子磷脂膜组成的囊泡状物， 是一种 可包载药物 的靶向释药系统。 阳离子脂质体作为非病毒载体， 是药物良好的载体。 此外， 细胞表面存在 大量带负电的蛋白多糖， 带正电荷脂质体能与细胞膜作用， 使脂质体高效穿过细胞膜和核 膜。 不足的是， 阳离子脂质体进入肿瘤细胞及其微环境， 只依靠高渗透长滞留效应 (Enhanced  permeability  and retention  effect， EPR)进行递送， 效果远远不够。 因此给 脂质体增添靶向性是必不可少的。 [0005]褐藻糖胶(Fucoidan， FU)是一种提取自墨角藻的天然硫酸化多糖， 具有多种生物 活性。 其抗肿瘤活性不仅与癌细胞的生长、 迁移、 凋亡有密切联系， 还会影响机体的免疫功 能。 研究证明褐藻糖胶能靶向P ‑选择素， 对P选择素有高度亲和力。 以褐藻糖胶作为靶标靶 向P选择素的纳米颗粒， 可以在原发瘤和转移瘤模型中定位， 产生优异的抗肿瘤效果。 [0006]综合考虑胰腺癌的特点， 以及吉西他滨所面临的长期用药后药效不佳的障碍。 开 发一种具有主动靶向胰腺癌的纳米递药系统是十分具有意义的。 本发明所制备的脂质体有 良好的载药特性且能够主动靶向癌细胞， 并且在肿瘤细胞上有天然的P选择素靶点。 因此， 褐藻糖胶吉西他滨脂质体是一种极具潜力的新型递送载体。 发明内容 [0007]本发明根据以上所面临的问题， 提供一种靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体 制备及其应用。 [0008]本发明中以乙醇注入法结合静电吸附制备褐藻糖胶吉西他滨脂质体。 [0009]本发明提供合 适分子量及电荷褐藻糖胶的纯化方法。 [0010]本发明提供褐藻糖胶的纯化方法， 具体步骤如下： [0011](1)褐藻糖胶粗品脱色。 [0012](2)褐藻糖胶粗品离 子交换层析洗脱。 [0013](3)褐藻糖胶洗脱液浓 缩， 透析。 [0014](4)褐藻糖胶溶 液冷冻干燥。说　明　书 1/4 页 3 CN 115040658 A 3