ICS 65.020.40 CCS B 61 DB42 湖 北 省 地 方 标 准 DB42/T 1753—2021 滇楸 组培苗生产技术规程 Code of practice for the production of tissue culture seedlings of Catalpa fargesii Bur. f. duclouxii (Dode) Gilmour 2021 - 08 - 30 发布 湖北省市场监督管理局 2021 - 10 - 30 实施 发 布 DB42/T 1753—2021 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 繁殖材料要求 ....................................................................... 1 5 外植体采集与处理 ................................................................... 1 采集 ........................................................................... 1 处理 ........................................................................... 1 6 培养前准备 ......................................................................... 2 超净台消毒 ..................................................................... 2 培养基配制与灭菌 ............................................................... 2 培养基保存 ..................................................................... 2 7 组织培养 ........................................................................... 2 培养条件 ....................................................................... 初代培养 ....................................................................... 继代培养 ....................................................................... 生根培养 ....................................................................... 外植体更新 ..................................................................... 2 2 2 3 3 8 室内炼苗 ........................................................................... 3 组培苗要求 ..................................................................... 3 炼苗方法 ....................................................................... 3 9 移栽 ............................................................................... 3 移栽基质 ....................................................................... 组培苗清洗 ..................................................................... 废弃培养基处理 ................................................................. 植入容器 ....................................................................... 容器苗管理 ..................................................................... 3 3 3 3 3 10 技术档案管理 ...................................................................... 4 附录 A（资料性） 滇楸组培苗培养基配方表 ............................................... 5 I DB42/T 1753—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖北省林业标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：湖北省林业科学研究院、湖北省林科院石首杨树研究所、华中农业大学。 本文件主要起草人：张新叶、李振芳、彭婵、樊孝萍、杜克兵、许秀环、陈慧玲、黄国伟、徐红梅、 荣新军、马林江。 本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省林业标准化技术委员会，联系电话：027-86952116，邮箱： [email protected]；对本文件的有关修改意见，请反馈至湖北省林业科学研究院，电话：027-86952109， 邮箱：[email protected]。 II DB42/T 1753—2021 滇楸 组培苗生产技术规程 1 范围 本文件规定了滇楸组培苗生产技术的繁殖材料要求、外植体采集与处理、培养前准备、组织培养、 室内炼苗、移栽等要求。 本文件适用于湖北省内滇楸无性系组培苗的生产技术。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 繁殖材料要求 外植体应采自生长健壮、无病虫害的优良无性系和单株。 5 外植体采集与处理 采集 5.1.1 采集时间与部位 4月～9月，选择连续晴天2 d以上的天气采集树冠外围中上部的枝条，以半木质化为宜。 1.1.1 采集记录 采集后要分别加注标签，标明无性系或单株、采集地点、时间、采集人等，建立信息档案。 处理 5.2.1 保鲜 即采即用，若超过0.5 h，用干净湿润毛巾包裹；若长距离运输，置于低温盒中储藏保湿，注意枝条 不可直接接触冰块。 1 DB42/T 1753—2021 5.2.2 预处理 剪除所有叶片及叶柄，自来水冲洗外植体表面，将枝条剪成4.0 cm～6.0 cm的带芽茎段，放入0.3%～ 0.5%洗衣粉水溶液中用毛刷刷洗，再用流水冲洗1.0 h～2.0 h，然后用400 mg/l青霉素+200 mg/l链霉素 液浸泡15 min，再用100 mg/l聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浸泡5 min，蒸馏水清洗3次～4次，每次30 s。 6 培养前准备 超净台消毒 将超净工作台打开紫外灯照射消毒20 min～30 min，然后打开超净工作台风机吹风10 min～20 min， 75%医用酒精擦拭台面。 培养基配制与灭菌 根据各类培养基配方（见附录A）以及需要配制的体积，计算所需各种药品母液以及水的用量，称 取所需用量的凝固剂和碳源，用70%～80%最终体积的水加热溶解，依次加入大量元素、铁盐、微量元素、 有机物、植物生长调节剂母液等，边加入边搅拌，调节pH、定容、分装、封口、标记。配制后，当天采 用高压蒸汽灭菌，在0.105 MPa、121 ℃条件下灭菌30 min。 培养基保存 按LY/T 1882的有关规定执行，灭菌后的培养基，常温下7 d内使用完，2 ℃～4 ℃条件下14 d内使用 完。 7 组织培养 培养条件 培养温度为24 ℃±2 ℃，光照时数12 h/d～14 h/d，光照强度1500 lx～3000 lx。 初代培养 7.2.1 外植体消毒 将预处理后的材料，置于消毒后的超净台上，用75%医用酒精浸泡外植体15 s～30 s，无菌水冲洗3 次～4次，再用2%次氯酸钠溶液消毒10 min～20 min，无菌水清洗3次～4次，每次30 s，用无菌滤纸吸干 表面水分。也可选用其它外植体表面灭菌化学药品，按LY/T 1882的有关规定执行。 7.2.2 外植体接种 在超净工作台上，将外植体切成1.5 cm～2.0 cm长的带芽茎段，垂直或斜插至诱导培养基中，注明 编号。 7.2.3 萌芽诱导 在诱导培养基中培养20 d～30 d，诱导出芽后，幼芽高1.0 cm～2.0 cm时转接至增殖培养基中。 继代培养 7.3.1 继代增殖接种 2 DB42/T 1753—2021 将诱导芽切割下来，转接至增殖培养基中，获得无菌芽苗。生长 20 d～30 d 后，将继代培养基中