ICS 67.120 CCS X 004 安 34 4 徽 省 地 方 标 准 DBB34/T 399 90—2021 动物 物组织 织中阿 阿德呋 呋啉残 残留的 的测定 定 高效液 高 液 相 相色谱 谱法 D Determinattion of adp prin residuues in anim mal tissue - high perrformancee liquid cchromatog graphy 2021-009-03 发布 布 2021-10-03 实施 实 安徽省市场 安 场监督管理 理局 发 布 DB34/T 3990—2021 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省兽药饲料监察所提出。 本文件由安徽省农业农村厅归口。 本文件起草单位：安徽安丰堂动物药业有限公司、安徽省兽药饲料监察所、利辛县双飞养殖专业合 作社、安徽省动物卫生监督所、安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽省农科院畜牧兽医研究所、合肥 市畜牧水产技术推广中心、宣州区畜牧兽医管理局。 本文件主要起草人：陈文帮、汤春莲、李珲、张莉、陈元生、王雨霜、蔡一杰、王群、刘文文、丁 常宏、马瑞钰、杜腾飞、苗文萍。 I DB34/T 3990—2021 动物组织中阿德呋啉残留的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了动物组织中的阿德呋啉残留检测的试样制备及高效液相检测方法。 本文件适用于鸡、鸭的肌肉、肝脏、肾脏中阿德呋啉的残留测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的阿德呋啉经氯仿涡旋、离心提取，经固相萃取柱净化，分步溶剂洗脱，经色谱柱洗脱，用 高效液相检测器，以保留时间进行定性，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 阿德呋啉对照品，纯度大于 98.0％。 5.3 甲醇，色谱纯。 5.4 正己烷。 5.5 氯仿。 5.6 氨水。 5.7 固相萃取小柱：MCX（6 mL，200 mg）或同等柱效。 5.8 无水硫酸钠（经 650℃灼烧 4 h，置于干燥器内备用）均为分析纯。 5.9 1 mg/mL 阿德呋啉标准储备液配制：精密称取阿德呋啉标准品 10 mg，置于 10 mL 棕色容量瓶 中，用甲醇溶解并定容，超声波下 5 min 混匀，制成质量浓度为 1.0 mg/mL 阿德呋啉标准储备液，4℃ 避光保存。 5.10 0.5 μg/mL 阿德呋啉工作液配制：精密量取阿德呋啉储备液 50μl，经 50%（体积分数，下同） 甲醇水溶液稀释定容至 100 mL，制得 0.5 μg/mL 阿德呋啉中间标准工作液。 5.11 1％氨化甲醇：取 1 ml 氨水，用甲醇定容至 100 ml。 5.1 5.2 1 DB34/T 3990—2021 6 仪器设备 高效液相色谱仪，配备紫外检测器或二极管阵列检测器、自动进样器、柱温控制箱。 高速匀浆机。 氮气吹干仪。 超声仪。 分析天平（感量 0.01 mg）。 涡旋仪。 离心机：低温冷冻离心机（≥6770G）。 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 7 试样制备 动物肌肉、肝脏、肾脏等动物组织，去筋后切成小块，制成糜状，于 -18℃下冷冻保存。 8 测定步骤 8.1 提取 称取 5 g（±0.05 g）适量新鲜或冷冻的空白动物组织，经匀浆机绞碎均质化。加入氯仿 10 mL 和 1 g 无水硫酸钠，涡旋使之充分混合，振荡提取 10 min，室温下 12000 r/min 离心 5 min；移取上清 液，重复提取 1 次，合并重复提取的上清液。加入正己烷 2 mL，50℃旋转蒸发至干，加入体积分数为 0.1％的氨水 5 ml 溶解，备用。 8.2 净化 MCX固相萃取小柱，预先用甲醇、水各 3 mL 活化平衡，再将提取液过柱，3 mL 甲醇淋洗柱子，挤 干，用 6 mL 体积分数为 1％氨化甲醇洗脱。收集洗脱液，50℃下氮气吹干，加入 1 mL 50％甲醇水溶 液溶解残渣，0.45 μm 滤膜过滤至进样瓶中，待测定。 8.3 色谱条件 色谱柱：C18色谱柱( 4.6 mm × 250 mm，5 μm)； 流动相：甲醇：水（50：50，V/V） ； 流速：1 mL/min； 进样量：20 μL； 柱温：40℃ 检测波长：260 nm。 8.4 定量测定 取标准工作液和试样溶液分别注入液相色谱仪，记录图谱（参加附录A），按外标法以峰面积进行计 算。 9 结果计算与表述 2 DB34/T 3990—2021 试样 样中阿德呋啉 啉残留量（μg g/kg）按公式 式(1)计算： ·································································· (1) 式中 中：  X — ——供试试样 样中阿德呋啉 啉含量，单位 位为微克/每千 千克（μg /k kg）； C — ——经标准曲 曲线求得的试 试样溶液中阿 阿德呋啉浓度 度，单位为微 微克/每毫升 （μg /mL）； m — ——试样质量 量，单位为克 克（g）； V — ——定容体积 积，单位为毫 毫升（mL）； f — ——稀释倍数 数 。 10 检测 测方法灵敏度 度、准确度、精密度 10.1 灵 灵敏度 本方 方法检出限为 为 25 µg/kg， ，定量限为 50 µg/kg。 10.2 准 准确度 。 本方 方法在 50 μgg/kg～200 μg/kg μ 添加浓 浓度水平上的 的回收率为 60％～90％。 10.3 精 精密度 本方 方法的批内变 变异系数 CV％ ％≤10％，批 批间变异系数 数 CV％≤15％。 3 DB34/T 39990—2021 附 录 A （ （资料性） 色谱图 图A.1 空白试样中添 空 添加 1.0 ng /mL 阿德呋啉 啉色谱图 4