ICS 65.020.30 CCS B 40 1507 呼 伦 贝 尔 市 地 方 标 准 DB 1507/T 63—2021 高寒地区绵羊人工授精技术操作规程 Sheep in alpine region artificial fertilization technical manual 2021 - 07 - 15 发布 2021 - 10 - 15 实施 呼伦贝尔市市场监督管理局 发 布 DB 1507/T 63—2021 前 言 本文件依据GB/T 1.1－2020 《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件由呼伦贝尔市农牧业局提出并归口。 本文件起草单位：呼伦贝尔市农牧科学研究所。 本文件主要起草人：王景顺、罗保华、格格、多乐、董淑霞、许忠霞、柴局、张凤茹、孙志红、高 荣 、王国军、吉亚、德擎音、祁航、车曼青、查干巴拉、其力格尔、炜霞。 I DB 1507/T 63—2021 高寒地区绵羊人工授精技术操作规程 1 范围 本文件规定了高寒地区绵羊人工授精的术语和定义、消毒、采精、精液品质检查、稀释与保存、发 情鉴定和输精等内容。 本文件适用于呼伦贝尔等高寒地区绵羊人工授精。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 消毒 4.1 器械消毒 假阴道要用清水冲洗，然后用75 %的酒精消毒，使用前用生理盐水冲洗。金属制品中的开膣器、镊 子、盘子、集精杯、输精枪等，用清水冲洗，擦干后用 75%的酒精或高压灭菌的方式消毒。 4.2 配种操作室消毒 日常消毒用1 %高锰酸钾溶液进行喷洒消毒，每日于采精前和采精后各进行1次。 5 采精 5.1 采精前的准备 5.1.1 器械的准备 假阴道、集精杯、镊子、开膣器、输精器等要提前清洗、干燥、消毒，存放于消毒柜内备用。 5.1.2 种公羊的准备 种公羊第一次采精的年龄应在1.5周岁，膘情中等；初次参加采精的公羊，先进行采精训练，用发 情母羊刺激性欲，采精调教训练成功后，进行正式操作。 5.1.3 采精器准备 将事先清洗和消毒后的假阴道与集精杯按要求组装好，从假阴道注水孔注入50 ℃～55 ℃温水100 ml，调节好调节阀钮，通过气体活塞吹入气体，气体的量以内胎表面呈三角形合拢而不向外鼓出为宜。 1 DB 1507/T 63—2021 在假阴道内胎的前三分之一处用玻璃棒涂抹少许灭菌凡士林，采精时用温度计测试假阴道内温度应保持 在38 ℃～41 ℃。 5.2 采精方法 采精前用温水洗净种公羊阴茎的包皮，并擦干净；将台羊固定后，引公羊到台羊处，采精时采精员 o o 站立在公羊的一侧，使假阴道靠在母羊臀部，其角度与母羊的阴道的位置相一致（与地面成35 ～45 角）。当种公羊爬跨时，迅速上前，用手轻托阴茎包皮，迅速将阴茎导入假阴道中，种公羊有向前冲的 动作时，即为射精，迅速把装有集精杯的一端向下倾斜，并竖起集精杯，送精液到处理室，放气后取下 集精杯，盖好盖，待精液品质检查。 5.3 采精频率 种公羊每天可采精二、三次，第一、二次采精后休息两小时方可进行第三次采精，每隔五天休息一 天。采精后做好采精记录。 6 精液品质检查 6.1 外观检查 6.1.1 颜色 呈乳白色，肉眼可看到乳白色云雾状。 6.1.2 气味 无味或略带腥味。 6.1.3 精液量 一次采集量平均为0.8 ml～1.4 ml。 6.1.4 初检 经外观检查，凡带有腐败臭味，出现红色、褐色、绿色的精液判为劣质精液，应弃掉不用，一般情 况下不再做显微镜检查。 6.2 显微镜检查 6.2.1 精子活力 以灭菌玻璃棒蘸取1滴精液，放在载玻片上加盖玻片，在400倍～600倍显微镜下观察。全部精子都 做直线运动评为1级，90 %的精子做直线前进运动为0.9级，以此类推。 6.2.2 精子密度 取1滴新鲜的精液在显微镜下观察，根据视野内精子多少分为密、中、稀三级。“密”是指视野中 的精子数量多，精子之间距离小于1个精子的长度；“中”是指精子之间的距离大约为1个精子的长度； “稀”为精子之间距离大于1个精子的长度。每毫升精液中含精子25亿以上者为密，20亿～25亿个为中， 20亿以下为稀。 2 DB 1507/T 63—2021 6.2.3 精子质量 精子活力在0.6级以上，密度在中等以上，畸形精子率不超过20 %，为优质。 7 稀释与保存 7.1 稀释 7.1.1 稀释液 稀释液的配方选择易于精子活动，减少能量消耗，延长精子寿命的弱酸性稀释液。常用的稀释液为 维生素B12（成份要求为纯维生素B12,无其它辅料）。 7.1.2 稀释倍数 要根据精子密度、活力而定稀释比例，稀释后的精液，每毫升有效精子数不少于7亿个。目前，一 般以1：4～1：7为宜。 7.1.3 稀释步骤 根据镜检得出精子密度确定稀释倍数，根据稀释倍数计算出应加入的稀释液的量，用移液管量取应 加的稀释液。稀释前将两种液体置于同一温水中，然后将稀释液沿着精液瓶缓缓倒入，用输精枪反复抽 取混合液使之混合均匀，稀释完毕后，立即进行活力镜检，并将镜检结果填入采精登记表。 7.2 精液保存 7.2.1 常温保存 精液稀释后，保存在20 ℃以下的室温环境中，一般可有效保存24 h。 7.2.2 低温保存 在常温保存的基础上，温度进一步缓慢降至0 ℃～5 ℃之间。可将精液装入小试管内，直接放入温 度为2 ℃～4 ℃的恒温箱中，低温下一般可有效保存48 h～72 h。 8 发情鉴定 用试情公羊与母羊接触，母羊表现温驯，并将后躯转向公羊或接受试情公羊爬跨而静立不动视为发 情母羊。 9 输精 9.1 输精前准备 9.1.1 人员 输精人员应穿工作服，用肥皂水洗手、擦干，再用生理盐水冲洗。 9.1.2 器械 3 DB 1507/T 63—2021 把洗涤消毒好的开膣器、输精枪、镊子用纱布包好，待用。 9.1.3 输精室 2 一般面积为30 m ，室温为20 ℃～25 ℃。要求地面平整，光线充足，宽敞、平坦、清洁、安静。 9.1.4 母羊 对发情母羊输精时，应对外阴部进行消毒和清洗，待干燥后再用生理盐水棉球擦拭。 9.2 输精方法 用生理盐水擦拭后的开膣器插入阴道深部，触及子宫颈后，稍向后拉，以使子宫颈处于正常位置之 o 后，轻轻转动开膣器90 ，打开开膣器，开张度在不影响观察子宫颈口的情况下，开张的愈小愈好（2 cm）； 输精枪应慢慢插入到子宫颈内0.5 cm～1.0 cm处，插入到位后应缩小开膣器开张度，并向外拉出1/3， 然后将精液缓缓注入；输精完毕后，让羊保持原姿势片刻，放开母羊，原地站立5 min～10 min，再将 羊赶走。 9.3 输精次数和输精量 输精次数：母羊1个情期应输精2次，发现发情时输精1次，间隔8 h～10 h应进行第2次输精。输精 量：每只每次的输精量，原精液为0.05 ml～0.10 ml，稀释后精液应为0.1 ml～0.2 ml。 9.4 其它要求 输精人员应遵守操作规程，输精员输精时应切记做到深部、慢插、轻注、稍停。对个别阴道狭窄的 青年母羊，开膣器无法充分打开，很难找到子宫颈口，可采用阴道内输精，但输精量需增加1倍。输精 后立即做好母羊配种记录。每输完一只羊要对输精器、开膣器及时清洗消毒后才能重复使用，有条件的 建议用一次性器具。 4