ICS 67.080.20 CCS B 31 34 安 徽 省 地 方 标 准 DB34/T 3891—2021 蔬菜中腐霉利快速检测 胶体金免疫层析法 Rapid detection of procymidone in vegetables Colloidal gold immunochromatography assay 2021-06-08 发布 2021-07-08 实施 安徽省市场监督管理局 发 布 DB34/T 3891—2021 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省产品质量监督检验研究院提出。 本文件由安徽省市场监督管理局归口。 本文件起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院、合肥工业大学、食品营养与安全研究中心、安 徽省食品药品检验研究院、杭州傲敏生物科技有限公司、江苏美正生物科技有限公司、安徽华测检测技 术有限公司。 本文件主要起草人：姚帮本、陈伟、姚丽、陈赵然、李云、闫超、童宁、郭佳佳、张居舟、祝红蕾、 陆乐、徐建国、乔东晴、吴基杰、庄琼、陶云峰、王相召、王平、王海翔、陆华进、高君、陈欣。 I DB34/T 3891—2021 蔬菜中腐霉利快速检测 胶体金免疫层析法 1 范围 本文件规定了蔬菜中腐霉利的胶体金免疫层析快速检测方法。 本文件适用于韭菜、番茄、茄子、辣椒、黄瓜、蘑菇类（鲜）中腐霉利的快速检测。 检测限：韭菜为 0.2 mg/kg；番茄、黄瓜为 2 mg/kg；茄子、辣椒、蘑菇类（鲜）为 5 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中残留的腐霉利与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了 抗体和检测线（T线）上包被原的结合，从而导致检测线（T线）颜色变浅或消失，通过检测线（T线） 与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中残留的腐霉利进行定性判定。 5 试剂或材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。 5.1 水：应符合 GB/T 6682，二级水。 5.2 腐霉利：纯度≥99％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.3 甲醇（CH3OH） 5.4 氯化钠（NaCl） 5.5 氯化钾（KCl） 5.6 磷酸氢二钠（Na2HPO4） 5.7 磷酸二氢钾（KH2PO4） 5.8 10％甲醇溶液：吸取 10 mL 甲醇（5.3），用水（5.1）定容至 100 mL，混匀。 5.9 稀释液：分别称取氯化钠（5.4）8 g、氯化钾（5.5）0.2 g 磷酸氢二钠（5.6）1.44 g、磷酸二 氢钾（5.7）0.24 g 于 1000 mL 烧杯中，加水（5.1）充分搅拌溶解后定容至 1000 mL。 5.10 10 g/L 的腐霉利标准储备液：准确称取腐霉利（5.2）0.1 g（精确至 0.0001 g），用甲醇（5.3） 溶解，定容至 10 mL。-20℃冷冻避光保存，有效期 12 个月。 1 DB34/T 3891—2021 5.11 200 mg/L 的腐霉利标准中间液：准确移取 10 g/L 的腐霉利标准储备液（5.10）200μL 至 10 mL 容量瓶中，甲醇（5.3）定容。4℃冷藏避光保存，有效期 3 个月。 5.12 2 mg/L 的腐霉利标准工作溶液：准确移取 200 mg/L 的腐霉利标准中间液（5.11）100μL 至 10 mL 容量瓶中，10％甲醇溶液（5.8）定容。4℃冷藏避光保存，有效期 1 个月。 6 仪器和设备 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 7 电子天平：感量分别为 0.01 g 和 0.01 mg。 移液器：20～200 µL，100～1000 µL，1～10 mL。 旋涡混合器。 匀浆机。 离心机：转速≥4000 r/min。 胶体金免疫层析检测试纸条。 离心管：1.5 mL、50 mL。 样品制备 7.1 试样制备 蔬菜样品取样部位按 GB 2763 的规定执行，将适量（约 500 g）待测样品切碎混匀均一化制成匀 浆备用。 7.2 试样前处理 7.2.1 韭菜 准确称取制备后试样 2 g(精确至 0.01 g)于 50 mL 离心管中，加入稀释液（5.9）6.0 mL，振荡 混匀 2 min，4000 r/min 室温离心 2 min，取上清液即为待测液。 7.2.2 番茄、黄瓜 准确称取制备后试样 2 g(精确至 0.01 g)于 50 mL 离心管中，加入稀释液（5.9）6.0 mL，振荡 混匀 2 min，4000 r/min 室温离心 2 min，上清液备用。取 1.5 mL 离心管，吸取 900 μL 稀释液（5.9）， 加入 100 μL 上清液，混匀即为待测液。 7.2.3 茄子、辣椒、蘑菇类（鲜） 准确称取制备后试样 2 g(精确至 0.01 g)于 50 mL 离心管中，加入稀释液（5.9）6.0 mL，振荡 混匀 2 min，4000 r/min 室温离心 2 min，上清液备用。取 1.5 mL 离心管，吸取 960 μL 稀释液（5.9）， 加入 40 μL 上清液，混匀即为待测液。 8 测定 8.1 所有操作需在室温下（20℃±5℃）进行。 8.2 吸取 100 µL 待测液于金标微孔中，上下抽吸 5～10 次，室温条件下进行孵育 5 min。将试纸条吸 水海绵端垂直向下插入金标微孔中，室温条件下反应 6 min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的 样品垫，观察显色情况，进行结果判定。 2 DB34/T 3891—2021 8.3 空白试验：称取 取空白试样， ，按照 7 和 8.2 8 的步骤同 同法操作。 8.4 加标质控试验：准确称取空 空白试样 2 g（精确至 0.01 0 g）置于 于 50 mL 离心 心管中，加入 入适量腐霉利 利 标准工作 作液（5.12），使待测液中 中腐霉利的终 终浓度为 0.2 2 mg/kg，按 按照 7 和 8.2 的步骤同法操 操作。 9 结果分析 结果判定 9.1 9.1.1 无效 制线（C线）不 不显色，表明 明操作不正确 确或试剂条无 无效。判定示 示意图见图1。 。 控制 图11 9.1.2 目视判定 定示意图 阴性 测线（T线）颜 颜色比控制线 线（C线）颜色深或者检测 测线（T线）颜色与控制线（C线）颜 颜色相当，表 表 检测 明样品中 中腐霉利残留 留低于方法检 检测限，判定 定为阴性。判定示意图见图1。 9.1.3 阳性 测线（T线）不 不显色或检测 测线（T线）颜色比控制线（C线）颜 颜色浅，表明 明样品中腐霉 霉利残留的含 含 检测 量高于方 方法检测限，判定为阳性 性。判定示意 意图见图1。 9.2 质控试验要求 白试验测定结 结果应为阴性 性，加标质控试验测定结果 果应为阳性。 。否则表示不 不满足质控试 试验要求，此 此 空白 批样品结 结果无效。 10 性能 能指标 10.1 灵敏度 灵 灵敏 敏度应≥95％ ％。 10.2 特异性 特 3 DB34/T 3891—2021 特异性应≥95％。 10.3 假阴性率 假阴性率应≤5％。 10.4 假阳性率 假阳性率应≤5％。 注： 性能指标计算方法见附录A。   4 DB34/T 3891—2021 附 录 A （资料性） 定性方法性能指标计算方法 表A.1 性能指标计算表 样品情况 检测结果 a b 总数 阳性 阴性 阳性 N11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N21 N22 N2.=N21+N22 总数 N.1=N11+N12 N.2=N21+N22 N=N1.+N2.或N.1+N.2 显著性差异（х ） 2=（|N12-N21|-1） /（N12+N21）， 自由度（df）=1 灵敏度（p+，％） p+=N11/N1. 特异性（p-，％） p-=N22/N2. 2 2 假阴性率（pf-，％） pf-=N12/N1.=100-灵敏度 假阳性率（pf+，％） pf+=N21/N2.=100-特异性 c 相对准确度（，％） （N11+N22）/（N1.+N2.） 注： a 由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果； b 由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果； C 为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。 N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。 示例：N11 表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N2.表示所有的第二列；N12 表示第一行，第二列。 5