(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211163795.9 (22)申请日 2022.09.23 (71)申请人 黑龙江金象生 化有限责任公司 地址 150025 黑龙江省哈尔滨市利民开发 区沈阳大街东、 飞鹰门业北综合楼 (72)发明人 卢煜　曹国强　张甲峰　刘远　 柳宏原　战俊杰　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权 代理有限公司 2321 1 专利代理师 邓宇 (51)Int.Cl. C12P 13/22(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种提高L-色氨酸 生产水平的方法 (57)摘要 一种提高L ‑色氨酸生产水平的方法， 属于氨 基酸发酵技术领域。 为了解决现有技术中利用微 生物发酵生产L ‑色氨酸存在对色氨酸代谢过程 有反馈抑制， 造成产酸增长缓慢的问题， 本发明 在发酵罐运行中后期， 增加了2 ‑4h的育晶过程， 之后逐渐恢复到正常发酵条件， 利用恒温培养+ 低温育晶+恒温培养的工艺模式， 明显提高了产 酸量和转化率， 使得产酸量提高至51％以上， 转 化率提高至19.5％以上， 提高了L ‑色氨酸生产水 平。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115433745 A 2022.12.06 CN 115433745 A 1.一种提高L ‑色氨酸生产水平 的方法， 其特征在于， 所述方法为将产L ‑色氨酸的大肠 杆菌种子液接种于发酵培养基中， 流加浓度为50％ ‑60％的葡萄糖， 于起始发酵温度32℃ ‑ 36℃， 初始搅拌频率300rpm， 溶氧2 5％‑40％， 压力0.04 ‑0.1Mpa， 通风比0.5 ‑1.5vvm， pH6.9 ‑ 7.2条件进行发酵培养， 持续发酵30 ‑32h， 且产酸量达到30 ‑32g/L时， 将发酵温度降至15℃ ‑ 20℃， 搅拌频率降至初始搅拌， 通风量降低至当前通风量的一半， 2 ‑4h后恢复当前发酵条 件。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述种子液由成分如下的种子培养基获 得： 玉米浆 40‑50g/L， 葡萄糖20g/L， 酵母 粉5‑8g/L， 氯化钠10g/L， 硫酸镁2 ‑3g/L。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述种子液的培养条件为36℃， 转速200 ‑ 600rpm， 溶解氧控制3 0‑40％， 压力0.04 ‑0.1MPa， 通 风比0.5‑1.5vvm， 培养时间为20 h。 4.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 所述发酵培养基的成分为葡萄糖7 ‑12g/L， 柠檬酸2‑4g/L， 磷酸氢二铵5 ‑8g/L， 氯化钾2 ‑4g/L， 酵母粉1 ‑3g/L， 硫酸镁1 ‑2g/L， 微量元素 和生长因子； 所述微量元素的组成为硫酸锰0.05 ‑0.1g/L， 硫酸亚铁0.05 ‑0.1g/L， ZnSO4· H2O 0.05‑0.1g/L； 所述生长因子的组成为VB150 ‑100μg/L， VH  40‑50μg/L， 复合氨基酸粉 0.5‑1g/L。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述葡萄糖流加浓度为6 0％。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述 起始发酵温度为3 6℃。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述pH为7.0 。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述产酸 量达到32g/L时降低发酵温度。 9.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述发酵温度降至20℃。 10.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 4h后恢复初始发酵 条件。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115433745 A 2一种提高 L‑色氨酸生产水 平的方法 技术领域 [0001]本发明属于氨基酸发酵技 术领域， 具体涉及一种提高L ‑色氨酸生产水平的方法。 背景技术 [0002]L‑色氨酸是一种必需氨基酸， 广泛用作饲料和食品添加剂。 L ‑色氨酸的生产最早 主要依靠化学合成法和蛋白质水解法， 但是经过对于微生物代谢通路的不断研究， 微生物 发酵法生产L ‑色氨酸已经成为了色氨酸发酵的主 要方法。 [0003]然而， 目前发酵生产L ‑色氨酸存在多种技术问题， 例如， L ‑色氨酸溶解度较低， 在 25℃时， 100g水中溶解度为13.6g， 在L ‑色氨酸发酵过程中， 发酵罐培养温度36℃， 当产酸超 过24g/L左右时， 发酵液中就会出现结晶， 之后发酵过程色氨酸浓度一直呈过饱和状态， 对 色氨酸代谢过程有反馈抑制作用， 造成产酸增长缓慢。 因此通过对L ‑色氨酸生产工艺的优 化设计， 提高  L‑色氨酸的生产水平是十分必要的。 发明内容 [0004]为了解决现有技术中利用微生物发酵生产L ‑色氨酸存在对色氨酸代谢过程有反 馈抑制， 造成产酸增长缓慢的问题， 本发 明提供了一种提高L ‑色氨酸生产水平的方法， 所述 方法为将产L ‑色氨酸的大肠杆菌种子液接种于发酵培养基中， 流加浓度为50％ ‑60％葡萄 糖， 于起始发酵温度32℃ ‑36℃， 初始搅拌频率300rpm， 溶氧25％ ‑40％， 压力 0.04‑0.1Mpa， 通风比0.5 ‑1.5vvm， pH6.9 ‑7.2条件进行发酵培养， 持续发酵30 ‑32h， 且产酸量达到30 ‑32  g/L时， 将发酵温度降至15℃ ‑20℃， 搅拌频率降至初始搅拌， 通风量降低至当前通风量的一 半， 2‑4h后恢复当前发酵 条件。 [0005]进一步地限定， 所述种子液由成分如下的种子培养基 获得： 玉米浆40 ‑50g/L， 葡萄 糖20g/L， 酵母 粉5‑8g/L， 氯化钠10g/L， 硫酸镁2 ‑3g/L。 [0006]进一步地限定， 所述种子液的培养条件为36℃， 转速200 ‑600rpm， 溶解氧控制  30‑ 40％， 压力0.04 ‑0.1MPa， 通 风比0.5‑1.5vvm， 培养时间为20 h。 [0007]进一步地限定， 所述发酵培养基的成分为葡萄糖7 ‑12g/L， 柠檬酸2 ‑4g/L， 磷酸氢 二铵5‑8g/L， 氯化钾2 ‑4g/L， 酵母粉1 ‑3g/L， 硫酸镁1 ‑2g/L， 微量元素和生长因子； 所述微量 元素的组成为硫酸锰0.05 ‑0.1g/L， 硫酸亚铁0.05 ‑0.1g/L， ZnSO4·H2O 0.05‑0.1g/L； 所述 生长因子的组成为VB15 0‑100 μg/L， VH 40‑50 μg/L， 复合氨基酸粉0.5 ‑1g/L。 [0008]进一步地限定， 所述葡萄糖流加浓度为6 0％。 [0009]进一步地限定， 所述 起始发酵温度为3 6℃。 [0010]进一步地限定， 所述pH为7.0 。 [0011]进一步地限定， 所述产酸 量达到32g/L时降低发酵温度。 [0012]进一步地限定， 所述发酵温度降至20℃。 [0013]进一步地限定， 4h后恢复初始发酵 条件。 [0014]本发明的有益效果：说　明　书 1/7 页 3 CN 115433745 A 3