(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211164540.4 (22)申请日 2022.09.23 (71)申请人 上海国龙生物科技有限公司 地址 201612 上海市松江区书 海路1505号 (72)发明人 张慧　朱佑民　金玉叶　 (74)专利代理 机构 南京禾易知识产权代理有限 公司 32320 专利代理师 谢一龙 (51)Int.Cl. C12P 21/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/10(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发 酵的方法 (57)摘要 本发明提出了一种地衣芽孢杆菌和枯草芽 孢杆菌混合发酵的方法， 其特征在于， 具体过程 如下： 地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落经 混合培养后， 所得菌种置于Landy液体培养基中 完成发酵过程， 发酵时间为24 ‑72h， 发酵温度为 30‑37℃； 所述Landy培养基以质量百分比计， 包 括酵母粉0.01 ％‑1％， 葡萄糖0.5％ ‑5％， 谷氨酸 钠0.01％‑2％， MgSO40.001％‑1％， KCl0.00 1％‑ 1％， KH2PO40.01％‑2％， FeSO40.001％ ‑1％， MnSO40.001％‑1％， CuSO40.001％‑1％， 余量为 水。 本发明通过地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混 合发酵产生替抗物质， 对革兰氏阳性菌金黄色葡 萄球菌有很好的抑菌效果， 为新型替抗产品提供 了新思路。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 115505616 A 2022.12.23 CN 115505616 A 1.一种地衣芽孢杆菌和枯 草芽孢杆菌混合发酵的方法， 其特 征在于， 具体过程如下： 地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落经混合培养后， 所得菌种置于Landy液体培养 基中完成发酵 过程， 发酵时间为24 ‑72h， 发酵温度为3 0‑37℃； 所述Landy培养基以质量百分比计， 包括酵母粉0.01％ ‑1％， 葡萄糖0.5％ ‑5％， 谷氨酸 钠0.01％ ‑2％， MgSO40.001％‑1％， KCl 0.001％‑1％， KH2PO40.01％‑2％， FeSO40.001％‑ 1％， MnSO40.001％‑1％， CuSO40.001％‑1％， 余量为水。 2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法， 其特征在于， 所述地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落于10 ‑100ml LB液体培养基中完成混合培养过 程， 于混合培 养过程之中， 置 于30‑37℃摇床中， 摇床转速为15 0‑250r/min。 3.根据权利要求2所述的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法， 其特征在于， 所述LB培养基以质量分数计， 包括酵母粉0.1％ ‑2％， 胰蛋白胨0.1％ ‑5％， NaCL0.1％ ‑2％， 余量为水； 所述 LB液体培 养基pH为7.3 。 4.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法， 其特征在于， 所述菌种的接种量 为1‑10％。 5.根据权利要求2所述的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法， 其特征在于， 所述Landy液体培 养基pH为7.0 。 6.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法， 其特征在于， 所述地衣芽孢杆菌菌落 或枯草芽孢杆菌菌落自固体培养基中完成扩增过程以获得单菌落， 培养过程为24h。 7.根据权利要求4所述的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方法， 其特征在于， 所述固体培养基以质量分数计， 包括酵母粉0.1％ ‑2％， 胰蛋白胨0.1％ ‑5％， NaCL0.1％ ‑ 2％， 琼脂粉0.1％ ‑4％， 余量为水； 所述固体培 养基pH为7.3 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115505616 A 2一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合发酵的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 微生物发酵工程技术领域， 尤其涉及 一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆 菌混合发酵的方法。 背景技术 [0002]上世纪40 ‑70年代， 抗生素一直是临床抗感染的主要药物， 但随着抗生素滥用， 出 现了越来越多耐药株和药物残留问题， 对动物和人类健康造成极大威胁。 为了解决这一问 题开发安全无害， 环保健康、 性能稳定的替 抗产品已成为人们关注的热点。 [0003]研究发现， 通过动植物基因编码或人工合成的抗菌肽可作为潜在抗生素， 它拥有 广谱抗菌活性， 强碱性和热稳定性， 且不易产生耐药性。 但多数抗菌肽存在一些缺点， 通过 化学合成的抗菌肽， 分子数量大， 序列长， 成本高， 价格昂贵。 基因工程方法可大量合 成抗菌 肽， 但是目前还存在技术上问题， 比如易受蛋白酶攻击， 表达产物对宿主细胞有毒性， 在应 用中可能存在安全问题等。 因此， 人们开始研究另一种替 抗产品抗菌 脂肽。 [0004]抗菌脂肽是芽孢杆菌属不 同菌株代谢产生的脂肽， 它是两亲性化物质， 比抗菌肽 有更好的抗菌效果， 分子小， 序列短， 有效降低 成本， 且芽孢杆菌属的代谢产物脂肽对多种 细菌有好的抑菌效果。 发明内容 [0005]本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷， 本发明提出了一种地衣芽 孢杆菌和枯草芽孢杆菌 混合发酵的方法， 通过地衣芽孢杆菌和枯草芽孢 杆菌混合 发酵产生 替抗物质， 为 开发替抗药物的选择提供了空间。 [0006]为解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案是： 一种地衣芽孢杆菌和枯草芽孢 杆菌混合发酵的方法， 具体过程如下： [0007]地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落经混合培养后， 所得菌种置于Landy液体 培养基中完成发酵 过程， 发酵时间为24 ‑72h， 发酵温度为3 0‑37℃； [0008]所述Landy培养基以质量百分比计， 包括酵母粉0.01％ ‑1％， 葡萄糖0.5％ ‑5％， 谷 氨酸钠0.01％ ‑2％， MgSO40.001％ ‑1％， KCl  0.001％ ‑1％， KH2PO40.01％‑2％， FeSO40.001％‑1％， MnSO40.001％‑1％， CuSO40.001％‑1％， 余量为水。 [0009]进一步地， 所述地衣芽孢杆菌菌落与枯草芽孢杆菌菌落于10 ‑100ml LB液体培养 基中完成混合培养过程， 于混合培养过程之中， 置于30 ‑37℃摇床中， 摇床转速为150 ‑250r/ min。 [0010]进一步地， 所述LB培养基以质量分数计， 包括酵母粉0.1％ ‑2％， 胰蛋白胨0.1％ ‑ 5％， NaCL0.1％ ‑2％， 余量为水； 所述 LB液体培 养基pH为7.3 。 [0011]进一步地， 所述菌种的接种量 为1‑10％。 [0012]进一步地， 所述Landy液体培 养基pH为7.0 。 [0013]进一步地， 所述地衣芽孢杆菌菌落或枯草芽孢杆菌菌落自固体培养基中完成扩增说　明　书 1/3 页 3 CN 115505616 A 3