(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211175070.1 (22)申请日 2022.09.26 (71)申请人 福建益昕葆生物制药有限公司 地址 363000 福建省漳州市芗城区兴亭路9 号 申请人 南昌傲农生物科技有限公司 　 福建傲农生物科技 集团股份有限公 司 (72)发明人 张志榕　覃智斌　田雷　郑甜力　 蔡冬　梁世仁　吴贤峰　吴有林　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 王闯 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C12N 1/04(2006.01) C12R 1/225(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种复合微生物制剂及其制备方法和保存 方法 (57)摘要 本发明公开了一种复合微生物制剂及其制 备方法和保存方法， 涉及微生物领域。 本发明通 过对发酵过程中的pH进行分阶段调控， 能够提高 乳杆菌和肠球菌的混合发酵效果， 平衡两种菌种 数量与活性， 提高菌剂质量， 解决乳杆菌抗逆性 弱的短板， 有效避免或减少混合发酵中出现杂 菌。 本发明还提供了保存试剂， 其能有效延长上 述复合微生物制剂的保存期限， 在30天和9 0天的 保存时限内， 菌量均没有明显的下降， 保存效果 优于于现如今的乳杆菌和肠球菌复合微生态制 剂， 大大促进了生产活动。 权利要求书2页 说明书11页 CN 115354005 A 2022.11.18 CN 115354005 A 1.一种复合微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 其包括： 将乳杆菌的种子液和肠球菌 的种子液混合后发酵； 发酵 过程中， 按3个阶段对发酵培 养基中的pH进行调控： 第一阶段， 调控pH为6.6～6.8； 第二阶段， 调控pH为5.9 ～6.1； 第三阶段， 调控pH为5.0～5.2； 其中， 第一阶段为发酵的第 0～(6～10)小时； 第二阶段为发酵的第(6～10)～(14～18) 小时； 第三阶段为发酵的第(14～18)～(28～32)小时。 2.根据权利要求1所述的复合微生物制 剂的制备方法， 其特征在于， 第 一阶段为发酵的 第0～(7～9)小时， 第二阶段为发酵的第(7～9)～(15～17)小时， 第三阶段为发酵的第(15 ～17)～(29～31)小时； 优选地， 第一阶段为发酵的第0～8小时， 第二阶段为发酵的第8～16 小时， 第三阶段为发酵的第16～3 0小时； 优选地， 所述制备 方法包括采用pH调控剂对发酵培 养基中的pH进行调控； 优选地， 所述pH调控剂包括： 体积分数为1％～20 ％的氢氧化钠和/或体积分数为1％～ 20％的盐酸。 3.根据权利要求1或2所述的复合微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 所述乳杆菌的 种子液和所述肠球菌的种子液的活菌数比为： (0.5～ 2)： (0.5～ 2)； 优选地， 所述乳杆菌选自鼠李糖乳杆菌、 干酪乳杆菌、 德氏乳杆菌、 植物乳杆菌、 罗伊氏 乳杆菌和嗜酸乳杆菌中的至少一种； 所述肠球菌包括粪肠球菌和屎肠球菌中的至少一种； 优选地， 所述发酵的条件 包括： 36～38℃， 转速为 40～50rpm， 不通气； 优选地， 所述发酵培 养基的初始pH为7.0～7.2。 4.根据权利要求3所述的复合微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 按重量分数计， 所 述发酵采用的发酵培养基包括以下组分： 葡萄糖2％～2.4％， 麦芽糖1％～1.2％， 麸皮1％ ～1.2％， 蛋白胨1％～1.2％， 酵母浸粉1％～1.2％， 乙酸钠0.5％～0.6％， 一水硫酸镁 0.02％～0.24％， 一水硫酸锰0.02％～0.24％， 磷酸氢二钾0.2％～0.24％和余 量水。 5.根据权利要求1或2所述的复合微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法 还包括对发酵后的菌液进行 过滤； 优选地， 所述过滤的步骤包括： 将所述发酵后的菌液经振荡筛过滤， 得到的滤液与水按 体积比为(1～3)： (1～3)混合， 然后经陶瓷膜过 滤器浓缩至与原菌液相同的体积。 6.一种复合微生物制剂， 其特征在于， 其由权利要求1～5任一项所述的复合微生物制 剂制备获得。 7.一种复合微生物制剂的试剂 盒， 其特征在于， 其包括如权利要求6所述的复合微生物 制剂。 8.一种复合微生物制剂的保存试剂， 其特征在于， 按重量份数计， 所述保存试剂的主要 成分包括： 葡萄糖0.5～0.6份、 玉米淀粉2～2.4份、 抗坏血酸钠0.2～0.24份、 七水硫酸亚铁 0.48～0.5份、 磷酸氢二钾0.4～0.48份、 磷酸二氢钾0.08～0.1份、 亚麻酸4～4.8份、 单油酸 甘油酯0.5～0.6份、 羧甲基壳聚糖0.4～0.5份和氯化钠0.85～0.9份。 9.一种复合微生物制剂， 其特征在于， 其包括： 权利要求6所述的复合微生物制剂和权 利要求8所述的复合 微生物制剂的保存试剂； 优选地， 复合 微生物制剂和保存试剂的质量比为10 0： (1～30)；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115354005 A 2优选地， 复合 微生物制剂和保存试剂的质量比为10 0： (11.56～15.12)。 10.一种复合微生物制剂的保存方法， 其特征在于， 其包括： 将权利要求6所述的复合微 生物制剂与权利要求8所述的复合 微生物制剂的保存试剂混合； 优选地， 复合 微生物制剂和保存试剂的质量比为10 0： (1～30)； 优选地， 复合 微生物制剂和保存试剂的质量比为10 0： (11.56～15.12)。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115354005 A 3