(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202211169183.0 (22)申请日 2022.09.26 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 115261289 A (43)申请公布日 2022.11.01 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.25354 2022.07.20 (73)专利权人 山东省科学院生态研究所 （山 东 省科学院中日友好 生物技术研究 中心） 地址 250100 山东省济南市历城区彩石镇 经十东路28789号 (72)发明人 谢雪迎　张新建　周方园　范素素　 张广志　吴晓青　赵晓燕　周红姿　 王琳琳　(74)专利代理 机构 济南舜源专利事务所有限公 司 37205 专利代理师 尹俪娟 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/27(2020.01) A01P 3/00(2006.01) A01P 1/00(2006.01) C12R 1/38(2006.01) 审查员 陈佩 (54)发明名称 硝基还原假单胞菌PNr-1及其制品和对草莓 叶部病害防治的应用 (57)摘要 本发明涉及微生物 植物保护应用技术领域， 具体涉及一种硝基还原假单胞菌PNr ‑1及其制品 和对草莓叶部病害防治的应用。 硝基还原假单胞 菌 （Pseudomonas  nitroreducens ） PNr‑1已于 2022年07月20日保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心， 保藏地址为北京市朝 阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号为CGMCC   No.25354。 该硝基还原假单胞菌PNr ‑1及其制品 对草莓叶部病害具有明显生物防治作用， 尤其能 有效抑制草莓 灰霉病、 草莓炭疽病、 草莓叶枯病、 草莓轮斑病和草莓花叶病毒病病原， 对草莓的生 产栽培具有重大应用价 值。 权利要求书1页 说明书8页 CN 115261289 B 2022.11.29 CN 115261289 B 1.一株硝基还原假单胞菌 （ Pseudomonas nitroreducens ） PNr‑1， 其特征在于， 该菌株 已于2022年07月20日保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏地址为 北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号 为CGMCC No.25354。 2.一种如权利要求1所述的硝基还原假单胞菌PNr ‑1在抑制草莓灰霉病、 草莓炭疽病、 草莓叶枯病或草莓轮 斑病上的应用。 3.一种如权利要求1所述的硝基还原假单胞菌PNr ‑1的菌剂， 其特征在于， 制备方法为 向硝基还原假单 胞菌PNr‑1的发酵液中加入硅藻土， 吸附结束后干燥， 即得。 4.如权利要求3所述的菌剂， 其特征在于， 将活化的硝基还原假单胞菌PNr ‑1接种于液 体LB培养基中震 荡培养至对 数期， 获得用于发酵的种子液 Ⅰ， 将种子液 Ⅰ接种至发酵培养基 Ⅰ 中培养， 得到硝基还原假单 胞菌发酵 液； 发酵培养基 Ⅰ包括如下组分： 豆粕粉35g/L、 蛋白胨10g/L、 葡萄糖35g/L、 NaCl  3g/L、 CaCl2 1g/L、 MgSO4·7H2O 0.8g/L、 K2HPO4·3H2O 0.5g/L、 KH2PO4 1.5g/L和FeSO4·7H2O  0.1g/L， 余 量为水； 发酵条件为32~34℃， 通气保压0.05~0.1MPa， 含氧量保持25%， 转速160~180r/min， 发酵 过程中保持发酵液pH7.0~7.5， 培养36~40h后至稳定期检测活菌总量， 活菌计数浓度不低于 1.3×1010cfu/mL， 发酵 结束。 5.一种如权利要求3所述的菌剂在抑制草莓灰霉病、 草莓炭疽病、 草莓叶枯病或草莓轮 斑病上的应用。 6.一种如权利要求1所述的硝基还原假单胞菌PNr ‑1的代谢产物， 其特征在于， 制备方 法为过滤硝基还原假单胞菌PNr ‑1的发酵液， 收集上清液并加入乙酸乙酯萃取， 取下层， 经 超低温真空冷冻干燥， 即得。 7.如权利要求6所述的代谢产物， 其特征在于， 将活化的硝基还原假单胞菌PNr ‑1接种 于液体LB培养基中震 荡培养10h， 获得用于发酵的种子液 Ⅱ， 将种子液 Ⅱ接种至发酵培养基 Ⅱ中培养， 得到硝基还原假单 胞菌发酵 液； 发酵培养基 Ⅱ包括如下组分： 酵母浸膏提取物5g/L、 大豆蛋白胨10g/L和NaCl  10g/L， 余量为水； 发酵条件为30~32℃， 通气保压0.05~0.1MPa， 含氧量保持25%， 摇床转速160r/min， 发酵 培养48h， 发酵 结束。 8.一种如权利要求6所述的代谢产物在抑制草莓花叶病毒病上的应用。 9.一种草莓叶部病 害防治剂， 其特征在于， 包括如权利要求3所述的菌剂和如权利要求 6所述的代谢产物。 10.一种如权利要求9所述的草莓叶部病害防治剂在抑制草莓灰霉病、 草莓炭疽病、 草 莓叶枯病 、 草莓轮斑病或草莓花叶病毒病上的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261289 B 2硝基还原假单胞菌PNr ‑1及其制品和对草莓叶部病害防治 的 应用 技术领域 [0001]本发明涉及微生物植物保护应用技术领域， 具体涉及一种硝基还原假单胞菌P Nr‑ 1及其制品和对草莓叶部病害防治的应用。 背景技术 [0002]草莓为蔷薇科草莓属浆果类多年生草本植物， 在全世界已有300多年的栽培历史。 其果实果肉鲜美， 风味独特， 富含维生素、 矿物质、 茶多酚、 花青素等， 营养价值、 保健功效和 经济价值皆高， 且生长周期短、 方便管理， 已成为世界上广泛栽培的重要经济作物之一。 其 栽培面积和产量在世界浆果类水果生产中位居第二。 我国近年来已成为世界草莓生产和消 费第一大国， 种植面积超过140千公顷， 其中东部地区种植面积占比43.4%， 中部地区种植面 积占比26.4%， 西部地区占比19.4%， 东北地区占比10.9%。 随着对草莓需求量的增加与栽培 面积的不断扩大， 一系列的影响草莓生产的病害的发生。 其中， 尤以草莓叶部病害发生影响 最为严重， 对草莓产量和品质造成严重的影响。 [0003]叶部病害是草莓上最严重 的病害之一， 会造成草莓 的大幅减产甚至绝收。 目前针 对草莓叶部病害主要采用化学防治的方法， 农药的过量滥用容易引起人畜中毒， 环境污染， 伤害有益生物， 长期使用农药还会使得病原产生抗药性。 另一方面， 随着生活水平的日益提 高， 人们对食品安全的重视日益增强， 农药高残留和残留造成的环境污染问题， 食品安全问 题和人类健康问题， 引起各国的重视， 相继加强农药管理。 因此， 生物防治替代化学农药成 了当前研究的热点。 [0004]生物防治是借助拮 抗微生物或者其次生代谢物质来防治病害的一种防治方法。 近 年来， 有益微生物防控植物病害 是替代化学农药的主要方法之一。 目前， 常见的生物防治菌 有假单胞菌、 芽孢杆菌、 酵母菌、 链霉菌、 巴氏杆菌、 木霉等。 其中， 有益假单胞菌是植物 根际 最普遍的微生物种类， 具有分布广﹑ 数量多﹑ 营养需要简单﹑ 繁殖快﹑ 竞争定殖力强等特点， 是主要的生物防治因子之一， 其丰富的种类提供了多样的保护作用机制 。 它能保护作物根 部不受病原 等侵害， 也能减除部 分土壤污染， 同时它可作为一种改善植物健康的替代物， 是 近年来生物防治的热点之一。 有益假单胞菌具有对生态环境友好、 施用方法便捷、 不会产生 抗药性等优点， 逐渐成为国内外防治作物病害的研究热点。 [0005]为解决草莓生产种植中化学农药施用带来的环境污染、 人畜安全等问题， 同时利 于可持续农业的发展， 提供一种能够用于草莓叶部病害防治的有益假单胞菌， 对于草莓产 业的绿色生产十分重要。 发明内容 [0006]针对草莓叶部病害防治中因化学农药过量施用对果实污染导致的食品安全隐患 问题， 本发明提供一种硝基还原 假单胞菌PNr ‑1及其制品和对草莓叶部病害防治的应用， 该 硝基还原假单胞菌PNr ‑1及其制品对草莓叶部病害具有明显生物防治作用， 尤其能有效抑说　明　书 1/8 页 3 CN 115261289 B 3