(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211181294.3 (22)申请日 2022.09.27 (71)申请人 淮阴师范学院 地址 223300 江苏省淮安市长江西路1 11号 (72)发明人 钱时权　李静雯　刘珊珊　唐雨婷　 刁恩杰　谢鹏　梁肖娜　 (74)专利代理 机构 北京方圆嘉 禾知识产权代理 有限公司 1 1385 专利代理师 戴嵩玮 (51)Int.Cl. C12P 21/04(2006.01) C07K 7/58(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 乳酸钙在提高枯草芽孢杆菌合 成杆菌霉素D 的应用和乳酸钙发酵培 养基及方法 (57)摘要 本发明属于本发明属于微生物发酵技术领 域， 具体涉及乳酸钙在提高枯草芽孢杆菌合成杆 菌霉素D的应用和乳酸钙发酵培养基及方法。 本 发明提供了乳酸钙在提高枯草芽孢杆菌合成杆 菌霉素D的应用， 对枯草芽孢杆菌进行发酵培养 时利用乳酸钙配制发酵培养基可以提高杆菌霉 素D的产量。 本发明乳酸钙能促进芽孢杆菌的杆 菌霉素D合成酶基因表达进而有效提高杆菌霉素 D的产量。 实施例结果表明： 应用本发明提供的乳 酸钙发酵培养基对枯草芽孢杆菌进行发酵培养 获得的杆菌 霉素D的产量明显提高。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115478088 A 2022.12.16 CN 115478088 A 1.乳酸钙在提高枯 草芽孢杆菌合成杆菌霉素D的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 所述乳酸钙包括 L‑乳酸钙。 3.一种乳酸钙 发酵培养基， 其特征在于， 所述乳酸钙 发酵培养基以水为溶剂， 包含以下 浓度的组分： 酵母膏0.5～1.0g/L、 L ‑谷氨酸2.0～5.0g/L、 葡萄糖5.0～20.0g/L和乳酸钙 3.5～9.5g/L。 4.一种提高杆菌霉素D产量的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 采用权利要求3所述乳 酸钙发酵培养基对枯草芽孢杆菌种子液进行发酵培养获得杆菌霉素D； 所述发酵培养过程 分批补料乳酸钙发酵培 养基。 5.根据权利要4所述的方法， 其特征在于， 所述发酵培养过程中分批补料乳酸钙发酵培 养基的次数为3次； 所述发酵培养的条件包括： 所述枯草芽孢杆菌种子液接种于乳酸钙 发酵培养基后培养 48～84h后补加新的乳酸钙发酵培养基， 随后每隔15～21h补加新的乳酸钙发酵培养基， 最 后一次补料发酵后获得发酵 液。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 每次补加的新的乳酸钙 发酵培养基的体积 为初始的乳酸钙发酵培 养基体积的30％～55％。 7.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述发酵培养的温度为30～37℃， 转速为 150～200r/min； 所述发酵培 养的总时间为108～19 2h。 8.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌种子液的接种量为乳酸 钙发酵培 养基体积的4％～6％。 9.根据权利要求4或8所述的方法， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌种子液的制备包括： 枯草芽孢杆菌接种于种子培养基， 于33～37℃培养至种子培养基的OD600为0.8～1.0获得枯 草芽孢杆菌种子液。 10.根据权利 要求4所述方法， 其特征在于， 所述杆菌霉素D包括杆菌霉素D  C14同系物、 杆菌霉素D  C15同系物、 杆菌霉素D  C16同系物和杆菌霉素D  C17同系物中的一种或多种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115478088 A 2乳酸钙在提高枯草芽孢杆菌合成杆菌霉素D的应用和乳酸钙 发酵培养基 及方法 技术领域 [0001]本发明属于微生物发酵技术领域， 具体涉及乳酸钙在提高枯草芽孢杆菌合成杆菌 霉素D的应用和乳酸钙发酵培 养基及方法。 背景技术 [0002]杆菌霉素D是由枯草芽孢杆菌中非核糖体肽合酶催化合成的一种属于iturin家族 的抗菌脂肽。 受潮的粮食很容易因霉变而产生真菌毒素(如黄曲霉毒素和赭曲霉毒素等)， 而杆菌霉素D对农业病原真菌(如黄曲霉和赭曲霉等)具有很强的抑制作用。 因此， 杆菌霉素 D在保障粮食和食品安全以及防治真菌污染等方面都具有重要应用前景。 但是， 枯草芽孢杆 菌在常规培养基进行发酵培养时合成杆菌霉素D的能力有限， 杆菌霉素D的产量低， 限制 了 杆菌霉素D的大规模工业化应用。 现有技术中多应用以酵母膏， L ‑谷氨酸和葡萄糖组成的培 养基生产杆菌毒素D， 但是杆菌霉素D的产量低。 中国专利CN110016490A一种用于生产杆菌 霉素D的发酵培养基和生产杆菌霉素D的方法公开了利用玉米秸秆 纤维素酶酶解上清液、 酵 母提取物、 L ‑谷氨酸钠和KH2PO4混合制备用于生产杆菌霉素D的发酵培养基， 虽然提高了枯 草芽孢杆菌发酵培养生产杆菌霉素D的产量， 但是培养基的制备方法比较复杂； 因此急需一 种提高杆菌霉素D产量的、 制备简单的发酵培 养基。 发明内容 [0003]本发明的目的是提供了乳酸钙在提高枯草芽孢杆菌合成杆菌霉素D的应用， 将乳 酸钙添加在发酵培养基中对枯草芽孢杆菌进行发酵培养生产杆菌霉素D， 能够提高杆菌霉 素D的产量。 [0004]为了解决上述 技术问题， 本发明提出以下技 术方案： [0005]本发明提供了 乳酸钙在提高枯 草芽孢杆菌合成杆菌霉素D的应用。 [0006]优选的， 所述乳酸钙包括 L‑乳酸钙。 [0007]本发明提供了一种乳酸钙发酵培养基， 所述乳酸钙发酵培养基以水为溶剂， 包含 以下浓度的组分： 酵母膏0.5～1.0g/L、 L ‑谷氨酸2.0～ 5.0g/L、 葡萄糖5.0～2 0.0g/L和乳酸 钙3.5～9.5g/L。 [0008]本发明提供了一种提高杆菌霉素D产量的方法， 包括以下步骤： 采用上述技术方案 所述乳酸钙发酵培养基对枯草芽孢杆菌种子液进行发酵培养获得杆菌霉素D； 所述发酵培 养过程分批补料乳酸钙发酵培 养基。 [0009]优选的， 所述发酵培 养过程中分批补料乳酸钙发酵培 养基的次数为3次； [0010]所述发酵培养的条件包括： 所述枯草芽孢杆菌种子液接种于乳酸钙发酵培养基后 培养48～84h后补加新的乳酸钙发酵培养基， 随后每隔15～21h补加新的乳酸钙发酵培养 基， 最后一次补料发酵后获得发酵 液。 [0011]优选的， 每次补加的新的乳酸钙发酵培养基的体积为初始的乳酸钙发酵培养基体说　明　书 1/7 页 3 CN 115478088 A 3