(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211196526.2 (22)申请日 2022.09.28 (71)申请人 澳优乳业 （中国） 有限公司 地址 410200 湖南省长 沙市望城区旺 旺东 路2号 (72)发明人 黄玉军　狄丽君　顾瑞霞　汪家琦　 马文龙　印伯星　潘丽娜　康文丽　 杨仁琴　吴忠坤　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 张雪娇 (51)Int.Cl. C12N 1/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/225(2006.01)C12R 1/25(2006.01) C12R 1/46(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 冻干保护剂、 其制备方法及应用、 菌体的冻 干方法 (57)摘要 本发明提供了一种冻干保护剂， 包括： 蛋白、 糖类化合物、 糖醇类化合物、 盐类化合物与水； 所 述蛋白为植物蛋白和/或脱脂动物蛋白； 所述冻 干保护剂中颗 粒的平均粒径为100～ 300nm。 与现 有技术相比， 本发明通过控制冻干保护剂中颗粒 的粒径可以降低菌体在冻干过程的损伤， 提高了 菌体的冻干存活率。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 115505534 A 2022.12.23 CN 115505534 A 1.一种冻干保护剂， 其特征在于， 包括： 蛋白、 糖类化合物、 糖醇类化合物、 盐类化合物 与水； 所述蛋白为 植物蛋白和/或脱脂动物蛋白； 所述冻干保护剂中颗粒的平均粒径为10 0～300nm。 2.根据权利要求1所述的冻干保护剂， 其特征在于， 所述盐类化合物为钠 盐和/或钾盐； 所述冻干保护剂中钠离 子和/或钾离 子的浓度为0.0 5mol/L～0.2mo l/L。 3.根据权利要求1所述的冻干保护剂， 其特征在于， 包括： 50g/L～80g/L蛋白、 20g/L～ 60g/L糖类化合物、 20g/L～6 0g/L糖醇类化 合物、 0.0 5mol/L～0.2mo l/L盐类化 合物与水。 4.根据权利要求1所述的冻干保护剂， 其特征在于， 所述植物蛋白选自大豆蛋白、 火麻 蛋白、 大米蛋白与核桃蛋白中的一种或多种； 所述脱脂动物蛋白选自脱脂 乳； 所述糖类化合物选自蔗糖、 海藻糖与乳糖中的一种或多种； 所述糖醇类化 合物选自山梨醇、 甘露醇与麦 芽糖醇中的一种或多种； 所述盐类化 合物选自谷氨酸钠、 谷氨酸钾、 柠檬酸钠与柠檬酸钾中的一种或多种。 5.一种权利要求1所述的冻干保护剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括： S1)将蛋白与水混合后， 经 水合、 冰浴超声、 加热处 理， 得到蛋白水 溶液； S2)将蛋白水 溶液、 糖类化合物、 糖醇类化 合物与盐类化 合物混合， 得到冻干保护剂。 6.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 所述水合的温度为3℃～6℃； 所述水 合的时间为6～12h； 冰浴超声的时间为5～15mi n； 所述加热处 理的温度为5 0℃～70℃； 所述加热处 理的时间为20～40mi n； 所述冰浴超声为间歇式超声； 所述间歇式超声每工作3～8s停止1～2s； 所述冰浴超声 的功率为100～800W。 7.权利要求1～4任意一项所述的冻干保护剂或权利要求5～6任意一项所述制备方法 制备的冻干保护剂在菌体冻干中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述菌体为嗜热链球菌菌体、 屎肠球菌菌 体、 植物乳杆菌 菌体与发酵乳杆菌 菌体中的一种或多种。 9.一种菌体的冻干方法， 其特 征在于， 包括： 将菌体与权利要求1所述冻干保护剂混合， 依次经梯度冷冻、 升华干燥与解析干燥后， 得到菌粉。 10.根据权利要求9所述的冻干方法， 其特征在于， 所述梯度冷冻具体为： 先在2℃～6℃ 条件下预冷2～6h， 然后降温至 ‑30℃～‑10℃预冷冻2～6h， 再降温至 ‑80℃～‑70℃冷冻6～ 12h， 得到冷冻料； 所述升华干燥具体为： 先在 ‑60℃～‑40℃维持20～40min， 然后升温至 ‑5℃～‑20℃维 持20～30h； 所述升华干燥的真空度为0.2 ～0.6Pa； 所述解析干燥的温度为5℃～15℃； 所述 解析干燥的真空度为0.2 ～0.6Pa。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115505534 A 2冻干保护剂、 其制备方 法及应用、 菌 体的冻干方 法 技术领域 [0001]本发明属于微生物工程技术领域， 尤其涉及一种冻干保护剂、 其制备方法及 应用、 菌体的冻干方法。 背景技术 [0002]益生菌在预防和调理肠道疾病方面具有显著作用， 足够数量的益生菌能有效定植 肠道， 形成菌群优势， 改善肠道菌群平衡。 近年来， 益生菌的益生作用及良好的安全性得到 越来越多的关注。 [0003]真空冷冻干燥是目前制备益生菌 发酵剂的常用方法。 但是， 冷冻干燥过程中， 水转 变为冰带来生物和物理变化会导致菌株受到 “机械损伤 ”和“溶液损伤 ”， 如蛋白质等生物大 分子降解或变性， 细胞形态和功能破坏； 冻结过程中细胞外的溶液逐渐浓缩， 电解质的浓度 明显增大， 胞外渗透压升高， 细胞脱水， 导致细胞膜和胞内蛋白质等生物大分子彼此接近， 发生脂质体融合、 蛋白构象和细胞膜相变化， 导 致冻干存活率降低。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明要解决的技术问题在于提供一种冻干保护剂、 其制 备方法及应 用、 菌体的冻干方法， 该冻干保护剂可提高菌体的冻干存活率。 [0005]本发明提供了一种冻干保护剂， 包括： 蛋白、 糖类化合物、 糖醇类化合物、 盐类化合 物与水； [0006]所述蛋白为 植物蛋白和/或脱脂动物蛋白； [0007]所述冻干保护剂中颗粒的平均粒径为10 0～300nm。 [0008]优选的， 所述盐类化合物为钠盐和/或钾 盐； 所述冻干保护剂中钠离子和/或钾离 子的浓度为0.0 5mol/L～0.2mo l/L。 [0009]优选的， 包括： 50g/L～80g/L蛋 白、 20g/L～60g/L糖类化合物、 20g/L～60g/L糖醇 类化合物、 0.0 5mol/L～0.2mo l/L盐类化 合物与水。 [0010]优选的， 所述植物蛋白选自大豆蛋白、 火麻蛋白、 大米蛋白与核桃蛋白中的一种或 多种； [0011]所述脱脂动物蛋白选自脱脂 乳； [0012]所述糖类化合物选自蔗糖、 海藻糖与乳糖中的一种或多种； [0013]所述糖醇类化 合物选自山梨醇、 甘露醇与麦 芽糖醇中的一种或多种； [0014]所述盐类化 合物选自谷氨酸钠、 谷氨酸钾、 柠檬酸钠与柠檬酸钾中的一种或多种。 [0015]本发明还提供了一种上述的冻干保护剂的制备 方法， 包括： [0016]S1)将蛋白与水混合后， 经 水合、 冰浴超声、 加热处 理， 得到蛋白水 溶液； [0017]S2)将蛋白水溶液、 糖类化合物、 糖醇类化合物与盐类化合物混合， 得到冻干保护 剂。 [0018]优选的， 所述水合的温度为3℃～6℃； 所述水合的时间为6～12h；说　明　书 1/7 页 3 CN 115505534 A 3