(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211193880.X (22)申请日 2022.09.28 (83)生物保 藏信息 CGMCCNo.23665 2021.10.25 (71)申请人 天津小薇生物科技有限公司 地址 300000 天津市武清区开源道3号 (72)发明人 马乐辉　李云旭　刘瑞峰　李华文　 韩清波　 (74)专利代理 机构 北京科创易佰知识产权代理 事务所(普通 合伙) 16113 专利代理师 刘雪娇 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) A61K 35/745(2015.01)A61P 37/08(2006.01) A23L 33/135(2016.01) A23G 4/12(2006.01) A23C 9/152(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一株乳双歧杆菌BR001及其发酵方法与改善 过敏的应用 (57)摘要 本发明涉及一株乳双歧杆菌BR001及其发酵 方法与改善过敏的应用， 属于微生物的技术领 域。 乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis) BR001， 其在中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.23665， 保 藏日期为2021年10月25日， 保藏机构地址： 北京 市朝阳区北辰西路1号院3号。 本发明还提供了一 种乳双歧杆菌BR001在制备改善过敏的产品中的 应用。 本发明提供的乳双歧杆菌BR001的生产成 本大大降低， 更利于在其他领域的推广。 本发明 的乳双歧杆菌BR001的发酵批次差异减小， 提高 了菌株活力一致性， 增加了产品质量的稳定性。 本发明的乳双歧杆菌BR001可用于缓解过敏症 状。 权利要求书2页 说明书8页 附图2页 CN 115505543 A 2022.12.23 CN 115505543 A 1.一株乳双歧杆菌BR001， 其特征在于， 所述一株乳双歧杆菌(Bifidobacterium   lactis)BR001， 其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC   No.23665， 保藏日期为2021年10月25日， 保藏机构地址： 北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 2.一种如权利要求1所述的乳双歧杆菌BR001的高密度发酵方法， 其特征在于， 所述发 酵的具体步骤如下： (1)菌种活化 将液氮罐中保存的乳双歧杆菌BR001甘油管取出， 室温自然溶解； 在无菌条件下， 取菌 种于乳双歧杆菌活化培养基内， 于37℃厌氧恒温培养箱 中培养12 ‑36h； 取深层活化菌种传 入下一代培 养基中深层培 养， 如此反复活化传至第2 ‑5代； (2)种子培养 将步骤(1)活化的乳双歧杆菌BR001按照1％ ‑5％的接种量接种至已灭菌 的液体MRS培 养基中， 于 37℃静置厌氧培 养12‑36h； (3)发酵培 养 将步骤(2)培养好的种子液按照1％ ‑5％的接种量转接至已灭菌的改良MRS培养基中， 于37℃， 厌氧培养12 ‑36h， 培养过程中控制 发酵液中糖的浓度≤1g/L， 控制 发酵液pH值为 6.5‑7.0； 当发酵液OD600和菌体湿重(离心条件： 8000rpm， 4℃， 2min)不再增加时， 停止发 酵， 得到高密度的乳双歧杆菌BR0 01发酵液， 立即降温至10℃ ‑15℃； (4)收集菌体 通过高速离心或微滤膜进行菌体收集， 处理过程控制温度≤15℃收集菌体后， 往其中 加纯化水至发酵 液体积， 再进行处 理至清夜的电导 率<5s/m； 收集菌体， 4℃保存。 3.如权利要求2所述的高密度发酵方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中活化培养基为： 脱 脂乳7％， 酵母 浸粉2％， 酪蛋白胨2％， 抗坏血酸0.1％， 葡萄糖2％； 1 15℃灭菌20mi n。 4.如权利要求2所述的高密度发酵方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中改良MRS培养基 为： 糖蜜10g/L， 酵母浸粉5g/L， 酵母蛋白胨2.5g/L， 玉米浆干粉5g/L， L ‑赖氨酸1.5g/L， L ‑苏 氨酸1.5g/L， L ‑天冬氨酸1.5g/L， L ‑异亮氨酸1.5g/L， K2HPO42g/L， KH2PO41.5g/L， MgSO4· 7H2O 2g/L， 硫酸亚铁0.05g/L， 硫酸锌0.05g/L， 硫酸锰0.05g/L， VB120.005g/L， 烟酰胺 0.005g/L， 生物素0.0 05g/L， 盐酸硫胺0.0 05g/L， pH 6.5‑7.0。 5.如权利 要求2所述的高密度发酵方法， 其特征在于， 所述步骤(2)和步骤(3)中的厌氧 培养方法为： 往发酵 罐中通入无菌的N2或CO2， 控制罐压为0.01 ‑0.03Mpa。 6.如权利要求2所述的高密度发酵方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中的控制发酵液中 糖浓度是通过 连续流加糖蜜溶 液实现的。 7.一种包 含如权利要求1所述的乳双歧杆菌BR0 01的发酵制品。 8.如权利要求7所述的发酵制品， 其特征在于， 所述发酵制品包括液体制剂和固体制 剂。 9.一种制备如权利要求8所述的发酵制品的方法， 其特 征在于， 具体步骤如下： (1)复配 首先在配置罐中加入适量的纯化水， 将菌体转移至配料罐中， 充分搅匀， 加纯化水制成 0.5×1012‑1.0×1012cfu/mL的菌悬 液， 控制温度10℃ ‑15℃； 准确称取以下辅料： 10％ ‑20％全脂奶粉、 10％ ‑15％低聚果糖、 10％ ‑20％异麦芽糊精、权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115505543 A 25％‑10％海藻糖、 5％ ‑10％菊糖， 加入适量的10℃ ‑15℃纯化水中， 充分溶解， 定容至菌悬液 的体积， 制成保护剂溶 液； 将保护剂溶 液缓慢加入菌悬 液中， 混合均匀， 待用； (2)干燥 将步骤(1)的物料通过进料泵输送至干燥机内， 通过布料器均匀的分布在传送带上， 控 制真空度≥0.098Mpa， 传送带在加热板上匀速运转， 加热板内通入热水， 温度自动控制25 ℃‑30℃， 干燥后得固体制剂。 10.一种如权利要求1所述的乳双歧杆菌BR0 01在制备改善过 敏的产品中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115505543 A 3