(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211195569.9 (22)申请日 2022.09.29 (71)申请人 山东格研生物技 术有限公司 地址 261500 山东省潍坊市高密市高新 一 路158号 (72)发明人 薛晓飞　徐美青　张翼飞　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12M 1/38(2006.01) C12M 1/34(2006.01) C12M 1/02(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其 制备方法和装置 (57)摘要 本发明公开了一种快速培养嗜冷菌的培养 基和应用及其制备方法和装置， 属于微生物技术 领域， 用于快速培养嗜冷菌， 培养基组分包括酵 母浸粉、 脱脂奶粉、 葡萄糖、 胰蛋白胨、 3号胆盐、 氯化钠、 乳糖、 磷酸二氢钾、 磷酸氢二钾、 氯化锰、 结晶紫、 TTC、 琼脂， pH值为6.8 ‑7.2， 制备方法为 将以上所有组分加到一种搅拌加热一体锅中， 将 加热溶解好的培养基通过锅底外部自带的冷却 通道冷却至40℃ ‑60℃后灌装至一次性无菌平皿 中， 待培养基凝固后进行电子束辐照灭菌， 本培 养基配方简单， 能实现嗜冷菌的快速培养并计 数， 培养周期缩短为3天， 便于观察分析， 且制备 方法相比传统灭菌工艺节约灭菌和冷却时间， 降 低能耗， 利于 推广应用。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 115287242 A 2022.11.04 CN 115287242 A 1.一种快速培养嗜冷菌的培养基， 其特征在于： 每升培养基中含有2 ‑4g酵母浸粉、 0.5 ‑ 1g脱脂奶粉、 1 ‑3g葡萄糖、 18 ‑22g胰蛋白胨、 1 ‑2g 3号胆盐、 4 ‑6g乳糖、 4‑6g氯化钠、 3 ‑5g磷 酸氢二钾、 1 ‑3g磷酸二氢钾、 2 ‑6g氯化锰、 0.001 ‑0.005g结晶紫、 0.01 ‑1g TTC、 12‑15g琼脂， pH值为6.8‑7.2。 2.一种如权利要求1所述的快速 培养嗜冷菌的培 养基的制备 方法， 其特 征在于： （1） 首先， 称量2 ‑4g所述酵母浸粉、 0.5 ‑1g所述脱脂奶粉、 1 ‑3g所述葡萄糖、 18 ‑22g所述 胰蛋白胨、 1 ‑2g 所述3号胆 盐、 4‑6g所述乳糖、 4 ‑6g所述氯化钠、 3 ‑5g所述磷酸氢二钾、 1 ‑3g 所述磷酸二氢钾、 2 ‑6g所述氯化锰、 0.001 ‑0.005g所述结晶紫、 0.01 ‑1g 所述TTC、 12 ‑15g所 述琼脂； （2） 将步骤 （1） 中各组分加到搅拌加热一体锅中， 加入1000mL去离子水， 并额外加入5% ‑ 10%去离子水以补充加热 所蒸发的水分； （3） 利用所述磷酸氢二钾 和磷酸二氢钾调节步骤 （2） 中的混合液pH值 为6.8‑7.2； （4） 打开搅拌加热一体锅开关， 边搅拌边加热至10 0℃煮沸13 ‑17分钟； （5） 打开锅体下部的管道开关， 将步骤 （4） 的混合液经过设置在搅拌加热一体锅中的冷 却装置冷却至40 ‑60℃后， 灌装至一次性无菌培养皿中， 10 ‑50kGy电子束辐照灭菌， 制得所 述嗜冷菌 培养基。 3.一种制备如权利要求1所述的快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅， 包括 锅盖 （10） 和锅体 （20） ， 其特征在于： 锅盖 （10） 上设有搅拌装置， 搅拌装置的转速为10 ‑20r/ min， 锅体 （20） 内壁上设有容纳腔， 容纳腔内电连接有加热管 （30） ， 锅体 （20） 底部设有管道 （40） ， 管道 （40） 的外表面设有冷却装置 。 4.根据权利要求3所述的制备快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅， 其特征 在于： 搅拌装置包括设置在锅盖 （10） 上且伸入锅体 （20） 内腔中的搅拌轴 （11） ， 锅盖 （10） 上 安装有驱动搅拌轴 （11） 转动的驱动电机 （100） ， 搅拌轴 （11） 的下部设有下搅拌叶片 （12） ， 所 述下搅拌叶片 （12） 的侧部及底部均设有能与锅体 （20） 内壁及底 壁接触的橡胶刮板 （13） ， 所 述搅拌轴 （1 1） 的上部环设有 多个向不同方向延伸的侧搅拌叶片 （14） 。 5.根据权利要求4所述的制备快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅， 其特征 在于： 所述冷却装置包括环设在管道 （40） 外壁的套管 （50） ， 所述套管 （50） 上环设有冷却腔 （60） ， 套管 （50） 上部设有与 冷却腔 （60） 连通的冷却液出管 （51） ， 套管 （50） 下部设有与 冷却 腔 （60） 连通的冷却液进管 （52） 。 6.根据权利要求1所述的快速培养嗜冷菌的培养基的应用， 其特征在于： 应用在快速培 养嗜冷菌中。 7.一种应用如权利要求1所述的培养基快速培养嗜冷菌的方法， 其特征在于： 将临床采 集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、 梯度稀释， 加入到所述的快速培养嗜冷 菌的培养基中进行培 养， 实现嗜冷菌的快速 培养。 8.根据权利 要求7所述的快速培养嗜冷菌的方法， 其特征在于： 培养温度为11 ‑13℃， 培 养周期为3天。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115287242 A 2一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其制备方 法和装置 技术领域 [0001]本发明属于微生物技术领域， 具体涉及一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其 制备方法和装置 。 背景技术 [0002]嗜冷菌是一类菌的总称。 这类菌是能够在 ‑20℃至15℃低温下生长和繁殖的微生 物， 最适生长温度一般不超过15℃， 由于这个温度与其它菌最适宜生长温度相比要冷许多 （普通细菌适应生长温度为25℃~40℃） ， 故此得名嗜冷菌。 嗜冷菌是低温储藏牛乳和食品中 最活跃的一类微生物， 与其他微生物相比， 其细胞膜中含有 大量的多不饱和脂肪酸， 熔点降 低， 使细胞膜在低 温下能有良好的流动性； 此外， 嗜冷菌中还含有抗冻蛋白和冷休克蛋白， 这些特性有利于嗜冷菌在低温下生长 。 [0003]嗜冷菌的存在严重影响了乳制品的产品质量和保质周期， 同时也是冰箱冷藏可生 长感染菌， 可以引起食物中毒等不良反应， 急性甚至能够导致死亡。 因此， 快速培养并检测 这类菌有利于食品安全检测把控， 和临床上 快速诊断。 [0004]传统的平板检测法是取样品稀释液接种至琼脂培养基， 在5℃~6.5℃恒温培养10 天后计数。 平板检测嗜冷菌具有简单、 观察方便、 计数准确等优点， 局限是耗时比较长 。 [0005]目前还有一些较先进的快速检测方法， 如间接检测蛋白酶活性法， 直接荧光过滤 法， 电阻抗法， PCR  法， 流动血细胞法， 酶联免疫吸附技术等， 其优点是快速、 准确， 局限是操 作步骤繁琐、 成本过高。 [0006]综上所述， 现有的培养基培养周期太长， 无法满足嗜冷菌的快速培养， 和检测这类 细菌， 而较先进的快速检测方法操作繁琐、 成本过高， 不利于食品安全检测把控和临床上的 快速诊断。 发明内容 [0007]为解决现有技术存在的以上问题， 本发明提供了一种快速培养嗜冷菌的培养基和 应用及其制备方法和装置， 本发明可以提供一个简便、 直观、 成本低的快速检测方法， 适用 于快速、 高密度培 养嗜冷菌的培 养基及其制备 方法和应用。 [0008]本发明所采用的技 术方案为： 一种快速 培养嗜冷菌的培 养基， 其特 征在于： 每升培养基中含有2 ‑4g酵母浸粉、 0.5 ‑1g脱脂奶粉、 1 ‑3g葡萄糖、 18 ‑22g胰蛋白 胨、 1‑2g 3号胆盐、 4 ‑6g乳糖、 4 ‑6g氯化钠、 3 ‑5g磷酸氢二钾、 1 ‑3g磷酸二氢钾、 2 ‑6g氯化锰、 0.001‑0.005g结晶紫、 0.01 ‑1g TTC、 12‑15g琼脂， pH值 为6.8‑7.2。 [0009]一种快速 培养嗜冷菌的培 养基的制备 方法， 其特 征在于： （1） 首先， 称量2 ‑4g所述酵母浸粉、 0.5 ‑1g所述脱脂奶粉、 1 ‑3g所述葡萄糖、 18 ‑22g 所述胰蛋白胨、 1 ‑2g 所述3号胆 盐、 4‑6g所述乳糖、 4 ‑6g所述氯化钠、 3 ‑5g所述磷酸氢二钾、 1‑3g所述磷酸二氢钾、 2 ‑6g所述氯化锰、 0.001 ‑0.005g所述结晶紫、 0.01 ‑1g 所述TTC、 12 ‑说　明　书 1/7 页 3 CN 115287242 A 3