(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211229725.9 (22)申请日 2022.10.09 (71)申请人 北京中医药大学 地址 100013 北京市朝阳区北三环东路1 1 号 (72)发明人 孙志蓉　耿业业　张铮茹　王尚涛　 (74)专利代理 机构 北京知迪知识产权代理有限 公司 11628 专利代理师 王胜利 (51)Int.Cl. C05G 3/00(2020.01) C05G 3/80(2020.01) C05G 5/30(2020.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/41(2006.01) (54)发明名称 一种甘草的根瘤菌肥及其制备方法 (57)摘要 本发明公开一种甘草的根瘤菌肥及其制备 方法， 涉及作物专用肥技术领域， 以解决现有技 术中甘草生长需要施加化肥， 导致甘 草中化学物 质残留， 环境污染， 同时伴随甘草高生物量的是 甘草中有效成分含量降低的问题。 所述甘草的根 瘤菌肥， 以重量份计， 包括： 根瘤菌菌液50～60 份， 载体基质2 00～250份， 促结瘤 物质1～1.5份， 包衣剂50～ 60份； 所述促结瘤物质包括巨大芽孢 杆菌、 枯草芽孢杆菌、 异甘草素、 金雀异黄酮、 水 解酪素。 上述促结瘤物质的协同作用具有诱导根 瘤菌侵入根毛和促进结瘤的作用。 将其用于甘草 种植中， 可以提高甘草的产量和品质。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115536466 A 2022.12.30 CN 115536466 A 1.一种甘草的根瘤菌肥， 其特征在于， 以根瘤菌肥重量份计， 包括： 根瘤菌菌液50～60 份， 载体基质200～250份， 促结瘤物质1～1.5份， 包 衣剂50～60份； 所述促结瘤物质包括巨大芽孢杆菌、 枯 草芽孢杆菌、 异 甘草素、 金雀 异黄酮、 水解酪素。 2.根据权利要求1所述的甘草的根瘤菌肥， 其特征在于， 以促结瘤物质的添加量计， 所 述巨大芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 异甘草素、 金雀异黄酮、 水解酪素的添加 重量比为(1.5～ 2.5):(0.5～1.5):(0.5～1.5):(0.5～1.5):(40～6 0)。 3.根据权利要求1所述的甘草的根瘤菌肥， 其特征在于， 以促结瘤物质的添加量计， 所 述巨大芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 异甘草素、 金雀异黄酮、 水解酪素的添加 重量比为(1.8～ 2):(0.9～1.1):(0.9 ～1.1):(0.9 ～1.1):(45～5 5)。 4.根据权利要求1～3任一所述的甘草的根瘤菌肥， 其特征在于， 所述根瘤菌菌液为由 中慢生型天山根瘤菌制备而成的菌液； 和/或， 所述载体基质包括稻壳炭、 发酵羊粪， 以所述 载体基质的添加量计， 所述稻壳炭、 发酵 羊粪的添加重量比为(0.5～1.5):(2.5～3.5)； 和/ 或， 所述包 衣剂为钠基膨润土 。 5.根据权利要求1～4任一所述的甘草的根瘤菌肥， 其特征在于， 以根瘤菌肥的重量份 计， 还包括营养元 素15～20份， 土壤改良剂2 ～3份。 6.根据权利要求5所述的甘草的根瘤菌肥， 其特征在于， 所述营养元素包括尿素、 磷酸 二氢钾、 硫酸钾， 所述尿素、 磷酸二氢钾、 硫酸钾的添加重量比为(1.5～2.5):(1.5～2.5): (0.5～1.5)； 和/或， 所述土壤改良剂为施地佳土壤调理剂。 7.一种甘草的根瘤菌肥的制备方法， 其特征在于， 用于制备权利要求1～6任一所述的 根瘤菌肥， 包括以下步骤： (1)根瘤菌活化： 将 ‑80℃冰箱冻存的根瘤菌在室温下溶解后， 均匀涂布于酵母菌形态 琼脂固体培 养基上， 于27～ 29℃培养箱内进行活化3～5d； (2)根瘤菌菌液制备： 将步骤(1)中活化的根瘤菌接种于酵母菌形态琼脂液体培养基 中， 在24～26℃、 160～180r/min摇床培养46～50h， 培养至根瘤菌菌液OD620值为0.4～0.8， 得根瘤菌 菌液； (3)按以上配比， 先将载体基质、 促结瘤物质混合均匀后， 加入步骤(2)得到的根瘤菌菌 液， 搅拌均匀， 再加入 包衣剂包裹均匀， 即得成品。 8.根据权利要求7所述的甘草的根瘤菌肥的制备方法， 其特征在于， 所述酵母菌形态琼 脂固体培养基包括酵母粉1.0g， 甘露醇10.0g， K2HPO4 0.5g， MgSO40.2g， NaCl  0.1g， CaCl2  0.1g， 琼脂15.0g， 甜菜碱10g， 水10 00mL， 调节pH值至 6.8～7.5 。 9.根据权利要求7所述的甘草的根瘤菌肥的制备方法， 所述酵母菌形态琼脂液体培养 基包括酵母粉1.0g， 甘露醇10.0g， K2HPO4 0.5g， MgSO4 0.2g， NaCl0.1g， CaCl2 0.1g， 甜菜碱 0.1g， 水10 00mL， 调节pH值至 6.8～7.5 。 10.根据权利要求7所述的甘草的根瘤菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述冻 存的根瘤菌为根瘤菌菌液于OD620值为0.4～0.8时， 与甘油1:1混合后冻存； 所述涂布的涂布 量为每25mL培 养基200 μL菌液； 步骤(2)中所述接种的接种量 为每200mL培养基50接种环。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115536466 A 2一种甘草的根瘤菌肥及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及作物 专用肥技 术领域， 尤其涉及一种甘草的根瘤菌肥及其制备 方法。 背景技术 [0002]甘草为(Glycyrrhiza  uralensis  Fisch.)多年生豆科植物， 其干燥根和根茎入 药， 具有补 脾益气、 清热解毒、 祛痰止咳、 缓急止痛、 调和诸药等功效， 是常用的大宗药材。 现 代研究表明， 甘草具有抗菌、 抗炎、 抗病毒、 抗肿 瘤、 抗氧化、 降血糖、 调血脂、 抗动脉粥样硬 化等多种作用， 被广泛应用于医药、 食品、 日化等行业。 目前野生甘草已成为国家二级保护 植物， 甘草资源供求矛盾日益突出， 人工种植甘 草成为缓解供求矛盾的有效途径。 目前多 数 地区的人工甘草销路不畅， 主 要原因是有效成分(甘草 酸)含量低。 [0003]肥料作为作物的 “粮食”， 对作物的产量及品质有十分重要的影响。 目前甘草人工 种植多大量施用化肥， 不仅浪费人力、 物力， 导致化学物质残留， 环 境污染， 同时伴随甘 草高 生物量的是甘草中有效成分含量降低， 尤其是甘草酸的含量。 根瘤菌肥是促进豆科作物结 瘤、 固氮的接种剂。 我国较广泛应用根瘤菌肥料的作物主要有花生、 大豆、 苕子、 紫云英等， 合适的根瘤菌剂能使作物获得显著而稳定的增产效果。 甘草作为豆科植物也具有结瘤特 性， 因此， 能否通过研究一种适合甘 草生长及有效成分积累的根瘤菌肥， 在保证人工甘草产 量的同时提高人工甘草的品质， 减少化肥的使用， 具有重要的现实意 义。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种甘草的根瘤菌肥及其制备方法， 用于提高人工甘草的 品质， 减少化肥的使用。 [0005]为了实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0006]第一方面， 本发明提供一种甘草的根瘤菌肥， 以重量份计， 包括： 根瘤菌菌液50～ 60份， 载体 基质200～250份， 促结瘤物质1～1.5份， 包 衣剂50～60份； [0007]所述促结瘤物质包括巨大芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 异甘草素、 金雀异黄酮、 水解 酪素。 [0008]与现有技术相比， 本发明提供的甘草的根瘤菌肥中， 促结瘤物质包括巨大芽孢杆 菌、 枯草芽孢杆菌、 异甘草素、 金雀异黄酮、 水解酪素， 其中， 水解酪素与异甘草素和金雀异 黄酮协同作用， 能够提高甘草在高盐环境下的生存能力， 进而提高促结瘤的效果。 巨大芽孢 杆菌和枯草芽孢杆菌均属于菌粉， 两者与根瘤菌有协同增效的作用， 选巨大芽孢杆菌和枯 草芽孢杆菌作为土壤益生菌， 能帮助改良土壤、 促进营养吸收。 上述各组分协同作用， 具有 诱导根瘤菌侵入根毛和促进结瘤的作用。 将其用于甘草种植中， 可以大大提高甘草的产量 和品质。 经验证， 施用本发明实施例中制备得到的根瘤菌肥对甘草单株根重和甘草中甘草 酸、 甘草苷含量均有大幅提升 。 [0009]进一步地， 以促结瘤物质的添加量计， 所述巨大芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 异甘草 素、 金雀异黄酮、 水解酪素的添加重量比为(1.5～2.5):(0.5～1.5):(0.5～1.5):  (0.5～说　明　书 1/7 页 3 CN 115536466 A 3