(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211244467.1 (22)申请日 2022.10.12 (71)申请人 西安交通大 学 地址 710049 陕西省西安市碑林区咸宁西 路28号 (72)发明人 金鹏康　金鑫　许路　白雪　石烜　 (74)专利代理 机构 西安智大知识产权代理事务 所 61215 专利代理师 段俊涛 (51)Int.Cl. C12M 1/00(2006.01) C12N 1/14(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C02F 11/02(2006.01) (54)发明名称 含油污泥生物降解过程中真菌-细菌协同作 用的研究模型与方法 (57)摘要 本发明提供了含油污泥生物降解过程中真 菌‑细菌协同作用的研究模型与方法。 以100mL医 用无菌注射器为基础， 切去头部， 自下而上分层 设置真菌种子液、 灭菌后接种石油烃降解细菌石 油烃污染污泥、 石英砂隔离层、 灭菌无污染污泥 及无菌纱布， 构建细菌及污染物真菌传递模型。 以上述模型为基础， 设置对照试验， 实验结束后 测定上层无污染污泥中石油烃污染物及细菌含 量， 并通过分子生物学手段对比与下层接种的石 油烃降解细菌的同源性， 从而验证 真菌对细菌及 污染物的转移效果。 所述模型原料易得、 构造简 单， 所述方法步骤精简， 可操作性强， 对研究含油 污泥生物 修复过程中真菌 ‑细菌协同作用有重要 意义。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115537292 A 2022.12.30 CN 115537292 A 1.一种含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型， 其特征在于， 包括自 上而下依次设置的无菌纱布层(1)、 灭菌无污染泥样层(2)、 石英砂层(3)、 石油烃污染泥样 层(4)和真菌接种物层(5)； 所述石油烃污染泥样层(4)接种有降解菌， 所述真菌 ‑细菌协同 作用， 主要指真菌将土壤中的有机物进行传递， 细菌依靠真菌菌丝脱离营养缺乏的土壤区 域。 2.根据权利要求1所述含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型， 其特 征在于， 所述研究模型以无菌的100mL医用注射器为外壳， 所述真菌接种物层(5)为真菌种 子液； 所述石油烃污染泥样层(4)为30g含石油烃污染物污染的人工模拟污泥； 所述石英砂 层(3)为3g无菌石英砂， 以分 隔上下两泥样层； 所述 灭菌无污染泥样层(2)为30g无菌无污染 的泥样； 所述无菌纱布层(1)为灭菌的八层纱布， 对顶部进行封口， 以防止外来微生物的污 染， 同时保证微 生物生长氧气的供 给。 3.根据权利要求1或2所述含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型， 其特征在于， 所述真菌 接种物层(5)中， 真菌的接种量 为每克泥样接入0.12g菌体细胞。 4.根据权利要求1或2所述含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型， 其特征在于， 所述石油烃污染泥样层(4)同时接入氮源、 磷源， 石油烃含量为80mg/kg， 含水 率控制在45％～5 5％， 以油泥体积计， 氮源投加量 为0.3mol/L， 磷源投加量 为0.01mo l/L。 5.根据权利要求4所述含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型， 其特 征在于， 所述氮源为尿素， 磷 源为KH2PO4。 6.根据权利要求1或2所述含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型， 其特征在于， 所述灭菌无污染泥样层(2)含水率控制在45％～5 5％。 7.一种含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究方法， 利用权利要求1所述 含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型实现， 其特征在于， 包括如下步 骤： (1)以所述研究模型为实验组， 不接种真菌的试验为空白对照组， 使用同等体积的无菌 去离子水代替真菌种子液， 以排除自然的虹吸作用而导 致的石油烃转移现象； (2)将各组试验模型保持竖直， 置于恒温培养箱中， 28℃培养14天， 每两天分别对各个 模型试验组取出一管作为样品， 取样时， 通过推动注射器的活塞使样品上移， 从而分别获取 待测上、 下两层的污泥基质； (3)测定上下两层的石油烃含量、 细菌含量及与下层石油烃降解菌的同源性， 验证真菌 对污染物的转移效果， 评价含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌的协同作用。 8.根据权利要求7所述研究方法， 其特征在于， 通过如下步骤确定与含油污泥中的真菌 配伍的降解菌： ①高通量测序鉴别含油污泥中存在的真菌； ②基于所述真菌 ‑细菌的协同作用， 验证各真菌对污染物及降解菌的转移效果； ③降解菌与各真菌进行配伍性实验， 筛 选出能够与降解菌共生的真菌 。 9.根据权利要求8所述研究方法， 其特征在于， 在筛选出能够与降解菌共生的真菌后， 采用菌剂固定化 技术， 制备类似球 状菌剂， 其中真菌 置于外层， 降解菌 置于内层。 10.根据权利要求9所述研究方法， 其特征在于， 将所述类似球状菌剂投加至相应的待 处理石油烃污泥。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115537292 A 2含油污泥生物降解过 程中真菌‑细菌协同作用的研究 模型与 方法 技术领域 [0001]本发明属于含油污泥微生物修复技术领域， 特别涉及一种含油污泥生物降解过程 中真菌‑细菌协同作用的研究模型与方法。 背景技术 [0002]钻采废水处理后产生大量的剩余污泥， 其中危害环境的主要成分是石油烃、 化学 处理剂和重金属。 目前， 对含油污泥的处理处置方法主要包括焚烧法、 固化/稳定化、 氧化法 以及生物法等， 其中生物法因节约能源、 运行费用低、 作用持久等特点， 具有广阔的应用前 景。 [0003]强化微生物是否可以与污泥中有机污染物有效的接触是关乎生物强化策略是否 可以成功的重要因素。 微生物对于自身的生长环境变化比较敏感， 常常通过协调自身代谢 来维持自身的生长稳定。 另外， 土壤本身的胶黏与聚集特性会约束细菌及有机污染物的迁 转、 移动， 然而真菌却可以依靠菌丝分布与土壤的孔隙中， 并在土壤的孔隙中形成菌丝网 络。 经计算， 土壤中的菌丝含量为0.2mg/g土壤时， 就相当于长达100 m的菌丝， 也就是真菌的 这种生长与繁殖 方式决定 了真菌较好的迀移特性。 [0004]含油污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌是否具有协同作用， 即： 真菌菌丝是否可以将 土壤中的有机物进行传递， 细菌是否可以依靠真菌菌丝脱离营养缺 乏的土壤区域， 目前尚 无直观的研究模型与方法。 发明内容 [0005]为了克服上述现有技术的缺点， 本发明的目的在于提供一种含油污泥生物降解过 程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型与方法， 以揭示并表征含油污泥生物降解过程张的真 菌‑细菌协同作用； 据此作用， 可对 含油污泥生物降解做出技 术指导。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用的技 术方案是： [0007]一种含油 污泥生物降解过程中真菌 ‑细菌协同作用的研究模型， 包括自上而下依 次设置的无菌纱布层、 灭菌无污染泥样层、 石英砂层、 石油烃污染泥样层和真菌接种物层； 所述石油烃污染泥样层接种有降解菌， 所述真菌 ‑细菌协同作用， 主要指真菌将土壤中的有 机物进行传递， 细菌依靠真菌 菌丝脱离营养缺乏的土壤区域。 [0008]在一个实施例中， 所述研究模型以无菌的100mL医用注射器为外壳， 所述真菌接种 物层为真菌种子液； 所述石油烃污染泥样层为30g含石油烃污染物污染的人工模拟 污泥； 所 述石英砂层为3g无菌石英砂， 以分 隔上下两泥样层； 所述 灭菌无污染泥样层为30g无菌无污 染的泥样； 所述无菌纱布层为灭菌的八层纱布， 对顶部进行封口， 以防止外来微生物的污 染， 同时保证微 生物生长氧气的供 给。 [0009]在一个实施例中， 所述真菌接种物层中， 真菌的接种量为每克泥样接入0.12g菌体 细胞(湿重)。说　明　书 1/4 页 3 CN 115537292 A 3