(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211270394.3 (22)申请日 2022.10.18 (71)申请人 南通大学 地址 226019 江苏省南 通市啬园路9号 申请人 南通市肿瘤医院 　 南通市老年康复医院 (72)发明人 夏栋林　李佳　冯灵子　杨燕光　 陈超　王小平　吴玉　 (74)专利代理 机构 南京汇盛专利商标事务所 (普通合伙) 32238 专利代理师 裴咏萍 (51)Int.Cl. A61K 35/742(2015.01) A61K 47/58(2017.01) A61K 9/06(2006.01)A61K 47/36(2006.01) A61P 1/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种枯草芽孢杆菌口服药物 (57)摘要 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌口服药物， 通过以下方法制备： S1、 诱导枯草芽孢杆菌产生 生物被膜， 并对其进行阳性聚合物修饰， 使其表 面电位为正； S2、 水凝胶包被外膜修饰阳性聚合 物的枯草芽孢杆菌， 制备枯草芽孢杆菌耐酸水凝 胶。 本发明通过对枯草芽孢杆菌诱导， 产生生物 被膜， 提高细菌在肠道中的黏附性； 同时利用阳 性聚合物对细胞进行修饰， 结合水凝胶的包载， 能够有效抵抗胃蛋白膜的攻击， 提高枯草芽孢杆 菌的存活率， 且包载过程在中性条件下即可完 成， 进一步保留了枯 草芽孢杆菌的活力。 权利要求书1页 说明书5页 附图8页 CN 115414389 A 2022.12.02 CN 115414389 A 1.一种枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌口服药物通过以下方 法制备： S1、 诱导枯草芽孢杆菌产生生物被膜， 并对其进行阳性聚合物修饰， 使其表面电位为 正； S2、 水凝胶包被外膜修饰阳性聚合物的枯 草芽孢杆菌， 制备枯 草芽孢杆菌耐酸水凝胶。 2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌耐酸 水凝胶中， 枯 草芽孢杆菌的包载量 为4.7×104～3.2×105cfu/ml。 3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 所述阳性聚合物采用 EDAC或PAH 。 4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 对已生成生物被膜的枯 草芽孢杆菌进 行表面阳性聚合物 修饰采用如下方法： 配置25 mg/ml的阳性聚合物溶液， 向具 有生物被膜的枯草芽孢杆菌菌液中加入所述阳性聚合物溶液， 所述阳性聚合物溶液与枯草 芽孢杆菌 菌液体积比为20 0 μl:1ml。 5.根据权利要求1或3所述的枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 所述步骤S1中诱导 枯草芽孢杆菌产生生物被膜的具体步骤为： 在MSgg液体培养基中培养细菌， 条件为37℃恒 温振荡箱， 转速220rpm， 培养12h； 然后取10ul涂板于MSgg培养平板上， 37℃恒温培养箱中培 养48h， 得到具有生物被膜的枯 草芽孢杆菌 。 6.根据权利要求4所述的枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 所述步骤S2中水凝胶包 被外膜修饰阳性聚合物的枯草芽孢杆菌的具体方法如下： 配置2％的羧甲基壳聚糖溶液， 将 外膜修饰阳性聚合物的枯草芽孢杆菌与羧甲基壳聚糖溶液混合， 搅拌均匀； 再加入25℃下 的饱和氯化钙溶液， 充分搅拌后， 将溶液于常温下静置， 去除上清液， 取沉淀调节pH值至 7.0， 即得所述枯草芽孢杆菌耐酸水凝胶； 所述羧甲基壳聚糖溶液与外膜修饰阳性聚合物的 枯草芽孢杆菌的加入比例为5ml： 5 ×104～1×106个细菌； 所述羧甲基 壳聚糖溶液与25℃下 的饱和氯化钙溶 液的体积比为10： 1～5： 1。 7.根据权利要求6所述的枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 所述饱和氯化钙溶液加 入后， 采用磁力搅拌， 搅拌条件： 磁力搅拌器、 常温搅拌， 转速为 450rpm， 搅拌时间15mi n。 8.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌口服药物， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌采用 WB800N菌种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115414389 A 2一种枯草芽孢杆菌 口服药物 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一种枯草芽孢杆菌 口服药物， 能有效提 高益生菌口服 递送过程中存活率和肠道黏附率。 背景技术 [0002]许多疑难疾病， 如阿尔茨海默病、 糖尿病和一些癌症， 已被证明与肠道细菌的代谢 有关。 益生菌的补充具有抑制病原体定植和发挥有益作用的能力， 是积极调节肠道菌群平 衡的有效策略。 虽然粪便菌群移植在预防和治疗方面取得了成功， 但侵入性手术和 不确定 的成分在很大程度上限制 了手术的实施， 这不可避免地导致患者依从性低， 以及胃肠道刺 激和潜在的并发症。 因此， 一种非侵入性的方法， 如口服将益生菌定植到肠道中是很有意义 的， 可以为益生菌治疗提供一种替代方法。 但是益生菌口服过程中容易受到 胃蛋白酶的分 解， 使得绝大部分失活或死 亡， 使得治疗结果下降。 [0003]枯草芽孢杆菌(BS)作为一种非常有用的益生菌， 分泌的多种胞外酶已应用到许多 不同领域中， 其中脂肪酶和丝氨酸纤溶蛋白酶(即纳豆激酶)被广泛应用于医药行业。 枯草 芽孢杆菌脂肪酶具有多种催化能力， 其在动物或人体的消化道中与 原本存在的消化酶类共 同发挥作用， 使消化道处于健康的平衡状态。 但是直接口服细菌， 能够到达肠道的微乎其 微， 从而限制了枯 草芽孢杆菌的功效。 发明内容 [0004]本发明的目的是为了提供一种在口服 递送过程中存活率和黏附率较高的益 生菌。 [0005]为了达到上述目的， 本发明提供了一种枯草芽孢杆菌 口服药物， 通过以下方法制 备： [0006]S1、 诱导枯草芽孢杆菌产生生物被膜， 并对其进行阳性聚合物修饰， 使其表面电位 为正； [0007]S2、 水凝胶包被外膜修饰阳性聚合物的枯草芽孢杆菌， 制备枯草芽孢杆菌耐酸水 凝胶。 [0008]本发明通过对枯草芽孢杆菌诱导， 产生生物被膜， 提高细菌在肠道中的黏附性； 同 时利用阳性聚合物对细胞进行修饰， 结合水凝胶的包载， 能够有效抵抗胃蛋白膜的攻击， 提 高枯草芽孢杆菌的存活率， 且包载过程在中性条件下即可完成， 进一步保留了枯草芽孢杆 菌的活力。 [0009]本发明枯 草芽孢杆菌口服药物的具体制备 方法如下： [0010]S1、 诱导生物被膜并进行表面 修饰 [0011]在MSgg液体培养基中培养细菌， 条件为37℃恒温振荡箱， 转速220rpm， 培养12h。 然 后取10ul涂板于MSgg培养平板上， 37℃恒温培养箱中培养48 h， 得到具有生物外膜的细菌菌 液。 [0012]配置25mg/mL的阳性聚合物溶液(EDAC水溶液， 浓度为25mg/mL， 并调节到pH7.4或说　明　书 1/5 页 3 CN 115414389 A 3