(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211288106.7 (22)申请日 2022.10.20 (71)申请人 云南师范大学 地址 650500 云南省昆明市呈贡区雨 花片 区1号 (72)发明人 高润池　王晓燕　施利民　 (74)专利代理 机构 云南盛恒知识产权代理有限 公司 53224 专利代理师 陈艺琴 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/36(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12Q 1/04(2006.01)C12R 1/22(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种盘基网柄菌细胞同步 化方法 (57)摘要 本发明公开了一种盘基网柄菌细胞同步化 方法， 主要包括： S1： 盘基网柄菌细胞培养； S2： 盘 基网柄菌细胞饥饿处理； S3： 饥饿处理中细胞分 裂情况信息采集； S4： 向饥饿处理后的盘基网柄 菌细胞重新提供营养物质； 本发 明综合了人工同 步化和自然同步化的优缺点之后， 鉴于盘基网柄 菌细胞生命周期的特殊性， 选择了除人工同步化 和自然同步化之外的另外一种同步化方法， 即先 饥饿处理盘基网柄菌一段时间后再加入其营养 物质克雷伯氏菌， 使其在短时间内能够相对快速 地进行同步化分裂到某一时期。 该研究方法在缩 短了同步化时间的同时也可以有效防止药物之 间的干扰对实验结果产生影响。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115433684 A 2022.12.06 CN 115433684 A 1.一种盘 基网柄菌细胞同步 化方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 盘基网柄菌细胞培 养； S2： 盘基网柄菌细胞饥饿处 理； S3： 给饥饿处 理的盘基网柄菌细胞重新 提供食物KA(克来伯氏菌)； S4： 分时段采集重新给予KA后的细胞分裂情况。 2.根据权利要求1所述一种盘基网柄菌细胞同步化方法， 其特征在于， 所述盘基网柄菌 细胞的接种方法及条件为在12孔板中加入2mL的HL5培养基， 接种104个指数生长期的细胞， 轻轻混匀， 2 2℃环境中使细胞贴壁。 3.根据权利要求1所述一种盘基网柄菌细胞同步化方法， 其特征在于， 所述饥饿处理细 胞经DB缓冲液 处理， 处理方法为用真空泵将12孔板中的培养液吸去， 沿孔壁轻轻的加入2ml 新配置的DB缓冲液； 吸去DB缓冲液， 再次加入2ml新的DB缓冲液， 22℃环境中使细胞接收饥 饿刺激。 4.根据权利要求1所述一种盘基网柄菌细胞同步化方法， 其特征在于， 所述饥饿处理方 法为DB缓冲液， 将细胞分别饥饿1、 2、 3、 4、 5、 6 h后在缓冲液中重新给予食物KA。 5.根据权利要求1所述一种盘基网柄菌细胞同步化方法， 其特征在于， 所述分裂情况信 息采集前用真空泵装置将12孔板内的DB吸去， 重新加入混有KA的DB缓冲液， 用实时录像系 统分别记录饥饿1 ‑6h的细胞分裂情况， 获得细胞分裂 较多的对应饥饿时间范围。 6.根据权利要求1所述一种盘基网柄菌细胞同步化方法， 其特征在于， 所述饥饿处理范 围确定后， 在细胞分裂现象比较明显的时间区域重新加入营养物KA， 用实时录像系统分别 记录饥饿1 ‑6h的细胞分裂情况， 获得细胞分裂 较多的对应饥饿时间范围。 7.根据权利要求6所述一种盘基网柄菌细胞同步化方法， 其特征在于， 所述分裂现象比 较明显的时间区域 为大于2.5 h之后。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115433684 A 2一种盘基网柄菌细胞同步化方 法 技术领域 [0001]本发明属于细胞培 育技术领域， 具体涉及一种盘 基网柄菌细胞同步 化方法。 背景技术 [0002]盘基网柄菌是一种真核生物， 因其培养条件简单、 生活周期短、 易于观察等特点， 常被选作研究细胞发育、 运动、 分裂的简单模式生物。 同时， 盘基网柄菌细胞与哺乳动物的 细胞在行为、 结构和信号通路方面有很多类似之处。 它作为一种重要模式生物在研究多细 胞起源、 发育和人类其他致病机理等方面都发挥着重要作用， 同时也为解决哺乳动物发育 中的一些难题提供了帮助。 与哺乳动物细胞表达载体相比， 盘基网柄菌具有成本低、 细胞生 长快、 易于大规模培养等优点， 到今天为止已经成功表达了多种 具有生物活性的复杂糖蛋 白。 因此， 盘 基网柄菌 很可能成为糖蛋白表达系统的重要表达系统。 [0003]近年来， 肿瘤、 癌症等都是严重威胁着人类健康的疾病。 研究发现， 这些疾病的发 育都与其细胞周期的调控密切相关， 无论是原癌基因的激活还是抑癌基因的失控， 最终都 与细胞周期的调控相联系。 研究表明， 许多抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡或杀死肿瘤细胞 的敏感性几乎都依赖于细胞周期， 而群体中的细胞在一般条件下都处于不同的细胞周期时 相中， 不同时期的细胞对药物的敏感程度不同。 将细胞同步化处理到同一时期， 选择适当时 间点给予抗瘤、 抗癌药物乃至放射治疗作为突破口或将成为提高肿瘤、 癌症治疗效果的一 条有效途径。 所以为了更好地研究某 时期细胞的增殖、 代谢、 凋亡， 我们需要利用实验的方 法将群体中处于不同时相的细胞调整为同一时相中， 这 就是细胞同步 化技术。 [0004]细胞同步化可以分为自然同步化和人工同步化两种。 自然同步化对细胞本身基本 没有伤害， 但自然同步化所需周期长、 同步化效率低； 人工同步化虽然较自然同步化效率 高， 但对细胞本身来说总会有或多或少的影响， 如何减少同步化过程中对细胞造成的伤害 是目前研究过程急需解决的问题。 发明内容 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明综合了人工同步化和自然同步化的优缺点之后， 选择了除人工同步化和自然同步化之外的另外一种同步化方法， 即先饥饿处理盘基网柄菌 一段时间后再加入其营养物质克雷伯氏菌， 使其在短时间内能够相对快速地进行同步化分 裂到某一时期 。 该研究方法在 缩短了同步化时间的同时也可以有效防止药物之 间的干扰对 实验结果产生影响； [0006]为了达到上述技术目的， 本发明是通过以下技 术方案实现的： [0007]一种盘基网柄菌细胞同步 化方法， 包括以下步骤： [0008]S1： 盘基网柄菌细胞培 养； [0009]S2： 盘基网柄菌细胞饥饿处 理； [0010]S3： 给饥饿处 理的盘基网柄菌细胞重新 提供食物KA(克来伯氏菌)； [0011]S4： 分时段采集重新给予KA后的细胞分裂情况。说　明　书 1/4 页 3 CN 115433684 A 3